Gudrun Herrling
Pharmakokinetische und thrombolytische Eigenschaften des Plasminogenaktivators Alteplase beim Pferd
Ziel dieser Studie war es, das thrombolytischen Potenzial des Plasminogenaktivators Alteplase an in vitro erzeugten equinen Thromben im Vergleich zu humanen Thromben zu testen und in einer zweiten Untersuchung die pharmakokinetischen und pharmakodynamischen Eigenschaften von Alteplase an gesunden Pferden zu überprüfen.
Für einen in vitro-Versuch wurde von sieben klinisch gesunden Pferden (17,0 ± 6,76 Jahre) und von drei klinisch gesunden Menschen (22,3 ± 1,15 Jahre) Vollblut gewonnen. Das Herstellen der in vitro-Thromben erfolgte über ein standardisiertes Verfahren durch Zugabe von Thromboplastin und Calciumchlorid.
Die Thromben wurden ab einem Alter von vier Stunden in equinem oder humanem Plasma durch Zugabe von Alteplase lysiert. Die gewählten Konzentrationsstufen der Alteplase entsprachen 0,5 µg/ml, 1,5 µg/ml, 3,5 µg/ml und 5 µg/ml für die Lyse der equinen Thromben, und 0,05 µg/ml, 0,15 µg/ml, 0,5 µg/ml und 1,5 µg/ml bei den humanen Thromben. Die quantitative Bestimmung der Thrombolyse erfolgte durch das Wiegen der Thromben vor Beginn der Thrombolyse, gefolgt von vier Messungen im Abstand von 60 Minuten. Darüber hinaus wurde zu denselben Messzeitpunkten der Gehalt der D-Dimere im Plasma des Lysesystems bestimmt.
In der in vitro-Studie konnte eine Thrombolyse der equinen und humanen Thromben durch Zugabe von rTPA nachgewiesen werden. Das Gewicht der equinen Thromben nahm bei einer rTPA-Konzentration von 0,5 µg/ml um 56 % ab. Bei 1,5 µg/ml kam es zu einer Gewichtsreduktion von 86 %. Bei 3,5 µg/ml war nach vier Stunden Lysezeit das Thrombusgewicht um 90 %, und bei einer rTPA-Konzentration von 5 µg/ml um 92 % gesunken. Die humanen Thromben verloren bei einer rTPA-Konzentration von
0,05 µg/ml nach vier Stunden 90 %, bei 0,15 µg/ml 82 %, bei 0,5 µg/ml 70 % und bei 1,5 µg/ml 62 % ihres Gewichts.
Die D-Dimer- Konzentration stieg bei den equinen Thromben nach vierstündiger Lysezeit auf mittlere Werte zwischen 4,3 und 10,2 mg/l. Bei der Lyse der humanen Thromben stiegen die D-Dimer-Werte auf 2,69 bis 4,93 mg/l.
Bei den Equiden stellte sich heraus, dass eine rTPA-Plasmakonzentration von 1,5 µg/ml ein signifikant besseres Lyseergebnis als die anderen rTPA-Konzentrationen erbrachte. Bei den Menschen war eine signifikant bessere Thrombolyse bei 0,15 µg/ml erreichbar.
Die pharmakokinetische Untersuchung erfolgte an acht klinisch gesunden Versuchspferden (11,88 ± 5,14 Jahre; 582,12 ± 61,98 kg KGW). Sie bekamen über eine Infusionspumpe über 30 Minuten verschiedene Dosierungen an Alteplase (Actilyse®, Boehringer-Ingelheim, Ingelheim) verabreicht. Diese Dosierungen entsprachen 0,25 mg/kg (n = 1), 0,5 mg/kg (n = 1) und 1 mg/kg (n = 6). Der rTPA-Plasmaspiegel wurde vor der Infusion und über weitere 300 Minuten in engen Intervallen bestimmt und die hämatologischen Parameter und Gerinnungswerte zusätzlich alle 12 Stunden über zwei Folgetage gemessen. Im Einzelnen wurden der Hämatokrit, die Leukozytenzahl, die Erythrozytenzahl, der Gesamteiweißgehalt und die Thrombozytenzahl bestimmt. Die Gerinnungswerte setzten sich aus der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit, der Prothrombinzeit, der Thrombinzeit und dem Fibrinogengehalt zusammen.
Während der Applikation des Plasminogenaktivators und in den folgenden 24 Stunden erfolgte eine engmaschige Überwachung des Allgemeinbefindens der Versuchstiere.
Alle Pferde zeigten während und nach der Wirkstoffapplikation ein gutes Allgemeinbefinden. Es konnte mit der rTPA-Dosis von 1 mg/kg ein durchschnittlicher Plasmaspiegel von 1,25 ± 0,27 µg/ml erreicht werden. Die Absorptionshalbwertszeit (t1/2α) betrug im Mittel 6,81 ± 1,48 Minuten, die Eliminationshalbwertszeit (t1/2ß) 317,93
± 373,77 Minuten. Die Area under the curve (AUC) erreichte 50334 ± 17627 min · ng/ml und die Gesamtplasmaclearance lag bei 21,46 ± 5,67 ml/min/kg.
Die hämatologischen Parameter und die Werte der Blutgerinnung wichen im Mittel nicht von den Referenzwerten ab.
In den vorliegenden Untersuchungen konnte gezeigt werden, dass eine Thrombolyse equiner in-vitro Thromben mit dem rekombinanten Plasminogenaktivator Alteplase möglich ist. Die intravenöse Applikation von Alteplase wird von Pferden gut toleriert und die erreichten Plasmaspiegel können als Basis für einen therapeutischen Ansatz angenommen werden.
6. Summary
Gudrun Herrling
Pharmacokinetic and thrombolytic effects of the recombinant plasminogen activator Alteplase in horses
The aim of the present study was firstly to compare the thrombolytic effect of the Plasminogen activator Alteplase over in vitro generated equine thrombi versus in vitro generated human thrombi. Secondly, the pharmacokinetics of Alteplase in healthy horses were determined.
The lyses of ex vivo generated human and equine thrombi was analysed. Adding thrombin to whole blood taken from 7 horses and 3 human, thrombi were generated during 4 h in saline solution. Different Alteplase concentrations were added to the solution. The extent of lysis was measured by the decrease of the thrombi weight over a period of 4 h. D-Dimer concentration in the lysis medium was also used as a lysis indicator.
In equine thrombi when 0,5 µg/ml; 1,5 µg/ml; 3,5 µg/ml and 5 µg/ml of Ateplase was added a weight decrease of 56 %; 86 %; 90 % and 92 % was detected, while the D-Dimer concentration in the lysis medium increased from 4,27 to 10,58 mg/l. When Alteplase concentration of 0,05 µg/ml, 0,15 µg/ml, 0,5 µg/ml and 1,5 µg/ml were added to human thrombi, a weight decrease of 90 %; 82 %; 70 % and 62 % was detected, and the D-Dimer concentration in the lysis medium increased from 2,69 to 4,93 mg/l. Results show that lysis of ex vivo generated equine thrombi is possible with Altplase as well as in human thrombi.
Afterwards, pharmacokinetics of Alteplase were determined in 8 healthy horses. A single dose was applied in a 30 Minutes infusion time (Dosage: 0,25 mg/kg, n = 1;
0,5 mg/kg, n = 1; 1 mg/kg, n = 6). Coagulation-related variables, blood count and clinical parameters were taken before the treatment and until 48 h after treatment. In addition, plasma antigen concentration (using an
enzyme-linked-immunosorbent-assay) was measured until 300 h after the infusion start. None of the horses showed an adverse reaction to the Alteplase infusion. Some horses showed slightly abnormal blood parameters. The 1 mg/kg dose yielded the following pharmacokinetic parameters: Cmax = 1,25 ± 0,27 µg/ml; CL = 21,46 ± 5,67 ml/min/kg; dominant half life t1/2α = 6,81 ± 1,48 minutes; t1/2β = 317,93 ± 373,77 minutes;
AUC = 50334 ± 17627 min · ng/ml.
These findings indicate that a single dose of 1mg/kg Ateplase is adequate to be used in the thrombolytic therapy in horses. Further studies have to be performed to determine the Alteplase effectiveness in horses with jugular vein thrombosis.
7. Literaturverzeichnis
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8. Anhang
Tab. 1: Relative und absolute Thrombengewichte der Pferdethromben zu den Messzeitpunkten (MZP) 0 bis 4
ID Art Geschlecht Al-
ID Art Geschlecht
ID Art Geschlecht Al-
ID Art Geschlecht
ID Art Geschlecht
ID Art Geschlecht Al- Leerkästchen: Gewicht der Thromben nicht zu bestimmen, da diese sich vom Faden gelöst hatten
Tab. 2: D-Dimer-Werte (mg/l) der Proben des equinen Plasmas zu jedem Messzeitpunkt (MZP)
Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
1 0 1 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
1 0 2 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
1 0 3 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
1 0,5 5 0,10 0,60 2,80 5,30 10,60
1 0,5 6 0,10 1,20 3,60 6,70 9,90
1 0,5 7 0,10 1,30 4,00 4,90 8,70
1 1,5 9 0,10 3,40 5,60 7,90 9,10
1 1,5 10 0,10 9,80 14,50 19,60 20,00
1 1,5 11 0,10 7,50 5,50 8,90 10,90 1 3,5 13 0,10 1,60 3,10 4,20 5,40 1 3,5 14 0,10 3,10 3,50 5,20 6,20 1 3,5 15 0,10 2,30 3,30 5,40 5,70
1 5 17 0,10 2,00 3,20 5,50 6,30
1 5 18 0,10 2,30 3,30 4,50 7,80
1 5 19 0,10 1,80 2,90 5,10 5,80
Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
2 0 2 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
2 0 3 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
2 0 4 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
2 0,5 5 0,10 1,80 4,60 8,90 9,10
2 0,5 6 0,20 3,30 8,20 15,10 18,10
2 0,5 7 0,20 3,10 5,90 12,90 15,80
2 1,5 10 0,10 2,60 6,70 8,50 10,00 2 1,5 11 0,20 4,50 8,60 9,50 9,10
2 1,5 12 0,20 5,60 10,90 20,00 20,00
2 3,5 13 0,10 1,60 2,20 7,80 6,50 2 3,5 14 0,20 2,80 4,00 5,10 7,00 2 3,5 15 0,20 2,50 3,60 6,10 7,50
2 5 17 0,10 2,30 4,90 6,00 8,20
2 5 18 0,20 1,80 3,50 6,60 8,10
2 5 19 0,20 2,50 3,90 5,50 7,90
Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
3 0 1 0,10 0,1 0,1 0,1 0,1 3 0 2 0,10 0,1 0,1 0,1 0,1 3 0 3 0,10 0,1 0,1 0,1 0,1
3 0,5 5 0,10 1,5 3,6 4,9 8,6
3 0,5 6 0,10 2,6 4,5 7 8,2
3 0,5 7 0,10 2,3 6,8 11,6 15,8
3 1,5 9 0,10 3,2 5,5 5,9 6,3
3 1,5 10 0,10 3 5,2 8,2 5 3 1,5 11 0,10 4 5,4 7 7,7 3 3,5 13 0,10 1,4 2,4 3,4 3,6
3 3,5 14 0,10 2,2 3 3,7 3,6
3 3,5 15 0,10 2,6 3,6 3,7 4,4
3 5 17 0,10 2 2,7 3,8 4
3 5 18 0,10 1,6 2 2,8 3,2
3 5 19 0,10 2 2,9 4,2 3,9
Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
4 0 1 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
4 0 2 0,10 0,10 0,10 0,20 0,10
4 0 3 0,10 0,20 0,20 0,30 0,30
4 0,5 5 0,10 0,40 1,70 3,90 5,60
4 0,5 6 0,10 1,40 3,30 5,70 4,80
4 0,5 7 0,10 2,40 3,80 5,70 5,70
4 1,5 9 0,10 2,40 3,10 4,80 4,90
4 1,5 10 0,10 1,80 3,30 4,60 5,00 4 1,5 11 0,10 2,60 3,90 4,00 5,80 4 3,5 13 0,10 1,20 1,20 1,20 1,40 4 3,5 14 0,10 0,50 1,60 2,20 2,40 4 3,5 15 0,10 0,60 0,90 1,70 2,00
4 5 16 0,10 0,90 1,60 2,00 3,50
4 5 17 0,10 0,90 2,20 2,20 2,40
4 5 18 0,10 1,10 2,70 2,40 2,70
Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
5 0 1 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
5 0 2 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
5 0 3 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
5 1,5 4 0,10 7,40 16,30 17,60 14,80
5 1,5 5 0,10 3,80 6,20 7,00 7,60
5 1,5 6 0,10 6,40 13,00 11,90 10,50
Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
6 0 7 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
6 0 8 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
6 0 9 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
6 1,5 10 0,10 3,20 3,30 3,80 4,20 6 1,5 11 0,10 1,00 1,70 2,40 2,90 6 1,5 12 0,10 1,10 1,80 2,50 2,60 Pferd r-TPA Konz. µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
7 0 13 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
7 0 14 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
7 0 15 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
7 1,5 16 0,10 7,30 13,00 10,50 13,80
7 1,5 17 0,10 11,80 20,00 13,80 20,00
7 1,5 18 0,10 7,20 16,20 15,80 15,10
Tab. 3: Relative und absolute Thrombengewichte der Thromben aus Humanblut zu den Messzeitpunkten (MZP) 0 bis 4
ID Art Geschlecht Al-
ID Art Geschlecht
Leerkästchen: Gewicht der Thromben nicht zu bestimmen, da diese sich vom Faden gelöst hatten
Tab. 4: D-Dimer-Werte (mg/l) der Proben des menschlichen Plasmas zu jedem Messzeitpunkt (MZP)
Mensch rTPA-Konz µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
1 0 1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 1 0 2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 1 0 3 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 1 0,5 5 0,1 1,2 3,3 3,7 3,5 1 0,5 6 0,1 2,2 5,1 5,4 3,1 1 0,5 7 0,1 1,3 3,1 4,1 3,5 1 0,15 9 0,1 1,7 2,7 3,1 2,9 1 0,15 10 0,1 1,8 3,3 5,3 3,6 1 0,15 11 0,1 1,9 3,1 3,4 3,2 1 0,5 13 0,1 1,3 2,3 3,2 2,5 1 0,5 14 0,1 1,3 2,4 2,4 2,3 1 0,5 15 0,1 1,5 2,6 2,7 2,5 1 1,5 17 0,1 2 1,2 2,8 3,2 1 1,5 18 0,1 1,2 2 2,6 2,4 1 1,5 19 0,1 1,2 2,8 2,4 2,4
Mensch r-TPA-Konz
µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
2 0 1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 2 0 2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 2 0 3 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 2 0,5 5 0,1 1,2 3,6 5,6 6
2 0,5 6 0,1 2 3,6 5,2 6,8
2 0,5 7 0,1 1,2 4,8 6,6 7,2 2 0,15 9 0,1 2,4 4 4,8 6,8 2 0,15 10 0,1 2 3,6 4,8 4,8 2 0,15 11 0,1 3,2 6,4 7,6 7,6 2 0,5 13 0,1 1,6 2,8 4,8 4 2 0,5 14 0,1 3,2 4,8 6 6 2 0,5 15 0,1 2 3,2 4 5,2 2 1,5 17 0,1 1,6 2,8 4,4 5,2
2 1,5 18 0,1 2 4 4,4 3,6
2 1,5 19 0,1 1,6 2,4 4 2,8
Mensch r-TPA-Konz
µg/ml Clotnr. MZP 0 MZP 1 MZP 2 MZP 3 MZP 4
3 0 1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 3 0 2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 3 0 3 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 3 0,5 5 0,1 2,2 3,2 4,5 9,8 3 0,5 6 0,1 2,8 3,9 5,6 6 3 0,5 7 0,1 3,4 5 6,8 6,8 3 0,15 9 0,1 2,7 3,2 3,9 4,4 3 0,15 10 0,1 2,7 4,7 3,5 6,1 3 0,15 11 0,1 3,5
3 0,5 13 0,1 1,6 2,6 2,7 2,8 3 0,5 14 0,1 1,6 2,6 2,8 3,2 3 0,5 15 0,1 2,7 2,6 2,9 3 3 1,5 17 0,1 0,8 1,3 2,4 1,5 3 1,5 18 0,1 0,9 1,2 1,5 1,5 3 1,5 19 0,1 0,8 1,2 1,5 1,6
Tab. 5: Übersicht über die 6 Pferde der pharmakokinetischen Untersuchung des Hauptversuchs (HV) Pferd TPA mg/kg Geschlecht Alter Jahre Gewicht kg
P1HV 1 Stute 17 524
P2HV 1 Wallach 16 607
P3HV 1 Wallach 5 488
P4HV 1 Stute 8 580
P5HV 1 Stute 14 680
P6HV 1 Stute 13 568
Tab. 6: rTPA Plasmaspiegel in ng/ml des Hauptversuchs in den Minuten 0 bis 300
Minute Pferd 1 Pferd 2 Pferd 3 Pferd 4 Pferd 5 Pferd 6 MW STABW
0 0,37 1,72 0,22 0,67 5,38 1,77 1,69 1,93 1 344,13 290,03 320,76 235,74 201,29 259,94 275,32 53,48 6 674,89 750,37 475,70 624,33 646,33 657,60 638,20 90,52 12 826,73 1205,30 747,81 844,99 762,11 762,08 858,17 174,53 18 922,20 1433,11 875,22 1187,30 1015,07 883,86 1052,79 219,67 24 997,37 1773,51 1006,62 1244,35 1057,05 885,36 1160,71 322,34 30 1221,38 2088,74 1243,71 1276,64 1004,31 1011,65 1307,74 400,56 36 544,09 1132,45 534,61 728,74 636,17 671,88 707,99 220,90 48 156,21 408,48 174,79 286,33 184,07 247,91 242,96 94,81 60 89,30 228,57 70,43 132,40 88,27 129,90 123,14 57,25 72 70,50 94,31 51,03 65,34 61,57 72,98 69,29 14,49 84 21,87 21,19 30,98 26,22 25,84 22,11 24,70 3,75 96 20,29 21,23 27,14 25,36 23,47 19,48 22,83 3,02 108 18,33 20,30 26,42 23,95 23,40 20,09 22,08 3,01 120 18,17 19,21 22,83 20,33 22,42 17,77 20,12 2,14 135 17,60 19,67 22,21 21,59 20,38 18,02 19,91 1,86 150 18,11 18,18 21,22 19,86 19,13 18,18 19,11 1,24 165 16,42 17,43 19,55 19,25 18,40 16,84 17,98 1,29 180 15,65 20,10 16,41 16,66 16,14 15,71 16,78 1,67 195 15,23 18,88 14,66 15,24 15,68 15,38 15,85 1,52 210 13,96 16,29 12,76 14,52 14,85 14,51 14,48 1,15 225 12,94 17,55 11,47 13,36 14,33 13,94 13,93 2,03 240 12,60 13,96 10,86 13,06 14,45 12,91 12,97 1,25 300 11,11 14,46 9,35 10,33 12,50 12,72 11,75 1,84
Tab. 7: Pharmakokinetische Ergebnisse des Hauptversuchs Pferd rTPA
(mg/kg) Cmax
(ng/ml) AUC
(min·ng/ml) Cl
(ml/min/kg) t1/2α
(min) t1/2ß (min)
P1HV 1 1090,06 38672,27 25,86 4,90 94,87
P2HV 1 1731,62 84452,02 11,84 8,28 1060,55
P3HV 1 966,04 35429,53 28,23 5,10 85,33
P4HV 1 1350,15 50399,43 19,84 7,67 171,63
P5HV 1 1208,47 45399,34 22,03 6,86 170,50
P6HV 1 1169,04 47653,66 20,98 8,02 324,69
MW - 1252,56 50334,37 21,46 6,81 317,93
s - 267,00 17627,92 5,67 1,48 373,77
Tab. 8: Blutparameter und Gerinnungswerte des Hauptversuchs
Pferd 1 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 39 47 9,4 7,71 86 98 60 21 1,00
60 42 70 9,5 8,29 124 85 52 20 1,00
120 40 72 8,7 7,92 106 92 53 18 1,05
180 41 72 8,8 8,14 117 92 54 18 1,05
240 41 72 8,8 8,12 104 85 36 17 1,15
300 42 9,2 8,34 105 90 52 17 1,00
h12 41 70 9,2 8,17 117 85 52 17 1,00
h24 40 70 9,6 7,93 115 79 58 18 1,10
h36 43 72 9,9 8,4 109 71 50 19 1,10
h48 39 74 8,9 7,63 109 69 50 18 1,15
Pferd 2 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 31 66 6,32 5,3 168 71 48 20 1,05
60 33 66 6 6,8 184 100 44 19 1,10
120 32 68 5,2 6,58 182 100 36 17 1,15
180 49 74 8,8 9,65 178 59 42 20 1,15
240 41 70 7,6 8,37 137 100 48 18 1,05
300 36 70 6,9 7,36 133 90 46 17 1,00
h12 36 71 7 7,18 186 97 48 19 1,20
h24 35 68 7 6,3 189 100 48 19 1,00
h36 35 70 5,8 7,06 195 100 50 18 1,25
h48 34 70 6 6,92 172 90 48 19 1,15
Pferd 3 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 38 68 7,8 7,91 150 70 48 16 1,15
60 37 68 7,6 7,61 143 76 59 16 1,00
120 38 68 8,1 7,91 114 90 55 15 1,15
180 39 70 8,1 7,97 138 85 54 15 1,05
240 37 68 9 7,59 164 85 49 16 1,00
300 37 68 9,7 7,57 96 62 56 16 1,00
h12 38,8 76 8,4 8 160 64 56 21 1,10
h24 46 74 9,3 9,34 170 60 53 18 1,00
h36 42 68 7,7 8,42 163 52 64 18 1,00
h48 41,4 72 8 8,37 176 52 66 18 1,00
Pferd 4 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 37 68 7,2 7,77 49 100 66 18 1,45 60 37 66 7,4 7,76 72 100 47 17 1,35 120 36 66 7,6 7,77 74 100 41 17 1,50 180 36 68 7,4 7,36 74 100 44 19 1,40 240 38 68 7 7,4 77 100 42 18 1,40 300 37 66 6,6 7,3 80 100 46 19 1,30 h12 41 70 8,5 8,53 89 88 64 21 1,20 h24 38 70 7 7,93 97 100 63 18 1,35 h36 44 66 6,1 10,24 93 100 63 18 1,35 h48 35 66 6,7 8,62 86 100 61 19 1,30
Pferd 5 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 36 68 7,1 7,67 128 100 62 20 1,05
60 36 67 6,4 7,66 122 100 58 19 1,10
120 37 70 6,7 7,79 129 100 55 19 0,93
180 34,9 70 6,8 7,31 124 97 54 19 1,05
240 33,8 68 6,2 7,03 125 100 54 20 0,95
300 38 70 6,7 7,99 131 100 63 20 1,05
h12 38 70 5 8,03 200 100 60 20 0,95
h24 43 72 8,1 9,04 124 100 55 20 0,93
h36 40 70 8,1 8,84 123 100 56 20 1,00
h48 41 74 8,1 8,59 111 100 58 20 1,00
Pferd 6 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 40 70 8,2 7,52 142 74 50 17 1,1
60 40 70 7,8 7,72 150 100 50 18 1,15
120 39 68 7,6 7,55 151 100 45 17 1,05
180 41 70 8,1 7,83 140 100 45 18 1,10
240 41 72 7,9 7,95 152 100 42 17 1,25
300 45 72 8,6 8,54 139 100 38 16 1,20
h12 41 66 7,9 7,8 149 100 50 20 1,00 h24 46 72 7,1 8,75 72 97 52 18 1,20 h36 44 72 8,8 8,3 153 100 60 18 1,20
h48 42 68 8 7,93 142 100 55 17 1,20
Tab. 9: Übersicht über die 2 Pferde der pharmakokinetischen Untersuchung des Vorversuchs (VV) Pferd rTPA mg/kg Geschlecht Alter Jahre Gewicht kg
P1VV 0,25 Wallach 17 565
P2VV 0,5 Stute 5 645
Tab. 10: r-TPA Plasmaspiegel in ng/ml des Vorversuchs
Minute Pferd 1
0,25 mg/kg Pferd 2 0,5 mg/kg
0 4,16 0,97 1 40,10 161,44 6 88,17 370,85 12 106,44 505,54 18 147,79 685,42 24 193,94 702,95 30 199,71 737,08 36 53,56 485,24 48 22,79 178,04 60 18,94 78,41 72 10,45 41,97 84 9,80 19,01 96 8,83 18,04 108 8,40 16,50 120 7,99 14,48 135 6,71 13,62 150 6,74 12,80 165 6,43 11,42 180 5,63 9,94 195 5,55 9,05 210 5,56 9,23 225 4,57 9,21 240 4,68 8,18
Tab. 11: Pharmakokinetische Ergebnisse des Vorversuchs Pferd rTPA
(mg/kg)
Cmax (ng/ml)
AUC
(min ng/ml)
Cl
(ml/min/kg)
t1/2α (min)
t1/2ß (min)
P1VV 0,25 199,71 7071,47 35,35 3,73 113,54
P2VV 0,5 779,05 29417,64 17,00 7,80 147,96
Tab. 12: Blutparameter und Gerinnungswerte des Vorversuchs
Pferd 1 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 45 64 7,8 8,78 103 100 63 15 0,90
60 n n n n n 100 59 15 0,95
120 n n n n n 100 51 15 0,90
180 n n n n n 100 33 15 0,85
240 n n n n n 100 45 15 1,10
300 n n n n n 100 63 14 0,78
h12 37,3 64 7,3 7,44 139 100 59 15 0,98
h24 34,8 64 6,7 6,98 133 80 85 16 1,00
h36 38,3 66 5,7 7,65 97 100 60 16 1,00 h48 34 64 7,1 6,71 85 100 59 15 1,20 n= keine Werte vorhanden
Pferd 2 HTK l/l GE g/l WBC G/l RBC T/l Thrombozyten
G/l aPTT % PTT sec TZ sec Fibrinogen g/l
Minute/Stunde
0 39 60 6,9 8,64 130 100 48,8 16,2 1,15
60 n n n n n 100 49,4 17,7 1,10
120 n n n n n 100 48,6 17,2 1,20
180 n n n n n 100 50,9 16,8 1,15
240 n n n n n 100 49,7 17,1 1,15
300 n n n n n 100 49,3 17,8 1,20
h12 41,9 62 8,2 9,29 176 100 51 19 1,10
h24 41 60 7,3 9,06 175 100 52 19 1,00
h36 46 62 7,3 10,12 177 100 53 18 1,05
h48 40 66 5,6 8,78 159 100 52 19 1,00
n= keine Werte vorhanden
Danksagung
Mein erster Dank gilt Herrn Prof. Dr. Karsten Feige für die Überlassung des interessanten Themas und der sorgfältigen Durchsicht der Manuskripte.
Bedanken möchte ich mich bei der Firma Boehringer-Ingelheim, insbesondere bei Herrn Dr. Albrecht Fenner, für das Bereitstellen des Plasminogenaktivators und der großzügig gewährten Benutzung der Laboratorien.
Ein großer Dank gilt Herrn Dr. Jürgen Dämmgen, Frau Joanne van Ryn, PhD und Herrn Dr. Werner Kliche für die große Unterstützung und Hilfestellung während und nach meiner Zeit in Biberach.
Ganz herzlich bedanken möchte ich mich bei allen Mitarbeitern der Forschungsabteilung, besonders bei Frau Monika Kink-Eiband und den Mitarbeitern der Qualitätssicherung, hier besonders bei Frau Elisabeth Hirthe für die herzliche Aufnahme und die gewährte Hilfestellung.
Herrn Dr. Ullrich Holz möchte ich ganz herzlich für die Hilfe bei den Blutentnahmen danken.
Nicht genug danken kann ich Herrn Prof. Dr. Wolfgang Bäumer für die Unterstützung vor, während und nach der Auswertung der Pharmakokinetik und dass er immer für die auftretenden Probleme eine Lösung wusste.
An dieser Stelle auch ein großes Dankeschön an die Mitarbeiter und Doktoranden in der Arbeitsgruppe Kietzmann/Bäumer für die freundliche Aufnahme, und insbesondere bei Victoria für die Hilfestellung beim ELISA.
Frau Anja Seemann-Jensen und den Mädels im Labor ein großer Dank für die Bearbeitung der unzähligen Blutproben und Marvin und Klaus ein Dank
Ein Dank an Herrn Dr. Karl Rohn für die Hilfe und Unterstützung bei der statistischen Auswertung dieser Arbeit.
Allen Doktoranden des ehemaligen Doktorandenzimmers möchte ich für die gemeinsame Zeit und die vielen schönen Momente danken. Mein besonderer Dank gilt Claudia und Caro für das aufmerksame Korrekturlesen in deutscher und englischer Sprache und für alles was Ihr für mich in dieser Zeit getan habt.
Tausend Dank an Ljewin für seine fortwährende Unterstützung und Geduld.
Beides schien in dieser Zeit unendlich zu sein.
Mein größter Dank gebührt meinen Freunden, meiner Familie und besonders meinen Eltern für Ihre Unterstützung und Zuversicht, die mich immer begleiten.