5. DISKUSSION DER ERGEBNISSE
5.5. Histologische Untersuchung von Gewebeproben des Kattas und der Maus
Histologische Untersuchungen besitzen für den Nachweis von T. gondii grundsätzlich keine hohe Sensitivität. Ist nur eine geringe Anzahl an T.-gondii-Zysten in dem jeweiligen Gewebe vorhanden, ist die Wahrscheinlichkeit, eine solche Zyste in dem Gewebeschnitt nachzuweisen, nicht sehr groß.
Aussagekräftig ist die histologische Untersuchung daher nur im positiven Fall, ist dann jedoch ein Beweis für eine Infektion mit dem Parasiten.
Von dem Katta H24 wurde bei der Sektion Gehirnmaterial gewonnen und dieses in Mäuse inokuliert sowie für eine histologische Untersuchung benutzt. Durch den Nachweis von
T.-gondii-Zysten im Gehirn des Kattas sowie im Gehirn und in der Lunge einer Maus, die mit dem Gehirnmaterial inokuliert wurde, wurde somit in der histologischen Untersuchung bewiesen, dass der Katta H24 tatsächlich mit T. gondii infiziert war.
5.6. Ausblick
In dieser Studie wurde die Grundlage für die Etablierung eines ELISAs geschaffen, mit dem nicht humane Primaten auf T. gondii serologisch untersucht werden können. Es gelang, die Anwendbarkeit des IgG-ELISAs bei Lemuren nachzuweisen, so dass die Voraussetzung für die Durchführung eines Monitorings bei diesen Spezies geschaffen wurde.
Es wäre interessant, eine größere Anzahl an Lemuren zu untersuchen, um die Qualität des IgG-ELISAs hinsichtlich Sensitivität und Spezifität zu überprüfen und endgültige Grenzwerte festzulegen. Dafür wären jedoch negative Referenzseren notwendig.
Um die Anwendbarkeit des IgG-ELISAs auf andere Primatenspezies auszuweiten, bestünde einerseits die Möglichkeit, weitere Konjugate auszutesten, was auf Grund der zu geringen Volumina der Serumproben, die in dieser Arbeit zur Verfügung standen, nicht möglich war. Durch die Erprobung weiterer Konjugate könnte überprüft werden, ob mit diesen Reagenzien bei den Neuweltaffen die gleichen Ergebnisse ermittelt werden oder ob der in dieser Arbeit verwendete Sekundärantikörper unspezifische Reaktionen hervorgerufen hat. Zudem könnte man Tiere infizieren, um entsprechende Referenzseren für die Validierung des ELISAs bei den einzelnen Spezies zu gewinnen. Wenn man die experimentelle Infektion von nicht humanen Primaten vermeiden will, ist es wichtig, dass diejenigen Tiere, die im ELISA serologisch untersucht werden, im Falle des Verendens zur Sektion gelangen. Hier kann durch eine parasitologische Untersuchung von Gewebeproben das zuvor gewonnene Serum als positiv oder negativ beurteilt werden, so wie dies auch bei dem Katta H24 der Fall war.
Um einen serologischen Test für die Diagnose von akuten Toxoplasmosen zu etablieren, wäre die experimentelle Infektion von nicht humanen Primaten allerdings notwendig, um dabei Serum von nachweislich frisch infizierten Tieren zu gewinnen. Es ist denkbar, dass der IgG-Aviditäts-ELISA
bei einer Validierung mit diesen Referenzseren für den Nachweis von frischen T.-gondii-Infektionen geeignet ist. Es wäre ebenfalls möglich, mit solchen Referenzseren sowie eventuell mit anderen Konjugaten den IgM-ELISA erneut auszutesten.
Die Erprobung einer Vakzinierung von nicht humanen Primaten gegen T. gondii erscheint mit dem derzeitig erhältlichen Impfstoff nicht sehr sinnvoll, da selbst grundsätzliche Fragen, wie z. B. die Boosterung des Antikörpertiters erfolgen soll, bislang nicht geklärt werden konnten. Das Risiko für die Tiere übersteigt daher vermutlich den Nutzen der Impfung. Zudem wäre das Vorhandensein eines serologischen Tests zum Nachweis der Infektion die Voraussetzung für ein solches Projekt.
Insgesamt lässt sich sagen, dass prophylaktische Maßnahmen zur Vermeidung der Infektion mit dem Parasiten grundsätzlich aussichtsreicher sind, als sich im Falle eines Ausbruchs der Toxoplasmose auf eine schnelle Diagnose und Therapie zu verlassen. Weitergehende Untersuchungen sollten daher auf die Durchführung eines Monitorings ausgerichtet sein.
6. ZUSAMMENFASSUNG
BRANDT, Anna Katharina (2006):
Serologische Untersuchungen zur Toxoplasmose nicht humaner Primaten
Es wurden Serumproben von 19 Weißkopfmakis (Eulemur fulvus albifrons), 7 Kattas (Lemur catta), 19 Rhesusaffen (Macaca mulatta), 24 Totenkopfaffen (Saimiri sp.) sowie 10 weiteren Neuweltaffen gesammelt und im Sabin-Feldman-Test (SFT) und im Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) auf Antikörper gegen T. gondii untersucht. Unter Verwendung von SFT-positiven und SFT-negativen Seren der Weißkopfmakis als Kontrollseren wurde ein IgM-ELISA, ein IgG-ELISA und ein IgG-Aviditäts-IgG-ELISA zum Nachweis von Antikörpern gegen T. gondii bei nicht humanen Primaten etabliert. Bei der Bewertung des ELISAs erfolgte ein Vergleich mit den Ergebnissen aus dem SFT, der für die Untersuchung von Humanseren auf Antikörper gegen T.
gondii als Goldstandard gilt.
Für die Weißkopfmakis und Kattas stimmten die im SFT und im IgG-ELISA vorgenommenen Beurteilungen der Serumproben als positiv oder negativ weitgehend überein. Für die Totenkopfaffen ergaben sich unterschiedliche Ergebnisse, deren Ursache nicht geklärt werden konnte. Für die Rhesusaffen lagen keine Ergebnisse aus dem SFT vor. Im IgG-ELISA ergaben sich für diese Tiere ähnliche Serumverläufe wie bei den Weißkopfmakis und den Kattas, wobei die jüngsten Rhesusaffen die niedrigsten Indexwerte aufwiesen.
Bei einem Katta wurden post mortem in der histologischen Untersuchung Gewebezysten von T.
gondii nachgewiesen. Dadurch wurden für dieses Tier die im SFT und im IgG-ELISA ermittelten Ergebnisse als richtig positiv bestätigt und die grundsätzliche Anwendbarkeit des IgG-ELISAs für die Untersuchung von Lemurenseren auf Antikörper gegen T. gondii nachgewiesen.
Zur Untersuchung des Infektionsstadiums der T.-gondii-Infektionen wurde ausschließlich der IgG-Aviditäts-ELISA benutzt, da sich der IgM-ELISA als ungeeignet erwies. Die größten Unterschiede zwischen den Testansätzen des IgG-Aviditäts-ELISAs wurden bei Totenkopfaffen und Rhesusaffen festgestellt, was auf ein frühes Stadium der T.-gondii-Infektionen bei diesen Tieren hindeutete.
7. SUMMARY
BRANDT, Anna Katharina (2006):
Serological investigations about toxoplasmosis of non human primates
Serum samples of 19 white-fronted brown lemurs (Eulemur fulvus albifrons), 7 ring-tailed lemurs (Lemur catta), 19 rhesus monkeys (Macaca mulatta), 24 squirrel monkeys (Saimiri sp.) and 10 other New world monkeys were collected and tested for antibodies against T. gondii by Sabin-Feldman dye test (SFT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Using SFT positive and SFT negative sera from white-fronted brown lemurs as serumcontrols an IgM ELISA, an IgG ELISA and an IgG avidity ELISA to detect antibodies against T. gondii was established. At assessment of ELISA a comparison with the results of SFT occured which is the golden standard for testing human sera for antibodies against T. gondii.
In white-fronted brown lemurs and ring-tailed lemurs the assessments of serumsamples as positive or negative by SFT and IgG ELISA agreed to a large extent. There were different results for the squirrel monkeys, the cause of which could not be resolved. There were no results for the rhesus monkeys by SFT. For these animals similar serum titrations to white-fronted brown lemurs and ring-tailed lemurs arised by IgG ELISA – the youngest rhesus monkeys showed the lowest index values.
In one ring-tailed lemur tissue cysts of T. gondii were demonstrated post mortem by histological examination. Because of this the results found by SFT and IgG ELISA for this animal were proved to be true and the suitability of IgG ELISA for testing sera from lemurs for antibodies against T.
gondii was demonstrated.
To examine the course of T. gondii infection only the IgG avidity ELISA was used, because the IgM ELISA proved to be unsuitable. In IgG avidity ELISA the greatest differences between test series were detected in squirrel monkeys and rhesus monkeys, this suggested that there was an early course of T. gondii infection in these animals.
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