Schlußfolgerungen - Material und Methoden 23

3. Material und Methoden 23

5.5. Schlußfolgerungen

Es ließen sich mit den in dieser Arbeit angewendeten Methoden antigene Unterschiede zwischen verschiedenen CDV-Isolaten erkennen. Sowohl in der Bindung von monoklo-nalen Antik¨orpern an verschiedene CDV-Isolate zeigten sich Unterschiede als auch im

Neutralisationsverhalten von polyklonalen Seren mitverschiedenen Virusisolaten. Aller-dings waren in beiden F¨allen nur geringf¨ugige Unterschiede auszumachen. Auch ließ sich durch diese Untersuchungen nicht zwischen Impfvirusst¨ammen und Feldvirusisola-ten unterscheiden. Dies stimmt mit den Ergebnissen von Haas et al. (1997) ¨uberein, bei denen auch keine Unterschiede zwischen Impfvirusst¨ammen und Feldvirusisolaten gefunden werden konnten.

Es zeigten sich allerdings Unterschiede zwischen Impfvirusst¨ammen und Feldviru-sisolaten im Molekulargewicht einzelner Virusproteine im Western-Blot mit Anti-N-und Anti-P-Protein mAks. Solche Unterschiede waren auch schon vorher allem beim N-Protein nachgewiesen worden (Yoshida et al., 1998;Hirayamaet al., 1986; Shaps-haket al., 1982). Wodurch diese Unterschiede bewirkt werden, ließ sich allerdings nicht genau feststellen. Es k¨onnte zum einen an der unterschiedlichen Phosphorylierung des N- bzw. P-Proteins liegen. Zum anderen k¨onnten unterschiedlich große Komplexe aus N- und P-Proteine und ihre Bruchst¨ucke hier eine Rolle spielen.

In der Reaktion der Hundeseren mit den sequenz¨uberlappenden Peptiden aus den Vi-rusproteinen F, H, P, und N konnten auf jedem Protein zwei bis f¨unf Bereiche gefunden wurden, die eine verst¨arkte Antik¨orperbindung zeigten. Dies waren auch die Proteinab-schnitte, in denen sich im Verlauf der Immunisierung die st¨arksten Unterschiede zwischen Nullserum und Postimmunisierungsserum erkennen ließen. Bei diesen Bereichen kann es sich um lineare B-Zellepitope oder um Teile von diskontinuierlichen B-Zellepitopen auf dem Staupevirus handeln, speziﬁsche Bindungen von Ak (gegen CDV oder andere An-tigene gerichtet) an andere Bereiche (Mimitope) oder unspeziﬁsche Anlagerungen von Antik¨orpern an die Peptide. Um echte B-Zellepitope handelt es sich vermutlich vor al-lem in den F¨allen, bei denen die Ak-bindenen Bereiche Teile des Proteins betrafen, f¨ur die schon vorher Antik¨orperbindung oder wichtige Funktionen (z.B. Fusionsstelle des F-Proteins) beschrieben wurden. Vor allem beim H-Protein und F-Protein zeigte sich, daß ein Teil der antik¨orperbindenen Bereiche beim MV schon als Bindungsstellen monoklona-ler Antik¨orper oder als neutralisierendes Epitop beschrieben worden waren (Fournier et al., 1997;Wildet al., 1994;Huet al., 1993). Auf Grund der hohen Sequenzhomologie (F-Protein) bzw. der hohen Strukturhomologie (H-Protein) zwischen Masernvirus und CDV (Langedijk et al., 1997) ist anzunehmen, daß die Bereiche im CDV die gleiche Funktion aus¨uben wie im Masernvirus.

Es ließen sich meist ein oder zwei Bereiche auf den Proteinen erkennen, die eine unter-schiedliche Reaktion zwischen Peptiden aus verschiedenen Virusisolaten aufwiesen. Dies zeigt, daß auch bei einem Virus mit nur einem Serotyp wie CDV Unterschiede zwischen einzelnen Epitopen auftreten k¨onnen, die durch Antik¨orper erkannt werden. Es ließ sich allerdings auch hier keine generelle Unterscheidung in Impfvirusst¨amme und Feldviru-sisolate treﬀen. Da aber nicht alle Peptide, in denen Sequenzunterschiede zwischen ein-zelnen Virusisolaten zu ﬁnden waren, synthetisiert werden konnten, lassen sich keine ge-nauen Aussagen ¨uber unterschiedliche Reaktionsmuster der Seren mit den verschiedenen

Sequenzen machen. Allerdings ließ sich erkennen, daß es verst¨arkt in den Bereichen zu Reaktionen der Seren mit den Peptiden kam, in denen es besonders viele AS-Austausche zwischen den einzelnen Virusisolaten gab. Dies k¨onnte ein Hinweis darauf sein, daß es in diesen Bereichen durch die Erkennung durch das Immunsystem zu einem Selektions-druck kommt. Unterschiede zwischen Postinfektionsseren und Immunisierungsseren in der Reaktion mit den Peptiden ließen sich nicht ausmachen. Dazu zeigten alle Seren ein zu individuelles Bild der Reaktion mit den Peptiden und die Zahl der untersuchten Seren war zu klein. Es ließ sich so kein abweichendes Muster zwischen Postinfektions-seren und ImmunisierungsPostinfektions-seren erkennen. Auch ImmnunisierungsPostinfektions-seren reagierten mit Peptiden aus Feldvirussequenzen, w¨ahrend sie mit dem gleichen Peptid aus einer Impf-stammsequenz nicht reagierten. Es ist daher auf diese Weise nicht m¨oglich, durch die Reaktion von Seren mit verschiedenen Peptiden auf eine durchgemachte Staupeinfektion zu schließen. Es ließen sich daf¨ur Epitope aus konservierten Bereichen in allen Protei-nen erkenProtei-nen, die mit einer Mehrzahl der Seren reagierten. Solche Epitope, vor allem aus den beiden H¨ullproteinen H und F, k¨onnten m¨ogliche Bereiche sein, die sich f¨ur die Herstellung einer Peptidvakzine eignen w¨urden. Beim Masernvirus konnten so Peptide gefunden werden, die virusneutralisierende Ak hervorrufen und M¨ause vor einer Maser-nerkrankung sch¨utzen k¨onnen (Obeidet al., 1995;Fournieret al., 1997). Bei der Wahl von Epitopen, die zwischen den verschiedenen Virusisolaten konserviert sind, w¨are auch ein Schutz gegen die vorkommenden Feldvirusisolate gew¨ahrleistet.

In dieser Arbeit sollten unter Verwendung verschiedener immunologischer Methoden unter Verwendung monoklonaler und polyklonaler Antik¨orper Hundestaupevirusisolate auf antigene Unterschiede untersucht werden. Dabei wurde vor allem auf Unterschie-de zwischen aktuellen Feldvirussisolaten und Impfvirusst¨ammen geachtet. Dies sollte zeigen, ob die zwischen den Impfvirusst¨ammen und aktuellen Feldvirusisolaten gefun-denen genetischen Unterschiede Auswirkungen auf die Erkennung der St¨amme durch das Immunsystem haben. Dadurch k¨onnte eventuell eine schlechtere Wirksamkeit von Impfstoﬀen bewirkt werden oder auch ein schlechteres Ansprechen von diagnostischen Tests.

F¨ur diesen Zweck wurden verschiedene immunologische Methoden angewandt.

Mit polyklonalen Hundeseren wurde das Kreuzneutralisationsverhalten gegen¨uber verschiedenen CDV-St¨ammen untersucht. Es standen f¨ur die Untersuchungen zwei Impf-virusst¨amme (CDV-St¨amme Rockborn und Onderstepoort) sowie sieben Feldvirusisola-te aus den letzFeldvirusisola-ten 10 Jahren zur Verf¨ugung. Alle Seren, die neutralisierende Antik¨orper gegen CDV aufwiesen, neutralisierten dabei auch alle verwendeten CDV-St¨amme. Le-diglich die H¨ohe des Neutralisationstiters wies geringf¨ugige Unterschiede zwischen ein-zelnen St¨ammen auf. Zwei der verwendeten St¨amme (CDV-Impfstamm Onderstepoort und Feldvirusstamm AA7/96) wurden signiﬁkant schlechter neutralisiert als die ande-ren untersuchten St¨amme. Es ließen sich aber keine generellen Unterschiede zwischen Impfvirusst¨ammen und Feldvirusisolaten ﬁnden.

Weitere Untersuchungen zu antigenen Unterschieden zwischen den verschiedenen CDV-Isolaten wurden sowohl mit Hilfe eines neu etablierten monoklonalen Antik¨orpers (mAk) als auch 11 weiteren mAk vorgenommen. Von den insgesamt zehn gegen den CDV-Stamm 2544/Han95 produzierten mAk reagierten im indirekten Immunﬂuores-zenztest sechs mit allen neun verwendeten CDV-St¨ammen. Auch die beiden weiteren mAk reagierten mit allen neun St¨ammen. Lediglich vier mAk reagierten mit ein bis maximal drei der CDV-St¨amme nicht oder nicht eindeutig. Dabei ließ sich aber keine Unterscheidung in Impfvirusst¨amme und Feldvirusisolate nach dem Reaktionsverhalten der mAk treﬀen.

Bei der Untersuchung der Virusisolate im Westernblot zeigten sich bei der Verwen-dung von verschiedenen mAks kein Unterschied in der BinVerwen-dung an die aufgetrennten Virusproteine. Allerdings ließen sich Unterschiede in der Molekularmasse einzelner Pro-teinbanden zwischen Impfvirusst¨ammen und Feldvirusisolaten erkennen. Bei der

Ver-wendung von mehreren N-Protein speziﬁschen mAks und einem P-Protein speziﬁschen mAk zeigte sich, daß der durch diese mAk vermutlich gebundene Komplex aus N- und P-Protein bei den Impfvirusst¨ammen eine h¨oheres Molekulargewicht aufwies als dieser Komplex der Feldvirusisolaten.

Des weiteren wurde die Reaktion von polyklonalen Hundeseren mit ¨uberlappenden 13er Peptiden aus den Aminos¨aurensequenzen des N-, P-, H- und F-Protein des CDV un-tersucht. Hierbei wurden auch Peptide dargestellt, die abweichende Sequenzen zwischen verschiedenen Virusst¨ammen darstellten. Die meisten Seren zeigten dabei ein ¨ahnliches Reaktionsmuster. Es ließen sich auf jedem Protein 3-5 Bereiche erkennen, mit denen die Mehrzahl der Seren eine Reaktion zeigte. In einigen F¨allen handelte es sich bei diesen Ak-bindenden Bereichen um Teile des Proteins, f¨ur die bereits fr¨uher Antik¨ orperbin-dung oder wichtige Funktionen (z.B. Fusionsstelle des F-Proteins) beschrieben wurden.

In diesen F¨allen ist zu vermuten, daß es sich um echte B-Zellepitope handelt.

Bei den Untersuchungen mit den sequenz¨uberlappenden Peptiden waren auch kleine-re Unterschiede in der Reaktion der Sekleine-ren mit Peptiden, die aus abweichenden Sequenzen von Feldvirusst¨ammen synthetisiert worden waren, festzustellen. Vor allem zeigte sich an Abschnitten des Proteins, die eine besonders hohe Variabilit¨at zwischen den den Vi-rusisolaten aufwiesen, eine H¨aufung der Reaktionen. Hier lag die Reaktionsh¨auﬁgkeit der Seren etwa doppelt so hoch, wie in st¨arker konservierten Bereichen. Es ließ sich aber auch an Hand der Reaktionen der Seren mit den Peptiden kein genereller Unterschied zwischen Impfvirusst¨ammen und Feldvirusisolaten feststellen.

Sch¨anzler, Andrea

Characterization of current ﬁeld virus isolates of canine distemper virus with polyclonal and monoclonal antibodies

It was the objective of the current investigation to identify antigenic diﬀerences between a number of canine distemper isolates using various immunological methods utilizing monoclonal and polyclonal antibodies. Major priority was given to diﬀerences between ﬁeld virus isolates and vaccine virus strains. The purpose was to demonstrate whether the genetic diﬀerences detected between these various vaccine virus strains and current ﬁeld isolates would have consequences to the recognition of these strains by the immune system. This might result in reduced eﬃcacies of vaccines and also reduced eﬃcacies of diagnostic tests.

Various immunological methods have been used for this purpose.

Polyclonal canine sera were used to investigate the cross neutralization between va-rious CDV virus strains. Two vaccine virus strains (i. e. CDV strains Rockborn and Onderstepoort) and seven recent ﬁeld virus isolates were available for this work. All sera that had neutralizing antibodies against one CDV strain also neutralized all other CDV strains used. Only the neutralization titer levels diﬀered somewhat between va-rious strains. Two of the used strains (i. e. CDV vaccine virus strain Onderstepoort and ﬁeld virus isolate AA7/96) were neutralized with signiﬁcantly lower eﬃciencies than the other investigated isolates. However, no general diﬀerences could be demonstrated between vaccine virus strains and ﬁeld virus isolates.

Further investigations on the antigenic properties between the various CDV strains were made utilizing a currently established monoclonal antibody (mab) and 11 other mabs. Six of ten mabs produced against the CDV strain 2544/Han95 reacted in the indirect immunoﬂuorescence test with all nine CDV strains used. Also the two other mabs (produced against diﬀerent CDV strains) reacted with all nine strains. Only four mabs did not or doubtfully react with one to three CDV strains. However, no diﬀerentiation could be made between vaccine virus strains and ﬁeld virus isolates.

Various mabs have been used for the investigation of mab binding to separated virus proteins. No diﬀerences in binding could be established when the virus isolates were investigated using Western blots. However, diﬀerences were detected between individual

protein bands of vaccine virus strains and ﬁeld virus isolates. When various N-protein mabs and one P-protein speciﬁc mab were used, it was demonstrated that complexes of N- and P-protein probably bound by these mabs had higher molecular weights when originating from vaccine virus strains compared to ﬁeld virus isolates.

Also the reaction of polyclonal canine sera with overlapping 13 amino acid peptides from sequences of the CDV N-, P-, H- and F-protein were investigated. This also includes peptides with sequence variations between various virus strains. Most sera displayed similar reaction patterns. However, each protein had 3-5 sites that reacted with the majority of the sera. In some cases, these antibody-binding sites were protein regions that already have been reported as antibody-binding or exhibiting other functions (e. g.

F-protein fusion site). It is assumed in these cases that these sites actually are B-cell epitopes.

Also minor diﬀerences were detected in sequence overlapping peptides with respect to reaction of sera with peptides that were synthesized from deviating sequences of ﬁeld virus isolates. Sites of the protein characterized by high variability between the isolates showed accumulations of diﬀerent reactions. The reaction frequency of the sera was almost twice as high as in the remaining parts . However, the reaction of the sera with these peptides gave no hints to general diﬀerences between vaccine virus strains and ﬁeld virus isolates.

A.1. Peptidtr¨ ager

A.1.1. Alignments der f¨ur die Peptidauswahl verwendeten

CDV-Sequenzen und die daraus ausgew¨ahlten 200 Peptide F-Protein

10 20 30

* * *

gi|58854 ---MHKGIPKSSKTQTHTQQDRPPQPSTELEETRTSRARHS gi|74948|pir||V---..R...

gi|2661242 ---..NK...R...L...H..KSA..K..Q....

gi|2661240 ---..NK...R.R...L...H..KSA...QT...

gi|2661234 ---..NK...R...L.Q.H.AKSA..K..Q....

gi|2661236 ---..NK...G...P.P....P...H.IKSA..K..Q..YN gi|2661238 ---..NK...G...L.P....P...H.IKSA..K..Q...N gi|2661232 ---..NK...G..IL.P....P...H.IKSA..K..Q...N CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara

---40 50 60 70 80 90

* * * * * *

gi|58854 TTSAQRSTHYDPRTSDRPVSYTMNRTRSRKQTSHRLKNIPVHGNHEATIQHIPESVSKGA gi|74948|pir||V...

gi|2661242 I...HG...H.I...C..A.Y.SD...D..GI.H.T...Q..

gi|2661240 I.P...RG...H.I..G...CG.A.C.SD...AR.D..GVVH.T...Q..

gi|2661234 I...R....HGS...L.HHI...C..A.Y.SD...A..D.KGI.H.T...Q..

gi|2661236 I....Q..RHG...H.I...C..A.Y.SD...A..D..GI.H.T...Q.V gi|2661238 I....Q..RHG...HH...C..A...SD.T.A..D..SI.H.T...Q.V gi|2661232 I...RHG...H.I...C..A.Y.SD...AQ.D..GI.H.T...Q.V CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara

---100 110 120 130 140 150

* * * * * *

gi|58854 RSQIERRQPNAINSGSHCTWLVLWCLGMASLFLCSKAQIHWNNLSTIGIIGTDSVHYKIM gi|74948|pir||V...D...N...

gi|2661242 ..RFK...S..T....Q...I...

gi|2661240 ..RFK...S..T....Q...I.I...

gi|2661234 ..RFKS..S..T....Q...I.I...

gi|2661236 ..RFK...S..TS...Q...I.V...

gi|2661238 ..RFK...S..TS...Q...I.V...

gi|2661232 ..RLK.Q.S..TS...Q...I.I...

CDV 207 ---...

AA52/96 ---?LG.P.DACSSGRQCDGYLQNSAW...

Lara ---?P?DACSSG?QC?WI.?RISAW...?..

160 170 180 190 200 210

* * * * * *

gi|58854 TRPSHQYLVIKLMPNVSLIENCTKAELGEYEKLLNSVLEPINQALTLMTKNVKPLQSLGS gi|74948|pir||V...I..A...

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gi|2661236 ...D...S...V..

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gi|2661232 ...D...S...V..

CDV 207 ...D...V..

CDV AA52/96 ...D....V...S...V..

CDV Lara ...D...V..

220 230 240 250 260 270

* * * * * *

gi|58854 GRRQRRFAGVVLAGVALGVATAAQITAGIALHQSNLNAQAIQSLRTSLEQSNKAIEEIRE gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ...A...---gi|2661240 ...A...---gi|2661234 ...A...---gi|2661236 ...A...---gi|2661238 ...A...---gi|2661232 ...A...---CDV 207 ...A...---AA52/96 ...A...V...S----CDV Lara ...A...?...SR.PA

280 290 300 310 320 330

* * * * * *

gi|58854 ATQETVIAVQGVQDYVNNELVPAMQHMSCELVGQRLGLRLLRYYTELLSIFGPSLRDPIS gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV LAra

HWRPLLVD---340 350 360 370 380 390

* * * * * *

gi|58854 AEISIQALIYALGGEIHKILEKLGYSGSDMIAILESRGIKTKITHVDLPGKFIILSISYP gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara

---400 410 420 430 440 450

* * * * * *

gi|58854 TLSEVKGVIVHRLEAVSYNIGSQEWYTTVPRYIATNGYLISNFDESSCVFVSESAICSQN gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara

---460 470 480 490 500 510

* * * * * *

gi|58854 SLYPMSPLLQQCIRGDTSSCARTLVSGTMGNKFILSKGNIVANCASILCKCYSTSTIINQ gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara

---520 530 540 550 560 570

* * * * * *

gi|58854 SPDKLLTFIASDTCPLVEIDGATIQVGGRQYPDMVYEGKVALGPAISLDRLDVGTNLGNA gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---AA52/96 ---CDV Lara

---580 590 600 610 620 630

* * * * * *

gi|58854 LKKLDDAKVLIDSSNQILETVRRSSFNFGSLLSVPILSCTALALLLLIYCCKRRYQQTLK gi|74948|pir||V...

gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara

---640 650 660

* * *

gi|58854 QHTKVDPAFKPDLTGTSKSYVRSH gi|74948|pir||V...L gi|2661242 ---gi|2661240 ---gi|2661234 ---gi|2661236 ---gi|2661238 ---gi|2661232 ---CDV 207 ---CDV AA52/96 ---CDV Lara ---..HWRP.---LVD

Abfolge der 200 Peptide aus der Sequenz des F-Proteins Onderstepoort1 1 MHKGIPKSSK Onderstepoort2 389 KFIILSISYPTLS Onderstepoort2 1 MHRGIPKSSK Onderstepoort2 393 LSISYPTLSEVKG Onderstepoort1 1 MHRGIPKSSKTQT Onderstepoort2 397 YPTLSEVKGVIVH Onderstepoort2 1 MHKGIPKSSKTQT Onderstepoort2 401 SEVKGVIVHRLEA Onderstepoort2 5 IPKSSKTQTHTQQ Onderstepoort2 405 GVIVHRLEAVSYN Onderstepoort2 9 SKTQTHTQQDRPP Onderstepoort2 409 HRLEAVSYNIGSQ Onderstepoort2 13 THTQQDRPPQPST Onderstepoort2 413 AVSYNIGSQEWYT Onderstepoort2 17 QDRPPQPSTELEE Onderstepoort2 417 NIGSQEWYTTVPR Onderstepoort2 21 PQPSTELEETRTS Onderstepoort2 421 QEWYTTVPRYIAT Onderstepoort2 25 TELEETRTSRARH Onderstepoort2 425 TTVPRYIATNGYL Onderstepoort2 29 ETRTSRARHSTTS Onderstepoort2 429 RYIATNGYLISNF Onderstepoort2 33 SRARHSTTSAQRS Onderstepoort2 433 TNGYLISNFDESS Onderstepoort2 37 HSTTSAQRSTHYD Onderstepoort2 437 LISNFDESSCVFV Onderstepoort2 41 SAQRSTHYDPRTS Onderstepoort2 441 FDESSCVFVSESA Onderstepoort2 45 STHYDPRTSDRPV Onderstepoort2 445 SCVFVSESAICSQ Onderstepoort2 49 DPRTSDRPVSYTM Onderstepoort2 449 VSESAICSQNSLY Onderstepoort2 53 SDRPVSYTMNRTR Onderstepoort2 453 AICSQNSLYPMSP Onderstepoort2 57 VSYTMNRTRSRKQ Onderstepoort2 457 QNSLYPMSPLLQQ Onderstepoort2 61 MNRTRSRKQTSHR Onderstepoort2 461 YPMSPLLQQCIRG Onderstepoort2 65 RSRKQTSHRLKNI Onderstepoort2 465 PLLQQCIRGDTSS Onderstepoort2 69 QTSHRLKNIPVHG Onderstepoort2 469 QCIRGDTSSCART Onderstepoort2 73 RLKNIPVHGNHEA Onderstepoort2 473 GDTSSCARTLVSG Onderstepoort2 77 IPVHGNHEATIQH Onderstepoort2 477 SCARTLVSGTMGN Onderstepoort2 81 GNHEATIQHIPES Onderstepoort2 481 TLVSGTMGNKFIL Onderstepoort2 85 ATIQHIPESVSKG Onderstepoort2 485 GTMGNKFILSKGN Onderstepoort2 89 HIPESVSKGARSQ Onderstepoort2 489 NKFILSKGNIVAN Onderstepoort2 93 SVSKGARSQIERR Onderstepoort2 493 LSKGNIVANCASI Onderstepoort2 97 GARSQIERRQPNA Onderstepoort2 497 NIVANCASILCKC Onderstepoort2 101 QIERRQPNAINSG Onderstepoort2 501 NCASILCKCYSTS Onderstepoort2 105 RQPNAINSGSHCT Onderstepoort2 505 ILCKCYSTSTIIN Onderstepoort2 109 AINSGSHCTWLVL Onderstepoort2 509 CYSTSTIINQSPD Onderstepoort2 113 GSHCTWLVLWCLG Onderstepoort2 513 STIINQSPDKLLT Onderstepoort2 117 TWLVLWCLGMASL Onderstepoort2 517 NQSPDKLLTFIAS Onderstepoort2 121 LWCLGMASLFLCS Onderstepoort2 521 DKLLTFIASDTCP Onderstepoort2 125 GMASLFLCSKAQI Onderstepoort2 525 TFIASDTCPLVEI Onderstepoort2 129 LFLCSKAQIHWNN Onderstepoort2 529 SDTCPLVEIDGAT Onderstepoort2 133 SKAQIHWNNLSTI Onderstepoort2 533 PLVEIDGATIQVG Onderstepoort2 137 IHWNNLSTIGIIG Onderstepoort2 537 IDGATIQVGGRQY Onderstepoort2 141 NLSTIGIIGTDSV Onderstepoort2 541 TIQVGGRQYPDMV Onderstepoort2 145 IGIIGTDSVHYKI Onderstepoort2 545 GGRQYPDMVYEGK Onderstepoort2 149 GTDSVHYKIMTRP Onderstepoort2 549 YPDMVYEGKVALG Onderstepoort2 153 VHYKIMTRPSHQY Onderstepoort2 553 VYEGKVALGPAIS Onderstepoort2 157 IMTRPSHQYLVIK Onderstepoort2 5557 KVALGPAISLDRL Onderstepoort2 161 PSHQYLVIKLMPN Onderstepoort2 561 GPAISLDRLDVGT

Onderstepoort2 165 YLVIKLMPNVSLI Onderstepoort2 565 SLDRLDVGTNLGN Onderstepoort2 169 KLMPNVSLIENCT Onderstepoort2 569 LDVGTNLGNALKK Onderstepoort2 173 NVSLIENCTKAEL Onderstepoort2 573 TNLGNALKKLDDA Onderstepoort2 177 IENCTKAELGEYE Onderstepoort2 577 NALKKLDDAKVLI Onderstepoort2 181 TKAELGEYEKLLN Onderstepoort2 581 KLDDAKVLIDSSN Onderstepoort2 185 LGEYEKLLNSVLE Onderstepoort2 585 AKVLIDSSNQILE Onderstepoort2 189 EKLLNSVLEPINQ Onderstepoort2 589 IDSSNQILETVRR Onderstepoort2 193 NSVLEPINQALTL Onderstepoort2 593 NQILETVRRSSFN Onderstepoort2 197 EPINQALTLMTKN Onderstepoort2 597 ETVRRSSFNFGSL Onderstepoort2 201 QALTLMTKNVKPL Onderstepoort2 601 RSSFNFGSLLSVP Onderstepoort2 205 LMTKNVKPLQSLG Onderstepoort2 605 NFGSLLSVPILSC Onderstepoort2 209 NVKPLQSLGSGRR Onderstepoort2 609 LLSVPILSCTALA Onderstepoort2 213 LQSLGSGRRQRRF Onderstepoort2 613 PILSCTALALLLL Onderstepoort2 217 GSGRRQRRFAGVV Onderstepoort2 617 CTALALLLLIYCC Onderstepoort2 221 RQRRFAGVVLAGV Onderstepoort2 621 ALLLLIYCCKRRY Onderstepoort2 225 FAGVVLAGVALGV Onderstepoort2 625 LIYCCKRRYQQTL Onderstepoort2 229 VLAGVALGVATAA Onderstepoort2 629 CKRRYQQTLKQHT Onderstepoort2 233 VALGVATAAQITA Onderstepoort2 633 YQQTLKQHTKVDP Onderstepoort2 237 VATAAQITAGIAL Onderstepoort2 637 LKQHTKVDPAFKP Onderstepoort2 241 AQITAGIALHQSN Onderstepoort2 641 TKVDPAFKPDLTG Onderstepoort2 245 AGIALHQSNLNAQ Onderstepoort2 645 PAFKPDLTGTSKS Onderstepoort2 249 LHQSNLNAQAIQS Onderstepoort2 649 PDLTGTSKSYVRS Onderstepoort2 253 NLNAQAIQSLRTS Onderstepoort2 650 DLTGTSKSYVRSH Onderstepoort2 257 QAIQSLRTSLEQS Rockborn 1 MHNKIPKRSKTQT Onderstepoort2 261 SLRTSLEQSNKAI CDV af026241 1 MHNKIPKGSKTPT Onderstepoort2 265 SLEQSNKAIEEIR CDV af026241 4 KIPKGSKTPTPTQ Onderstepoort2 269 SNKAIEEIREATQ Rockborn 17 QDLPPQHSTKSAE Onderstepoort2 273 IEEIREATQETVI Rockborn 21 PQHSTKSAETKTS Onderstepoort2 277 REATQETVIAVQG Rockborn 25 TKSAETKTSQARH Onderstepoort2 281 QETVIAVQGVQDY CDV af026241 17 QDPPPQHSIKSAE Onderstepoort2 285 IAVQGVQDYVNNE Rockborn 37 HSITSAQRSTHHG Onderstepoort2 289 GVQDYVNNELVPA Rockborn 45 STHHGPRTSDRPV Onderstepoort2 293 YVNNELVPAMQHM Rockborn 54 DRPVHYIMNRTRS Onderstepoort2 297 ELVPAMQHMSCEL CDV af026239 37 HNITSAQRSTRHG Onderstepoort2 301 AMQHMSCELVGQR CDV af026239 45 STRHGPRTSDRPV Onderstepoort2 305 MSCELVGQRLGLR Rockborn 66 SCKQASYRSDNIP Onderstepoort2 309 LVGQRLGLRLLRY Rockborn 70 ASYRSDNIPAHGD Onderstepoort2 313 RLGLRLLRYYTEL Rockborn 78 PAHGDHEGIIHHT Onderstepoort2 317 RLLRYYTELLSIF Rockborn 93 SVSQGARSRFKRR Onderstepoort2 321 YYTELLSIFGPSL Rockborn 101 RFKRRQSNATNSG Onderstepoort2 325 LLSIFGPSLRDPI Rockborn 108 NATNSGSQCTWLV Onderstepoort2 329 FGPSLRDPISAEI CDV af026239 93 SVSQGVRSRLKRQ Onderstepoort2 333 LRDPISAEISIQA CDV af026239 97 GVRSRLKRQQSNA Onderstepoort2 337 ISAEISIQALIYA CDV af026239 101 RLKRQQSNATSSG Onderstepoort2 341 ISIQALIYALGGE AA52/96 127 LGPLDACSSGRQC Onderstepoort2 345 ALIYALGGEIHKI CDV Lara 142 ISTRISAWTDSVH Onderstepoort2 349 ALGGEIHKILEKL CDV Lara 146 ISAWTDSVHYKIM Onderstepoort2 353 EIHKILEKLGYSG Onderstepoort1 167 VIKLIPNASLIEN

Onderstepoort2 357 ILEKLGYSGSDMI Lara 174 VSLIDNCTKAELG Onderstepoort2 361 LGYSGSDMIAILE AA52/96 189 EKLLSSVLEPINQ Onderstepoort2 365 GSDMIAILESRGI AA52/96 212 PLQSVGSGRRQRR Onderstepoort2 369 IAILESRGIKTKI AA52/96 229 VLAGAALGVATAA Onderstepoort2 373 ESRGIKTKITHVD Lara 164 TSLEQSNKAISRI Onderstepoort2 377 IKTKITHVDLPGK Onderstepoort1 650 DLTGTSKSYVRSL Onderstepoort2 381 ITHVDLPGKFIIL Onderstepoort1 653 GTSKSYVRSL Onderstepoort2 385 DLPGKFIILSISY Onderstepoort2 653 GTSKSYVRSH

H-Protein

10 20 30 40 50

* * * * *

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60 70 80 90 100

* * * * *

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110 120 130 140 150

* * * * *

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Rockborn ---gi|1072720|pir|..I...V....

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160 170 180 190 200

* * * * *

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gi|1944379|gnl|...VK...I...A...

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210 220 230 240 250

* * * * *

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260 270 280 290 300

* * * * *

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Rockborn ---..

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310 320 330 340 350

* * * * *

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Rockborn ...

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360 370 380 390 400

* * * * *

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Rockborn ...S...

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410 420 430 440 450

* * * * *

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* * * * *

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Rockborn ---gi|1072720|pir|...I...G...M...I gi|221114|gnl|P...D..IS...G...L...R

510 520 530 540 550

* * * * *

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Rockborn ---gi|1072720|pir|.R...I...P..S...S...H.

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560 570 580 590 600

* * * * *

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Rockborn ---gi|1072720|pir|...N...N.A...

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gi|589514 ...

Rockborn ---gi|1072720|pir|...N.

gi|221114|gnl|P....---Abfolge der 200 Peptide aus der Sequenz des H-Proteins

2544/Han95 1 MLSYQDKVGA 2544/Han95 389 MCNQTSWEPFGGG

Onderstepoort 1 MLPYQDKVGA 2544/Han95 393 TSWEPFGGGQLPS Onderstepoort 1 MLPYQDKVGAFYK 2544/Han95 397 PFGGGQLPSYGRL 2544/Han95 1 MLSYQDKVGAFYK 2544/Han95 401 GQLPSYGRLTLPL 2544/Han95 5 QDKVGAFYKDNAR 2544/Han95 405 SYGRLTLPLDPSI 2544/Han95 9 GAFYKDNARANSS 2544/Han95 409 LTLPLDPSIDLQL 2544/Han95 13 KDNARANSSKLSL 2544/Han95 413 LDPSIDLQLNISF 2544/Han95 17 RANSSKLSLVTEE 2544/Han95 417 IDLQLNISFTYGP 2544/Han95 21 SKLSLVTEEQGGR 2544/Han95 421 LNISFTYGPVILN 2544/Han95 25 LVTEEQGGRRPPY 2544/Han95 425 FTYGPVILNGDGM 2544/Han95 29 EQGGRRPPYLLFV 2544/Han95 429 PVILNGDGMDYYE 2544/Han95 33 RRPPYLLFVLLIL 2544/Han95 433 NGDGMDYYESSLS 2544/Han95 37 YLLFVLLILLVGI 2544/Han95 437 MDYYESSLSDSGW

Im Dokument Charakterisierung aktueller Wildtyp-Hundestaupevirus-Isolate mit polyklonalen und monoklonalen Antikörpern (Seite 99-0)