Avril 2018 – Modèle 24 Cisbio Bioassays
Parc Marcel Boiteux - BP 84175 – 30200 Codolet / France - Tél. 33 (0)4.66.79.67.00
RIA-gnost® hTSH OCPL07-TSH
Trousse pour la détermination
radioimmunologique de la thyrotrophine humaine (hTSH)
Pour diagnostic In Vitro
Kit for the radioimmunological determination of human thyrotropin (hTSH)
For In Vitro diagnostic use
Kit zur radioimmunologischen Bestimmung von humanem Thyreotropin (hTSH)
Zur In Vitro diagnostik
La trousse contient : Kit content : Inhalt des Kits :
Tubes revêtus 2 x 50 Coated tubes 2 x 50 Teströhrchen beschichtet 2 x 50
Traceur 300 kBq 1 x 11,5 mL Tracer 300 kBq 1 x 11.5 mL Tracer 300 kBq 1 x 11,5 mL
Calibrateur 0 1 x 1 mL Calibrator 0 1 x 1 mL 0 - Kalibrator 1 x 1 mL
Calibrateurs 1 - 6 6 x 1 mL Calibrators 1 – 6 6 x 1 mL Kalibratoren 1 - 6 6 x 1 mL
Sérum de contrôle 1 x 1 mL Control serum 1 x 1 mL Kontrollserum 1 x 1 mL
Réactif de lavage 1 x 3
comprimésWash reagent 1 x 3 tablets Waschreagenz 1 x 3
PuffertablettenSachet plastique 1 Plastic bag 1 Plastikbeutel 1
Notice d’utilisation 1 Instruction for use 1 Gebrauchsinformation 1
Attention : Certains réactifs contiennent de l’azoture de sodium Warning : Some reagents contain sodium azide Achtung : Einige Reagenzien enthalten Natriumazid
Kit per il dosaggio radioimmunologico della tireotropina umana (hTSH)
Per uso diagnostico In Vitro
Equipo para la determinación radioinmunológica de tirotropina humana
(hTSH)
Para uso diagnóstico In Vitro
Τυποποιημένη συσκευασία για το ραδιοανοσολογικό προσδιορισμό της ανθρώπιινης θυρεοειδοτρόπου ορμόνης
(hTSH)
Για διαγνωστική χρήση in vitro
Contenuto del kit : Contenido del equipo :
Περιεχόμενα της τυποποιημένης συσκευασίαςProvette coattate 2 x 50 Tubos recubiertos 2 x 50
Επικαλυμμένοι σωλήνες2 x 50
Tracciante 300 kBq 1 x 11,5 mL Trazador 300 kBq 1 x 11,5 mL
Ιχνηθέτης 300 kBq1 x 11,5 mL
Calibratore 0 1 x 1 mL Calibrador 0 1 x 1 mL
Πρότυπο0 1 x 1 mL
Calibratori 1 – 6 6 x 1 mL Calibradores 1 – 6 6 x 1 mL
Πρότυπα 1 – 66 x 1 mL
Siero di controllo 1 x 1 mL Suero control 1 x 1 mL
Ορός μάρτυς1 x 1 mL
Reagente di lavaggio 1 x 3
compresseReactivo de lavado 1 x 3 comprimidos
Αντιδραστήριο έκπλυσης1 x 3 δισκία
Sacchetto di plastica 1 Bolsa de plástico 1
Πλαστική θήκη1
Istruzioni per l’uso 1 Instrucciones de uso 1
Οδηγίες χρήσεως1
Attenzione : Alcuni reagenti contengono sodio azide Precauciones : Algunos reactivos contienen azida sódica Προσοχή : Ορισμένα αντιδραστήρια περιέχουν αζίδιο του νατρίου
Explication des
symboles Explanation of symbols
Erläuterung der Sumbole
Spiegazione dei simboli
Significado de los simbolos
Eπεξήγηση των συμβόλων
που
Wyjaśnienie
symboli Jelmagyarázat Объяснение
символов Objašnjenje simbola
Conforme aux normes
européennes conformity European
CE-Konformitäts- kennzeichnung
Conformita
europea
Conformidad
europea European
conformity
Zgodne z normami europejskimi
Megfelel az európai szabványoknak
Европейский
соответствия Evropska usaglašenost
T° limite de stockage
Storage temperature
limitation
Limitierung der Lagertemperatur
Limiti per la temperatura di
conservazione
Limites de temperatura de almacenamiento
Περιορισμός θερμοκρασίας
φύλαξης
Graniczna temperatura przechowywania
Tárolási hőmérséklethatár
Ограничение температуры хранения
Ograničenje temperature za
čuvanje N° de lot Batch code Chargencode codice lotto Código de lote Κωδικός
παρτίδας Numer partii Gyártási szám код партии Šifra serije
Utiliser jusqu’au Use by Verwendbar bis utilizzare entro Consumir antes de Ημερομ. λήξης Zużyć do Felhasználható az alábbi
dátumig : Используйте по Upotrebiti do
Consulter la
notice d’utilisation Consult operating instructions
Das Handbuch zu Rate ziehen
consultare le istruzioni per
l‘USO
Consultar las instrucciones de
manejo o funcionamiento
Ανατρέξτε στις οδηγίες λειτουργίας
Patrz dołączona ulotka
Olvassa el a használati
utasítást
Обратитесь к инструкции по эксплуатации
Pogledajte uputstvo za upotrebu
Diagnostic In Vitro In Vitro Diagnostic device
In- VitroDiagnostische
Anwendung
Dispositivo Diagnostico In
Vitro
Dispositivo de
diagnóstico In Vitro διαγνωστική
συσκευή In Vitro Diagnostyka In
Vitro In vitro diagnosztika
В устройстве Витро диагностики
Uređaj za dijagnostiku in
vitro Fabriqué par Manufactured by Hergestellt von Prodotto da Fabricado por Κατασκευάζεται
από την Wyprodukowane
przez Gyártja: Изготовитель Proizveo
Référence Catalogue number Katalog Nr. N. catalogo Número de catálogo Αριθμός
καταλόγου Wzorzec Referenciakészít
mény номер по
каталогу Kataloški broj
Nombre de tubes determinations Number of Anzahl der
Bestimmungen Numero di
determinazioni Número de
determinaciones Αριθμός
προσδιορισμών Liczba probówek A kémcsövek
száma Количество
определений Broj određivanja
Tubes revêtus Coated tubes beschichtete
Röhrchen Provette coattate Tubos recubiertos Επιστρωμένα
σωληνάρια Probówki
powlekane Bevont
kémcsövek Покрытые трубы Obložene epruvete
Traceur radioactif Radioactive tracer Radioactiver
Tracer Tracciante
radioattivo Trazador radiactivo Ραδιενεργός ιχνηθέτης
Znacznik
radioaktywny Nyomjelző izotóp радиоактивного
индикатора Radioaktivni indikator
Calibrateur Calibrator Kalibrator Calibratore Calibrador Βαθμονομητής Kalibrator Kalibrátor калибратор Kalibrator
Contrôle Control Kontrolle Controllo Control Ορός ελέγχου Kontrola Kontroll контроль Kontrola
WASH Solution de
lavage Wash solution Waschlotion Soluzione di
lavaggio Solución de lavado ∆ιάλυμα πλύσης Roztwór płuczący x-szeresére Промывочный
раствор Rastvor za pranje
FRA ENG DEU ITA SPA ELL POL HUN RUS SRB
MISE A JOUR / UPDATING
Modifications par rapport à la version précédente : Modification code langue Serbie
Changes from the previous version:
Serbian language code updated
Änderungen gegenüber der Vorgängerversion:
Serbischer Sprachcode aktualisiert
Modifiche rispetto alla versione precedente:
Aggiornato codice lingua serba
Cambios desde la versión anterior:
Actualizado el código de idioma serbio
Αλλαγές από την προηγούμενη έκδοση:
Ο κωδικός για τη σερβική γλώσσα ενημερώθηκε
Zmiany w stosunku do poprzedniej wersji:
Zaktualizowano kod języka serbskiego
Változások az előző verzióhoz képest:
A szerb nyelvkód frissítve
Изменения по сравнению с предыдущей версией:
Код сербского языка обновлен
Promene od prethodne verzije:
Kôd srpskog jezika ažuriran
OCPL07-TSH
Cisbio Bioassays – Avril 2018 - Modèle 24
FRA
ENG
DEU
ITA
SPA
ELL
HUN
RUS POL
SRB
OCPL07-TSH
Cisbio Bioassays – April 2018 - Modell 24
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Besteck zur radioimmunologischen Bestimmung von humanem Thyreotropin (hTSH)
Das Kit ist für den professionellen Gebrauch vorgesehen.
Das Besteck besteht aus :
1 Flasche 125I-Anti-hTSH Antikörper (monoclonal, Maus), < 300 kBq, 11,5 mL Puffer, Rinderalbumin, Maus Antikörper, Natriumazid, Farbe rot.
2 x 50 Teströhrchen beschichtet mit Anti-hTSH-Antikörper (monoclonal, Maus).
7 Flaschen hTSH-Kalibratoren, je 1 mL Humanserum, Rinderalbumin und Natriumazid, Konzentration im Bereich von nominell 0 – 55 µUI hTSH/mL.*
1 Flasche hTSH-Kontrollserum, 1 mL Humanserum, Rinderalbumin und Natriumazid, Konzentration deklariert.
1 Waschreagenz, 3 Tabletten im blister.
1 Plastikbeutel.
1 Gebrauchsinformation.
* Die oben angegebenen Werte sind die Zielwerte. Die tatsächlichen Werte der Kalibratoren und Kontroll gezeigt Reagenzien- Etiketten.
Die gelösten Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel. Verschlucken, Berührung mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden !
1. Einführung
Thyreotropin (TSH), ein Hormon des Hypophysenvorderlappens, ist ein Glykoprotein mit einem Molekulargewicht von ~ 30.000, das sich aus zwei verschiedenen Untereinheiten, einer - und einer -Kette, zusammensetzt. Nur das intakte Gesamtmolekül (hTSH) ist biologisch wirksam. Auch die übrigen Glykoproteinhormone hLH, hFSH, hCG bestehen aus zwei Untereinheiten. Die - Untereinheiten dieser Hormongruppe sind praktisch identisch, während die -Untereinheiten hormonspezifisch sind und sich in ihrer Struktur unterscheiden.
2. Klinische Ergebnisse mit RIA-gnost® hTSH
2.1. Klinische Bedeutung der quantitative hTSH- Bestimmung
Zwischen der Schilddrüse, der Hypophyse, dem Hypothalamus und den im Blut kreisenden Schilddrüsenhormonen Triiodthyronin (T3) und Thyroxin (T4) besteht ein Rückkopplungsmechanismus (Abb. 1).
Im Hypothalamus wird als Neurosekret Thyreotropin Releasing Hormon (TRH) gebildet. TRH bewirkt die Ausscheidung von Thyreotropin (TSH) aus der Hypophyse und regt auch dessen Synthese an. TSH wiederum führt in der Schilddrüse zu einer vermehrten Synthese und Abgabe von T4 und T3. Durch die zirkulierende metabolisch wirksame Fraktion der Schilddrüsenhormone im Blut, wird die Abgabe von TSH gesteuert. Bei hoher Konzentration der freien Fraktion der Schilddrüsenhormone in der Peripherie ist die TSH-Konzentration im Serum folglich erniedrigt, erhöht dagegen bei niedriger Konzentration der Schilddrüsenhormone.
Der beschriebene Regulationsmechanismus ist Grundlage des TRH-Testes. Die Gabe von synthetischem TRH (z. B.
Relefact® TRH) führt bei Euthyreoten zu einer radioimmunologisch meßbaren Ausschüttung von TSH aus der Hypophyse. Bei der Hyperthyreose wird aufgrund des eingangs erwähnten Rückkopplungsmechanismus kein TSH ausgeschüttet. Bei der Hypothyreose dagegen führt der Rückkopplungsmechanismus zu einem höheren TSH- Gehalt in der Hypophyse und zu einem überproportionalen Anstieg des schon basal erhöhten TSH-Spiegels auf den TRH-Reiz hin.
2.2. Normalwerte
Im Rahmen der klinischen Prüfung von RIA-gnost® hTSH wurde der Normalbereich der hTSH –Konzentration im Serum von Männern und Frauen ermittelt :
Euthyreoten 0,25 – 4 µIE/mL (n =1966)
Hyperthyreoten < 0,25 µIE/mL (n = 182), überwiegend
< 0,1µIE/mL
Hypothyreoten 5 µIE/mL (n = 50)
Hypothalamus
Hypophysenvorder- lappen
Schilddrüse TRH
TSH
T4 T3
Transportproteine TBG,TBPA Peripherie
T4 T3
Abb. 1 : Hypothalamus-Hypophysen-Schilddrüsen-Achse TRH Thyreotropin Releasing Hormon
TSH Thyreotropin T4 Thyroxin T3 Triiodthyronin
TBG Thyroxinbindendes Globulin TBPA Thyroxinbindendes Präalbumin
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Nach TRH-Stimulation erhöht sich der TSH-Spiegel bei gesunden Personen auf 2-30 µIE/mL (n = 417), bei hyperthyreoten Patienten liegt er unter 0,5 µIE/mL (n = 59), während er bei der Hypothyreose auf Werte über 30 µIE/mL (n = 8) ansteigt.
Bei schweren, lang andauernden Allgemeinerkrankugen kann die TSH-Serumkonzentration beeinflußt werden, zumindest ist die TSH-Antwort auf die TRH-Stimulation reduziert. Pharmaka können die TSH-Sekretion stimulieren (z. B. Dopamin-Antagonisten, Iodid) oder hemmen (z. B. L-Dopa, Kortikoide). Mit zunehmendem Alter ist ein leichter Abfall der TSH-Spiegel und eine Abnahme der TRH-stimulierten TSH-Ausscüttung möglich.
3. Meßprinzip und charakteristische Daten von RIA-gnost hTSH 3.1 Meßprinzip
RIA-gnost® hTSH erlaubt die in vitro-Bestimmung von Thyreotropin in menschlichem Serum (bzw. Plasma) nach dem Prinzip eines 1-Schritt-Sandwich-Assays. Hierbei bildet sich ein Komplex aus wandgebundenem Anti-hTSH-Antikörper (monoclonal, Maus), hTSH in der Probe und 125I-markiertem Anti-hTSH-Antikörper (monoclonal, Maus). Nach Ablauf der Reaktion wird der freie Traceranteil durch Dekantieren (bzw. Absaugen) und Nachwaschen entfernt.
Der spezifisch an den beschichteten Teströrchen gebundene Tracertanteil wird mit einem Gamma-Zähler gemessen.
Die Auswertung der unbekannten Proben erfolgt durch Ablesung von einer unter identischen Bedingungen erstellten Standardkurve.
Es empfiehlt sich, den Test in Doppelbestimmungen für die Kalibratoren, Kontrolle und Proben durchzuführen. Beim Testen in Doppelbestimmungen können maximal 42 Patientenproben gemeinsam mit einem Standard gemessen werden.
Die im Besteck verwendeten monoclonalen Antikörper sind sehr spezifisch für hTSH. Eine Kreuzreaktion zu hLH, hFSH und hCG ist in den physiologisch relevanten Konzentrationsbereichen praktisch ausgeschlossen.
Proben außerhalb des Meßbereichs werden mit Waschpuffer verdünnt.
Die Standards sind gegen hTSH WHO 80/558 geeicht.
Anmerkung : Die extrem hohe Empfindlichkeit des Assays kann nur bei Beachtung der folgenden Punkte erreicht werden : a) Außenkontamination der Röhrchen vermeiden.
b) Vollständige Entfernung (Dekantieren/Absaugen) der ungebundenen Tracerfraktion gewährleisten. Beim Absaugen ist ein Verstopfen der Kapillaren auszuschließen ; nach dem Dekantieren auf Zellstoff gut abklopfen.
c) Meßeinrichtung und gegebenenfalls verwendete Röhrcheneinsätze auf Konstanthaltung des Nulleffektes kontrollieren und falls erforderlich dekontaminieren.
d) Störenden Einfluß externer Strahlenquellen ausschließen.
3.2. Spezifische Testcharackteristika 3.2.1 Präzision
Sie wurde mit Hilfe von 3 Proben 10-mal in der selben Serie und in 10 verschiedenen Serien ermittelt.
Intra-Assay Inter-Assay Proben Mittelwert
(ng/mL)
CV (%) Proben Mittelwert (ng/mL)
CV (%)
1 0,30 5,7 4 1,55 5,4
2 3,95 1,5 5 3,61 4,8
3 28,7 1,2 6 9,81 2,4
3.2.2 Nachweisgrenze
Die Nachweisgrenze wird definiert als die kleinste Konzentration, die sich mit 95 %-iger Sicherheit vom 0 Standard unterscheidet und liegt bei 0,03 µIU/mL.
4. Arbeitsanleitung 4.1. Erforderliche Geräte
Mikroliter-Pipetten mit austauschbarer Kunststoffspitze 100, 200 µl, Meßzylinder, Horizontalschüttler (300 50 UpM) Gammazähler.
4.2. Vorbereitung der Reagenzien
Verwenden Sie keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen.
Vor Gebrauch werden die bei 2–8°C gelagerten Besteckkomponenten auf Raumtemperatur gebracht (18-25°C). Zur Herstellung des Waschpuffers werden die drei Puffer-Tabletten in 300 mL dest. Wasser gelöst.
Alle unverbrauchten Reagenzien sind bei 2-8°C aufzubewahren. Restliche Teströhrchen werden in verschlossener Packung gelagert.
4.3. Vorbereitung der Serumproben
Der Test wird direkt mit Serum oder Plasma durchgeführt. Das Serum oder Plasma kann entweder sofort verwendet oder bis zu 24 Stunden bei max. 2-8°C vor dem Testen gelagert werden. Für eine längere Lagerung wird– 20°C empfohlen. Proben nach dem Auftauen vorsichtig mischen.
4.4. Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
Die Reagenzien enthalten Bestandteile humanen Ursprungs. Diese wurden auf anti-HIV 1, anti-HIV 2 und anti-HCV Antikörper sowie auf HBs-Antigen getestet und negativ befundet. Jedoch kann keine der bekannten Testmethoden sicher ausschließen, daß diese Produkte Hepatitis, HIV oder andere Virusinfektionen übertragen können. Daher sollten alle Materialien humanen Ursprungs einschließlich der zu untersuchenden Proben als potentiell infektiös behandelt werden.
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4.5. Durchführung des Assays (s. Tabelle 1)
1. Eine genügende Anzahl von beschichteten Röhrchen wird, wie in Tabelle 1 angegeben, numeriert (Kalibratoren, Kontrollserum, Serumproben).
2. 200 µLKalibrator (bzw. Patientenproben) werden auf den Boden der beschichteten Röhrchen pipettiert. Dabei ist für jede Probe eine neue Pipettenspitze einzusetzen.
3. 100 µL der 125-Anti-hTSH wird in jedes Röhrchen dispensiert.
4. Die Röhrchen werden anschließend auf einem Horizontalschüttler (300 50 UpM) 2 Studen bei 18-25°C geschüttelt.
5. Danach wird in jedes Röhrchen 1 mL Waschpuffer gegeben, dekantiert (abgesaugt) und mit 1 mL nachgewaschen.
6. Die Röhrchen werden dann 1 Minute im Gammazähler gemessen.
4.6. Manuelle Auswertung der Ergebnisse
Eine typische Standardkurve für RIA-gnost® hTSH (coated tube) ist in Abbildung 2 dargestellt.
Berechnen Sie für jede Röhrchengruppe die mittlere Anzahl.
Erstellen Sie eine Standardkurve, indem Sie den CPM der Kalibratoren gegen ihre Konzentrationen auftragen.
Die Probenwerte direkt von der Kurve ablesen. Den abgelesenen Wert ggf. um den Verdünnungsfaktor berichtigen.
Als Kalibrationskurve wird die Splinefunktion empfohlen. Andere Funktionen ergeben möglicherweise leicht unterschiedliche Ergebnisse.
Röhrchen art
Mittlere Cpm
Konzentration µU/mL
Kalibrator 0 185 0
Kalibrator 1 381 0.12
Kalibrator 2 823 0.44
Kalibrator 3 2235 1.50
Kalibrator 4 6854 4.90
Kalibrator 5 19640 15.00
Kalibrator 6 50062 54.00
Kontrolle 2962 1.91
4.7. Interferenzen
Das Vorhandensein von Bilirubin in Konzentrationen bis zu 250 mg/L, Hämoglobin bis zu 10 g/L und Triglyceriden bis zu 20 g/L haben keine Auswirkungen auf die Ergebnisse der Verabreichung. Die Immunisierung ist gegen heterophile Antikörper geschützt, jedoch kann keine Garantie für vollständigen Schutz gegeben werden.
5. Grundregeln zum Strahlenschutz
Dieses Produkt ist radioaktiv und darf nur von autorisierten Personen und in Laboratorien mit einer entsprechenden Umgangsgenehmigung in Empfang genommen, gekauft, verwahrt oder verwendet werden. Es darf keinesfalls Menschen oder Tieren verabreicht werden.
Der Erwerb, die Verwahrung, die Verwendung und die Entsorgung radioaktiver Substanzen unterliegen der geltenden Gesetzgebung des Nutzungslandes.
Die Einhaltung der Grundregeln zum Strahlenschutz gewährleistet eine angemessene Sicherheit.
Nachstehend ein kurzer Überblick:
Radioaktive Substanzen sind in ihrem Originalbehälter an den dafür bestimmten Plätzen aufzubewahren.
Das Eingangs- und Lagerbuch für radioaktive Substanzen muss immer auf dem neuesten Stand sein.
Der Umgang mit radioaktiven Substanzen hat in speziell gekennzeichneten Räumen mit Zugangsbeschränkungen (Kontrollbereich) zu geschehen.
Im Kontrollbereich keine Lebensmittel und Getränke verzehren, nicht rauchen und keine Kosmetika auftragen.
Radioaktive Lösungen niemals mit dem Mund pipettieren.
Den direkten Kontakt mit radioaktiven Substanzen durch das Tragen von Schutzkitteln und handschuhen vermeiden.
Kontaminierte Laborgeräte und Glasware muss entsprechend entsorgt werden, um Kreuzkontaminationen verschiedener Isotope zu verhindern.
Jeder Fall von Kontamination oder der Verlust radioaktiver Substanzen muss nach den geltenden Vorschriften behandelt werden.
Die Entsorgung aller radioaktiven Abfälle hat in Übereinstimmung mit der geltenden Gesetzgebung zu erfolgen.
µUI/ml TSH
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
CPM
48 500
38 800
29 100
19 400
9 700
OCPL07-TSH
Cisbio Bioassays – April 2018 - Modell 24
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Tabelle 1 : Durchführung des hTSH-Assays
Kalibratoren
(L) Kon-
troll- serum
(L)
Proben (L)
Beschriftung der Teströhrchen
CAL0 CAL1 CAL2 CAL3 CAL4 CAL5 CAL6 C 1 2 Etc.
Kalibratorens CAL0
CAL1 CAL2 CAL3 CAL4 CAL5
CAL6
200/200 200/200
200/200
200/200
200/200
200/200
200/200
Kontrollserum 200/200
Proben 200
200 Etc.
Anti-hTSH-Tracer ◄--- 100 µL ---►
2 Stunden schütteln (300 50 UpM)
Waschpuffer ◄--- 1 mL ---►
Dekantieren (absaugen); mit 1 mL nachwaschen
Messen
BIBLIOGRAPHY :
