4. Ergebnisse
4.4 Vergleichende immunhistologische Untersuchungen
4.4.4 Immunhistologische Untersuchung auf die Expression des p53-
p53 ist ein Tumorsuppressorprotein, dessen Expression durch UV-Bestrahlung induziert wird. p53 ist normalerweise nukleär lokalisiert, eine am N-terminalen Ende
erkürzte Isoform wird zytoplasmatisch exprimiert. Der in der immunhistologischen
ährend dem gesamten v
Untersuchung verwendete Antikörper (CM-5) detektiert die zentrale DNA-Bindungsstelle des p53-Proteins und unterscheidet nicht zwischen den beiden Isoformen und p53-Mutationen in der DNA-Bindungsstelle.
In allen immunhistologisch untersuchten Hautproben wurde in den Zellschichten des Stratum corneum, lucidum und granulosum eine granuläre, Zytoplasmatische Färbung detektiert. Sie wird als unspezifischer Färbeartefakt betrachtet.
p53-Expression in der Haut der Wildtyp-Kontrolltiere w Versuchsverlauf
Die unbestrahlten Kontrollgruppen zeigten während dem gesamten Versuchsverlauf den selben Befund. In der Basalzellschicht zeigten wenige, einzelne Zellen eine nukleäre p53-Färbung.
Zu Beginn der Bestrahlung (siebte Woche +UV) war die Anzahl der p53-positive Zellen im Stratum basale gegenüber den unbestrahlten Tieren nicht wesentlich erhöht. Im weiteren Verlauf (11. Woche +UV) wurden pro Hautschnitt drei bis vier p53-Cluster, bestehend aus 5 bis 10 nukleär p53-positiven Zellen, im Stratum basale und der basalen Zellschichten des Stratum spinosum detektiert (Abb. 60). Zum Ende der Bestrahlung (15. Woche +UV) wurde in der hochgradig hyperproliferierten Epidermis in nahezu allen Zellkernen des Stratum basale p53 exprimiert. Zahlreiche p53-Cluster erstreckten sich zusätzlich auf das Stratum spinosum (Abb. 61).
Ergebnisse 165
Abbildung 60: Immunhistologischer Nachweis v
Nr. 528, m). Anfärbung der Zellkerne einzelner Eon p53 in der 11. Woche + UV, Wildtyp (Maus pithelzellen im Stratum basale und den basalen ellschichten des Stratum spinosum (p53-Cluster). Gegenfärbung mit Hämalaun nach Mayer, Z
200fache Vergrößerung, Eichstrich = 40 µm, Inset: 400fache Vergrößerung, Eichstrich = 20. µm.
Abbildung 61: Immunhistologischer Nachweis von p53 in der 15. Woche + UV, Wildtyp (Maus Nr. 529, m). Anfärbung nahezu aller Zellkerne des Stratum basale. Gegenfärbung mit Hämalaun nach Mayer, 200fache Vergrößerung, Eichstrich = 40 µm, Inset: 400fache Vergrößerung, Eichstrich = 20. µm.
Ergebnisse 166
Im anschließenden Beobachtungszeitraum fand sich keine einheitliche p53-Färbung der Epidermis. In ausgedehnten p53-negativen Arealen fanden sich kleinere Berei-che mit perlschnurartig angeordneten, p53-positiven Basalzellen. Vereinzelt wurden
mittelgradig hyperproliferierten Bereichen kleinere p53-Cluster beobachtet.
färbung (Abb. 62), in einem sessilen Papillom aren nahezu alle epithelialen Zellen p53-positiv.
in
In der Basalzellschicht der epidermalen Ausläufer der Papillome zeigte sich eine regelmäßige, schwache p53-Kern
w
Abbildung 62: Immunhistologischer Woche
Cluster herden in der Unterhaut. Gegenfärbung mit Hämalaun
nach M chstrich = 80 µm.
Nachweis von p53 in einem sessilen Papillom in der 10.
nach Ende der UV-Bestrahlung, Wildtyp (Maus Nr. 531, m). Starke Anfärbung eines p53-s in epidermalen Proliferationp53-s
ayer, 100fache Vergrößerung, Ei
Ergebnisse 167
p53-Expression in der Haut der HPV20 E6/E7-transgenen Versuchstiere während dem gesamten Versuchsverlauf
Die Kontro
Zu p53-po nahezu
Färbung gekennzeichnet, die durch zahlreiche, p53-positive Cluster ergänzt wurde (Ab
Intensi
und de hyperproliferierten
Epidermis zeigten sich mehrere, vereinzelte, nukleär, p53-positive Basalzellen und nur e
Befunde der unbestrahlten Kontrolltiere entsprachen denen der Wildtyp-lltiere.
Beginn der Bestrahlung (siebte Woche +UV) fanden sich deutlich mehr nukleär, sitive Basalzellen als im Wildtyp. Im weiteren Verlauf (11. Woche +UV) war die gesamte Basalzellschicht der Epidermis durch eine nukleäre
p53-b. 63). Zum Ende der Bestrahlung (15. Woche +UV) schien die Anzahl und tät der p53-exprimierenden Zellen, im Vergleich zur 11. Bestrahlungswoche
n Wildtyp-Kontrolltieren, abzunehmen. In der hochgradig
w nige p53-Cluster (Abb. 64).
Abbildung 63: Immunhistologischer Nachweis von p53 in der 11. Woche + UV, HPV20 E6/E7-transgen (Maus Nr. 389, m). Anfärbung der Zellkerne nahzu aller Epithelzellen im Stratum basale und vereinzelt in den basalen Zellschichten des Stratum spinosum (p53-Cluster).
Gegenfärbung mit Hämalaun nach Mayer, 200fache Vergrößerung, Eichstrich = 40 µm, Inset:
400fache Vergrößerung, Eichstrich = 20. µm.
Ergebnisse 168
Woche + UV,
Abbildung 64: Immunhistologischer N 53 in der 15. HPV20
E6/E7-a ac Z ellen im
Stratum basa llk nfärbung
mit Hämalau 0fach ch ache
Vergrößerun m.
Nach Beendigung der Bestrahlung fanden sich in der mitte n
is m nu al
rl-schnurartig un en
53-Cluster aus
Alle Papillo g oder r malignen Entartung waren
durch deut in unterschiedlicher Größe umors
gekennzeic sätzlich zeigte sich in den epidermalen Anteilen der Papillome eine perlsc schwach, nukleär p53-gefärbter Zellen
e icht.
achweis von p transgen (M us Nr. 7313, w). Schw
le und nur weniger Ze n nach Mayer, 20 g, Eichstrich = 20. µ
he Anfärbung vereinzelter erne im Stratum spinosum e Vergrößerung, Eichstri
auch mit Tendenz zu
zellen, die teilweise pe Arealen vereinzelte p
innerhalb des T
der Basaz llsch
Ergebnisse 169
Abbildung 65 N m s
it in de d PV20
S her len
nteile des n und ller
Zellkerne de s id
fär-bung mit Häm 0fac h
p53-Expres der H n rend
: Immunhistologischer achweis von p53 in eine
En essilen bis exophytischen Papillom m
E6/E7-transg anaplastischen Herden en (Maus Nr. 7360, w).
Tumors (p53-Cluster u r Epithelzellen in den ba
alaun nach Mayer, 10
der 15. Woche nach tarke Anfärbung zahlreic
terschiedlicher Größe) alen Zellschichten der ep he Vergrößerung, Eichstric
er UV-Bestrahlung, H Zellkerne der epithelia
Anfärbung nahezu a ermalen Anteile. Gegen = 80 µm.
A
sion in der Haut PV27 E6/E7-transgene Versuchstiere wäh dem gesamten Versuchsverlauf:
Die Befunde der unbestrahlten K d nd
HPV20 E6/E7-transgenen Tiere.
nsa iden Genotypen fanden si
estrahlung V) S n
basalen Ze m h he
perlschnurartig angeordente, nukleär positive Basalzellen, die durch
p53-negative Ar wurd uf zeigte
sich, im Ve HPV n, e ige
p53-Färbun v us
53-ontrollgruppe ähnelten enen der Wildtyp- u
Im Gege tz zu den anderen be (siebte Woche +U llschichten des Stratu
eale unterbrochen rgleich zu den K10
g. Mehrere p53-positi
ch bereits zu Beginn der tratum basale und de zeigten einige Bereic
(11. Woche +UV) her eine unregelmäß
8 bis 12 nukleär p
B einige p53-Cluster im
spinosum. Zusätzlic
en. Im weiteren Verla 20 transgenen-Tiere e Cluster, bestehend a
Ergebnisse 170
positiven Zellen, erstreckten sich bis in die apikalen Zellschichten des Stratum spinosum. Einzelne Zellen der Cluster schienen mit der Differenzierung in die
e ichten der Epiderm b. 66)
strah-. Woche +UV) stellten sic p5 en
asalen und suprabasalen Zellsch ig hy
er-is in irregulärer Anordnung dar (Abb. 67).
apikalen Z lung (15
llsch is aufzusteigen (Ab h zahlreiche, nukleär ichten der hochgrad
. Zum Ende der Be 3-positive Zellen in d
perproliferierten Epid b
m
oche + UV, HPV27 E6/E ratum basale und Stratum
Abbildung 66 Nachweis von p53 in der 11. W
7-transgen (Ma bung einzelner Zellkerne im St
er
ter) und mehrerer Zellker Gegenfärbung mit Häma
0fache Vergrößerung, Eic
ne im Stratum basale mit perlsch n nach Mayer, 200fache V
strich = 20. µm.
nurartig rgrößerung, Eichstrich =
Ergebnisse 171
Abbildung 67: Immunhistologischer Nachweis von p53 in der 15. W 7-transgen (Maus Nr. 424, m). Anfärbung zahlreicher Zellkerne der m basale und zahlreicher Zellkernen in den Zellschichten des Stratu luster).
n ay ung, m, Inset:
er 20
Im anschlie sz aloge der
HPV20 E6/E7-transgenen Tiere r ereinzelt zeigte m spinosum p53-positive Einzelzellen.
oche + UV, HPV27 E6/E Epithelzellen des Stratu
m spinosum (p53-C Gegenfärbu
400fache V g mit Hämalaun nach M größerung, Eichstrich =
ßenden Beobachtung e
er, 200fache Vergrößer . µm.
eitraum wurden an hoben. V
Eichstrich = 40 µ
Befunde zu denen n sich auch im Stratu
Ergebnisse 172
4.4.5 Immunhistologische Untersuchung auf die Expression des p63-