Tierhaltung und -versorgung
Verbrauchsmaterial Bezugsquelle
Einstreu (Weichholzgranulat Altromin) Altromin, Lage
Makrolonkäfig (Typ III und Typ IV) Ebeco, Caustrop-Rauxel Milchbrei (Früchte oder Banane) Milupa GmbH, Friedrichsdorf Tierfutter (Standardnagerdiät Atromin
1324)
Altromin, Lage
Stereotaktische Operation
Gerät Bezugsquelle
Bohrer (0,13/ 0,11 mm) Hager & Meisinger GmbH, Neuss Dentalbohrer (Mod. 732 T1) Dremel Leinfelden-Echterdingen
Stereotakt I David Kopf Tujunga, USA Stereotakt II Stölting Wood Dale, USA
Verbrauchsmaterial Bezugsquelle
Bepanthen Augensalbe Bayer Vital, Leverkusen Bupivacainhydrochlorid (Carbostesin) Astra Zeneca GmbH, Wedel
Chloralhydrat Roth, Karlsruhe
Chloramphenicol-Succinat Roth, Karlsruhe Dentalzement (Paladur®) Heraeus Kulzer, Hanau Draht für Elektroden und Erden
(SS-8T/SA)
Science Products, Hofheim
Draht für Führungsrohre Schoeller Werker, Hellenthal
Gentamicinsulfat Caelo, Hilden
Isofluran Cp Pharma, Burgdorf
Isotone Natriumchloridlösung (NaCl 0,9%)
Braun, Tuttlingen
Marbofloxacin (Marbocyl® FD1 %) WDT,Garbsen
143 Nahtmaterial (Surgicryl® PGA
polyglycolic acid)
SMI, Hünningen, Belgien
Sauerstoff Linde AG, Pullach
Schrauben (aus nicht rostendem Stahl) Hummer & Rieß, Nürnberg
Tetracainhydrochlorid Caesar&Loretz GmbH, Hilden Wasserstoffperoxid (35%) AppliChem GmbH, Darmstadt
SE-Induktion Pilokarpin
Substanz Bezugsquelle
Diazepam (Faustan®) Temmler Pharma GmbH & Co. KG, Marburg
Isotone Natriumchloridlösung (NaCl 0,9%)
Braun, Tuttlingen
Lithiumchlorid Sigma Aldrich, Steinheim
Methylscopolamin Sigma Aldrich, Steinheim
Phenobarbital-Natrium Serva, Heidelberg
Pilocarpin Sigma Aldrich, Steinheim
Scopolamin Sigma Aldrich, Steinheim
SE-Induktion Kainsäure
Substanz Bezugsquelle
Destilliertes Wasser Eigenherstellung Isotone Natriumchloridlösung (NaCl
0,9%)
Braun, Tuttlingen
Kainsäure Sigma Aldrich, Steinheim
Thionin (Acetatsalz) Sigma Aldrich, München
144
Gerät/Verbrauchsmaterial Bezugsquelle
Feinwaage „CPA225D“ Sartorius AG, Göttingen
Hamilton-Spritze (5 µl, 24 G) Hamilton Bonaduz AG, Bonaduz, Schweiz
Draht für Injektionsnadel 18 mm Schoeller Werke, Hellenthal Mikroinjektionsschlauch CMA Microdialysis, Schweden
EEG- und Videoüberwachung
Gerät Bezugsquelle
Ableitkabel Hopa Kabelkonfektion, Langenhagen
Ableitkabel Eigenproduktion Material von Radio Menzel, Hannover Digitalkamera (Logitech, 2MPC903) Conrad Elektronic, Hannover
Infrarotkamera (Nycto Vision) CaS Buisness Servicess, Wunstorf Infrarotlampen und Generator (Nycto
Vision)
CaS Buisness Servicess, Wunstorf
Rotlichtlampen und Generator Conrad Elektronic, Hannover 16-Ein-Kanal-Verstärker (BioAmp) ADInstuments, Spechbach 16-Kanal-Analog-Digitalwandler
(Powerlab/16SP)
ADInstuments, Spechbach
Verhaltensversuche
Gerät/Substanz Bezugsquelle
Essigsäure Riedel de Häen, Hannover
Etho Vision Software Noldus, Wageningen, Niederlande
Kamera Panasonic
Klimaanlage Fujitsu General Euro GmbH, Düsseldorf
Open field Arena Firma Zimmermann, Hannover
PC Dell
Waage, Sartorius Universal Omnilab, Göttingen White Noise Generator 60 dB Eigenbau
145 Histologie
Verbrauchsmaterial/Gerät Bezugsquelle
Chloralhydrat AppliChem GmbH, Darmstadt
CO2 Kohlensäurewerk, Räthen
Eideckmedium (Entellan) Merck, Darmstadt
Gefriermedium Jung, Nussloch
Gefriermikrotom, Frigomobil CM1325 Leica, Wetzlar
Kryostat HM560M Microm, Walldorf
Lichtmikroskop Leica, Wetzlar
Lichtmikroskop Zeiss, Göttingen
N-Methylbutan Fulka Chemie GmbH, Buchs, Schweiz
Objektträger und Deckgläschen Roth, Karlsruhe
Paraformaldehyd Roth, Karlsruhe
Perfusionspumpe ISM897A Ismatech Laboratoriums GmbH, Wertheim-Modfeld
Stickstoff Westfalen Gas, Münster
Thionin Sigma Aldrich, München
Xylol Roth, Karlsruhe
Xylol Ersatzmedium (XEM) Roth, Karlsruhe
PTZ-Schwellentest
Verbrauchsmaterial/Gerät Bezugsquelle
Infusionspumpe (PHD 2000) Harvard Appartus, Holliston, USA Injektionskanüle 24 G Terumo, Leuven, Belgien Isotone Natriumchloridlösung (NaCl
0,9%)
Braun, Tuttlingen
Pentylentetrazol Caesar & Loretz, Hilden Polyethylenschlauch Kleinfeld Labortechnik, Gehrden
146 PTZ-Infusion
Verbrauchsmaterial/Gerät Bezugsquelle
Ein-Kanal-Swivel Instech Laboratories, Plymouth Meeting, USA
Geschirr mit Federspirale Instech Laboratories, Plymouth Meeting, USA
Infusionspumpe (PHD 2000) Harvard Appartus, Holliston, USA Isotone Natriumchloridlösung (NaCl
0,9%)
Braun, Tuttlingen
Kanülen 21 G, stumpf B. Braun, Melsungen Pentylentetrazol Caesar & Loretz, Hilden Polyethylenschlauch Katheter Kleinfeld Labortechnik, Gehrden Tubing Adapter (C3409500) Axel Semrau, Sprockhövel Tygonschlauch (S-54-HL) Kleinfeld Labortechnik, Gehrden
PTZ-Analytik
Gerät Bezugsquelle
Entgaser (ERC - 3512) Erma-Elektronic, Immendingen Filter (Millipore Kit; 0,22 μm) Millipore, Billerica, MA, USA Hauptsäule (HPLC column EC 250/4.6;
Nuceosil 120-5 C18, 250 x 4,6 mm)
Macherey-Nagel, Düren Integrator (C - R4A) Shimadzu, Duisburg
Pumpen (LC - 6A) Shimadzu, Duisburg
Pumpencontroler (SCL-6A; Fluß: 1 ml/min
35°C)
Shimadzu, Duisburg
Säulenofen (Knauer Column Oven, 35°C)
Knauer, Berlin
UV-Detektor (SPD – 6A; Wellenlänge:
210 nm)
Shimadzu, Duisburg
Vorsäule (Nucleosil 120-5 C 18, 60 x 4 mm)
Knauer, Berlin
Zentrifuge (5415 D) Eppendorf, Hamburg
147
Verbrauchsmaterial Bezugsquelle
Acetonnitril p.a. (HPLC FarUV) Lab-Scan, Gliwice, Polen Calciumchlorid-Dihydrat p.a. Merck, Darmstadt
Kaliumchlorid p.a. Merck, Darmstadt
Kaliumdihydrogenphosphat p.a. Merck, Darmstadt Magnesiumsulfat-Heptahydat p.a. Merck, Darmstadt
Methanol p.a. Lab-Scan, Gliwice, Polen
Natriumchlorid p.a. Roth, Karlsruhe
Natriumdihydrogencarbonat p.a. Merck, Darmstadt Natriumdihydrogenphosphat p.a. Sigma-Aldrich, München Natriumhydroxid p.a. Sigma-Aldrich, München Pentylentetrazol Caesar&Loretz, Hilden Salzsäure p.a. (37%ig) Merck, Darmstadt Tetracainhydrochlorid Caesar & Loretz, Hilden
Titriplex III p.a. Merck, Darmstadt
Puffer und Lösungen
0,4 M Phosphatpuffer (Stammlösung) 800 ml Aqua dest.
57 g Di-Natriumhydrogenphosphat-Dihydrat 12,48 g Natriumdihydrogenphosphat-Dihydrat Mit 1 M Natronlauge auf pH 7,4 einstellen Ad 1.000 ml Aqua dest.
0,5 M Tris-gepufferte Saline (TBS) 9 g Natriumchlorid
6,057 g Tris 800 ml Aqua dest.
Mit 37%iger Salzsäure auf pH 7,6 einstellen Ad 1.000 ml Aqua dest.
148 8% Paraformaldehydlösung
800 ml Aqua dest. auf 60-70°C erhitzen
80 g Paraformaldehyd-Pulver unter Rühren hinzugeben Mit 1 M Natronlauge bis zur Klärung titrieren
Auf Raumtemperatur abkühlen lassen und dann filtrieren Ad 1.000 ml Aqua dest.
4% Paraformaldehydlösung
8%ige Paraformaldehydlösung mit 0,2 M PBS auf eine 4%ige Lösung verdünnen
10%ige Saccharoselösung (pro Rattengehirn) 3 g Zucker
Ad 30 ml 0,1M PBS
30%ige Saccharoselösung (pro Rattengehirn) 9 g Zucker
Ad 30 ml 0,1M PBS Chromgelantine
7 g Gelantine in 1.000 ml Aqua dest. auf 60°C erwärmen Etwas Thymol (wenige mg) zugeben
0,7 g Chrom-(III) Kaliumsulfat-Dodecanhydrat nach dem Erwärmen hinzugeben Auf Eis auf 20°C abkühlen
filtrieren
149 Gefriermedium
85,6g Glucose-Monohydrat
1,4g Magnesium-Chlorid-Hexahydrat In 500 ml 0,1 M PBS lösen
Mit 87%igem Glyzerin auf 1.000 ml auffüllen
Thionin-Lösung 100 ml 1 M Essigsäure 36 ml 1 M Natronlauge Ad 1.000 ml Aqua dest.
Auf 60-70°C erhitzen 1,25 g Thionin darin lösen
1 Stunde bei 60-70°C rühren und dann heiß filtrieren Bei 60°C lagern (bis zu drei Monate haltbar)
Färbeprotokolle
Thioninfärbung
3 min in 100% Ethanol inkubieren 3 min in 95% Ethanol inkubieren 3 min in 70% Ethanol inkubieren 3 min in 50% Ethanol inkubieren 3 min in Aqua dest. inkubieren
75-90 sek. in Thionin-Färbelösung (42- 48°C) inkubieren 3 min in 50% Ethanol inkubieren
150 3 min in 70% Ethanol inkubieren
3 min in 95% Ethanol inkubieren 3 min in 100% Ethanol inkubieren
3 min in Terpineol/Xylol-Ersatzmedium 1:1 inkubieren 3 min in Xylol-Ersatzmedium inkubieren
3 min in frischem Xylol-Ersatzmedium inkubieren
Sofortiges Eindecken der Schnitte mit Entellan® und Trocknen an der Luft
Färbung nach Shorr
10-mal in 70% Ethanol eintauchen 10-mal in Aqua dest. Wässern 2 min in Meyers Hämalaun inkubieren 10-mal in Aqua dest. Wässern
1 min in Lithium-Carbonat (gesättigte Lösung 1:1 mit Aqua dest. verdünnt) inkubieren 10-mal in Aqua dest. Wässern
10-mal in 70% Ethanol inkubieren
6 min in Shorr´scher Färbelösung inkubieren 10-mal in 95% Ethanol eintauchen
30 sek. In 95% Ethanol inkubieren Lufttrocknen lassen
151
Publikationen
Originalarbeiten
C. BRANDT, M. NOZADZE, N. HEUCHERT, M. RATTKA and W. LÖSCHER (2010)
"Disease-modifying effects of phenobarbital and the NKCC1 inhibitor bumetanide in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy."
J Neurosci 30(25): 8602-8612.
M. RATTKA, C. BRANDT, M. BANKSTAHL, S. BRÖER and W. LÖSCHER (2011)
"Enhanced susceptibility to the GABA antagonist pentylenetetrazole during the latent period following a pilocarpine-induced status epilepticus in rats."
Neuropharmacology 60(2-3): 505-512.
Poster
RATTKA, M., C. BRANDT, M. BANKSTAHL, S. BRÖER and W. LÖSCHER (2010)
“Alterations in pentylenetetrazole seizure threshold after pilocarpine-induced status epilepticus”
FENS Abstr., vol.5, 106.36
M. RATTKA, C. BRANDT, M. BANKSTAHL, S. BRÖERand W. LÖSCHER (2010)
„Alterations in seizure threshold to the GABAA receptor antagonist pentylenetetrazole after pilocarpine-induced status epilepticus.”
40 th Annual Meeting Society for Neuroscience, San Diego, 350.2/K14
M. RATTKA, C: BRANDT and W: LÖSCHER (2011)
“Effects of subconvulsive pentylenetetrazole infusion on epileptogenesis in a status epilepticus model in Sprague-Dawley rats.”
Epilepsia 52, Issue Supplement s6, 159
152
Erklärung
Hiermit erkläre ich, dass ich die Dissertation „Prokonvulsiva als pharmakologische Strategie zur Epilepsieprävention“ selbstständig verfasst habe.
Bei der Anfertigung wurden folgende Hilfen Dritter in Anspruch genommen:
Frau M. Gramer und Frau M. Hausknecht (Technische Angestellte am
Institut für Pharmakologie, Toxikologie und Pharmazie) führten für mich die HPLC-Analyse der PTZ-Plasmakonzentrationen durch. Herr Michael Weißing (Technischer Angestellter am Institut für Pharmakologie, Toxikologie und Pharmazie) fertigte die Kryostat-Schnitte der Gehirne an. Frau Nicole Ernst, Frau J. Hinz, Herr S. Obili (Technische Angestellte am Institut für Pharmakologie, Toxikologie und Pharmazie) und Herr Phillip Demmer (Biologie-Diplomand) haben mich bei der Beobachtung der Tiere während der PTZ-Infusion unterstützt.
Ich habe keine entgeltliche Hilfe von Vermittlungs- bzw. Beratungsdiensten (Promotionsberater oder andere Personen) in Anspruch genommen. Niemand hat von mir unmittelbar oder mittelbar entgeltliche Leistungen für Arbeiten erhalten, die im Zusammenhang mit dem Inhalt der vorgelegten Dissertation stehen.
Ich habe die Dissertation an folgenden Institution angefertigt:
Institut für Pharmakologie, Toxikologie und Pharmazie der Tierärztlichen Hochschule Hannover. Die Dissertation wurde bisher nicht für eine Prüfung oder Promotion oder für einen ähnlichen Zweck zur Beurteilung eingereicht. Ich versichere, dass ich die vorstehenden Angaben nach bestem Wissen vollständig und der Wahrheit entsprechend gemacht habe.
Unterschrift
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Danksagung
Mein größter Dank gilt Herrn Professor Doktor W. Löscher für die Überlassung des Themas, die wissenschaftliche Anleitung bei der Durchführung der Versuche und der Abfassung dieser Dissertation sowie die jederzeit gewährte freundliche
Unterstützung.
Herrn Professor Doktor G. Bicker und Herrn Professor Doktor E. Ponimaskin danke ich für die kompetente und freundliche Betreuung während des PhD-Studiums.
Frau Claudia Brandt, PhD möchte ich für die freundliche Betreuung, die Hilfe bei der Durchführung der Versuche und die geduldigen Korrekturen meiner hoffnungslos unformatierten Präsentationen danken. Ich danke ihr auch für die sehr nette Arbeitsatmosphäre und die geduldige Beantwortung alle Fragen, sowie für die schöne Zeit, die ich mit Marlow verbringen durfte.
Ich danke allen Mitarbeitern des Instituts für die nette Arbeitsatmosphäre und stetige Hilfsbereitschaft. Insbesondere möchte ich Nicole Ernst, Julia Hinz, Philip Demmer und Stefan Obili für ihre Hilfe bei allen Versuchen danken. Martina Gramer und Maria Hausknecht möchte ich für die Durchführung der Analytik danken. Michael Weißing möchte ich für seine Hilfe bei der Histologie danken. Bianca Backofen-Wehrhahn möchte ich für ihre Hilfe bei der Formatierung dieser Arbeit danken.
Allen Doktoranden, Diplomanden, Auszubildenden und Praktikanten danke ich für die Hilfe bei den Versuchen und für die schöne Zeit, die wir zusammen verbracht haben.
Meiner Oma Zuzanna Gąsior möchte ich für Ihre Liebe und Unterstützung danken.
Ich danke meinem Mann Grzegorz Żuk für seine Liebe und Geduld.
Ich danke dem Redakteur Jerzy Urban für seine Feuilletons in der „Täglichen Wochenzeitung NIE“, die mich während der gesamten PhD-Arbeit begleitet haben.
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Ich danke der Friedrich-Ebert-Stiftung für die Gewährung eines Promotionsstipendiums, welches mir das PhD-Studium ermöglicht hat. Ferner möchte ich der Stiftung für die Möglichkeit der Teilnahme an den interessanten studienbegleitenden Seminaren danken.
Diese Arbeit ist ein Teilprojekt der DFG-Forschergruppe Neurodegeneration und – regeneration bei ZSN-Erkrankungen des Hundes (Forschergruppe 1103).