Gesamt-TNF mRNA

Die Menge der Gesamt-TNF mRNA wurde sowohl im Vorderhirn als auch in den weiteren Gehirnregionen bestimmt. Zur Untersuchung der gesamt TNF mRNA Menge wurden die Primerpaare so gewählt, dass sowohl das transgene als auch das endogene TNF gemessen wurde (TNFto).

Während in den nicht transgenen, nicht infizierten Mäusen nahezu keine TNF mRNA-Expression sowohl im Vorderhirn als auch in den Gehirnregionen festgestellt werden konnte (0 - 2,5 Kopien), war in den übrigen Tiergruppen eine Amplifizierung möglich. Dabei lagen die Werte bei den ntg BDV-infizierten Mäusen bei 32 bis 39 Kopien, bei den nicht infizierten und BDV-infizierten tg+/- Mäusen zwischen 3068 und 7085 Kopien und bei den tg+/+ Tieren zwischen 6840 und 9199 Kopien im Vorderhirn (Abb. 21; Tab. 54; Tab. 55). Im Falle der weiteren einzelnen Gehirnregionen schwankten die Werte bei den ntg BDV-infizierten Tieren zwischen 5 und 49 Kopien, bei den transgenen nicht infizierten und BDV-infizierten Tieren zwischen 939 und 3508 Kopien bezogen auf die Gehirnregionen, Cortex cerebri,

Ammonshorn und Striatum (Abb. 22; Tab. 56). Im Cerebellum lagen die Werte für die transgenen Mäuse zwischen 51 und 88 Kopien.

Durch die dreifaktorielle Varianzanalyse konnte, wie beim TNFtg, sowohl ein Einfluss des Transgenstatus als auch der Gehirnregion auf die TNFto mRNA-Expression untersucht werden, welche durch den nachgeschalteten paarweisen Vergleich näher bestimmt wurden.

Bei der Untersuchung der Expression der gesamt TNF mRNA aus dem Vorderhirn wurde ein signifikanter Unterschied im paarweisen Vergleich in der Gruppe der nicht infizierten und BDV-infizierten Tiere zwischen ntg und tg+/- bzw. zwischen ntg und tg+/+ am Tag 21 p.i.

und Tag 42 p.i. (alle p<0,0001; Tab. 57) festgestellt. Die Infektion führte nur in der Gruppe der ntg Tiere zu einem signifikanten Unterschied zwischen BDV-infizierten und nicht infizierten Tieren sowohl am Tag 21 p.i. (p=0,0012) als auch am Tag 42 p.i. nach der Infektion (p<0,0001; Abb. 21).

Tab. 30: Dreifaktorielle Varianzanalyse der gesamt TNF-mRNA-Werte

Vorderhirn p-Werte Gehirnregionen p-Werte

Tag 0,7258 Region <0,0001

Transgen <0,0001 Transgen 0,5051

BDV 0,0035 BDV 0,6046

Tag x Transgen 0,4636 Region x Transgen 0,7269

Tag x BDV 0,7940 Region x BDV 0,4459

BDV x Transgen 0,0001 BDV x Transgen 0,5595

Tag x Transgen x BDV 0,6474 Region x Transgen x BDV 0,9300

Tag: Vergleich zwischen den Infektionstagen 21 und 42 post infectionem, BDV: Vergleich zwischen nicht infizierten und BDV-infizierten Mäusen, Transgen: Vergleich der 3 verschiedenen Transgenstatus (nicht transgen, heterozygot- oder homozygot transgen), Region: Vergleich zwischen den Gehirnregionen Cortex cerebri, Ammonshorn, Striatum, Cerebellum, hellgrau unterlegte Felder: signifikante Unterschiede

Bei der Untersuchung der gesamten TNF mRNA Mengen aus den Gehirnregionen 42 Tage p.i. ergaben sich in der Gruppe der transgenen Tiere signifikant geringere mRNA-Werte sowohl bei den nicht infizierten als auch bei den BDV-infizierten Mäusen im Cerebellum im Vergleich zu den anderen Gehirnregionen (Cortex cerebri, Ammonshorn, Striatum; alle p<0,0001; Tab. 58). Durch die BDV-Infektion kam es zu keiner weiteren Erhöhung der mRNA Menge bei den transgenen Mäusen in den einzelnen Gehirnarealen. Allerdings kam es bei den ntg Tieren zu einer signifikanten Erhöhung durch die BDV-Infektion im Cortex cerebri, Ammonshorn, Striatum und Cerebellum (alle p<0,0001). Während bei den nicht infizierten Mäusen im Cerebellum signifikant geringere Mengen bei ntg im Vergleich zu den tg+/- bzw. zu den tg+/+ Tieren vorlagen (p<0,0001), waren nach der BDV-Infektion im Cerebellum keine signifikanten Unterschiede zwischen den ntg und den tg+/- bzw. zwischen den ntg und den tg+/+ Tieren festzustellen (p=0,9401 bzw. p=0,5212).

Zusammenfassend betrachtet bestanden signifikant geringere TNFto Kopienzahlen bei den ntg Tieren im Vergleich zu den tg+/- und den tg+/+ Tieren in der Gruppe der nicht infizierten und BDV-infizierten Mäuse sowohl im Vorderhirn als auch in den einzelnen Gehirnregionen.

Ausgenommen davon war nur der Vergleich der mRNA-Werte im Cerebellum der ntg Tiere nach der BDV-Infektion mit den transgenen BDV-infizierten Tieren. Die BDV-Infektion wirkte sich nur in der Gruppe der ntg im Sinne einer Erhöhung der TNF mRNA-Menge sowohl im Vorderhirn als auch in den einzelnen Gehirnregionen im Vergleich zu den jeweiligen Werten der nicht infizierten Tiere aus. Ein Anstieg der TNF mRNA konnte bei den ntg Tieren allerdings im Verlauf der Infektion nicht ermittelt werden. Die BDV-Infektion führte bei den transgenen Tieren zu keiner signifikanten Erhöhung der TNFto mRNA-Werte im Vergleich zu den jeweiligen nicht infizierten Tieren. Bei den transgenen Tieren wurden signifikant geringere TNFto mRNA-Kopienzahlen im Cerebellum im Vergleich zu den trangenen TNF exprimierenden Gehirnregionen (Cortex cerebri, Ammonhorn und Striatum) festgestellt werden.

TNFto

0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000

ntg tg+/- tg+/+ ntg tg+/- tg+/+ ntg tg+/- tg+/+ ntg tg+/- tg+/+

nicht infizierte Mäuse

BDV-infizierte Mäuse

nicht infizierte Mäuse

BDV-infizierte Mäuse

21 Tage p.i. 42 Tage p.i.

Kopienzahl (normalisiert)

Abb. 21: Quantifizierung der gesamten TNF mRNA-Werte aus dem Vorderhirn

Kopienzahl mittels housekeeping Genen auf 25 ng eingesetzte RNA-Menge normalisiert, TNFto: gesamtes TNF, p.i.: post infectionem, ntg: nicht transgen, tg+/-: heterozygot transgen, tg+/+: homozygot transgen, geometrischer Mittelwert, Fehlerbalken: Streufaktor, **: p<0,01, ***: p<0,001, **: Vergleich zwischen ntg nicht infizierten und ntg BDV-infizierten Tieren am Tag 21 p.i., ***: Vergleich zwischen ntg nicht infizierten und ntg BDV-infizierten Tieren am Tag 42 p.i.

TNFto

0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000

ntg tg +/- tg +/+ ntg tg +/- tg +/+

nicht infizierte Mäuse BDV-infizierte Mäuse

Kopienzahl (normalisiert)

Cortex cerebri Ammonshorn Striatum Cerebellum

Abb. 22: Quantifizierung der gesamten TNF mRNA-Werte aus den Gehirnregionen 42 Tage p.i.

Kopienzahl mittels housekeeping Genen auf 25 ng eingesetzte RNA-Menge normalisiert, TNFto: gesamtes TNF, p.i.: post infectionem, ntg: nicht transgen, tg+/-: heterozygot transgen, tg+/+: homozygot transgen, geometrischer Mittelwert, Fehlerbalken: Streufaktor, ***: p<0,001, ***: Vergleich zwischen ntg nicht infizierten und ntg BDV-infizierten Tieren, ***: Vergleich zwischen Cortex cerebri, Ammonshorn und Striatum mit Cerebellum bei tg+/- nicht infizierten Tieren, ***: Vergleich zwischen Cortex cerebri, Ammonshorn und Striatum mit Cerebellum bei tg+/+ nicht infizierten Tieren, ***: Vergleich zwischen Cortex cerebri, Ammonshorn und Striatum mit Cerebellum bei tg+/- BDV-infizierten Tieren, ***: Vergleich zwischen Cortex cerebri, Ammonshorn und Striatum mit Cerebellum bei tg+/+ BDV-infizierten Tieren