5. Ergebnisse
5.6 Wirkung von Lysophosphatidsäure auf die Apoptose der
5.6.3 Western Blot-Analyse der LPA-Wirkung auf die Expression des Bax-Proteins
ie Zellen wurden mit und ohne Zugabe von LPA einem Serumentzug ausgesetzt. Dabei
bb. 5.6.8 Wirkung von LPA auf die Menge an Bax-Protein bei längeren Inkubationszeiten
s ist zu erkennen, dass die Menge von Bax unter Serumentzug höher ist, als bei Zugabe von Bax
D
wurden Inkubationszeiten von zwei bis 24 Stunden gewählt. Bei allen durchgeführten Versuchen zeigte sich eine Verringerung der intrazellulären Menge des Bax-Proteins unter Anwesenheit von LPA im Vergleich zu dem reinen Serumentzug.
Apoptoseeinleitung durch Serumentzug
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 24 Std.
Bax
Bax
Thekazellen wurden für 24 Stunden 1.: mit 1,5% fötalem Kälberserum 2.: unter Serumentzug
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht.
1. 2. 3.
β-Aktin
Bax
Apoptoseeinleitung durch Serumentzug
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 24 Std.
Bax
Bax
Thekazellen wurden für 24 Stunden 1.: mit 1,5% fötalem Kälberserum 2.: unter Serumentzug
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht.
1. 2. 3.
β-Aktin
Bax
Apoptoseeinleitung durch Serumentzug
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 24 Std.
Bax
Bax
Thekazellen wurden für 24 Stunden 1.: mit 1,5% fötalem Kälberserum 2.: unter Serumentzug
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht.
1. 2. 3.
β-Aktin
Bax
Apoptoseeinleitung durch Serumentzug
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 24 Std.
Bax
Bax
Thekazellen wurden für 24 Stunden 1.: mit 1,5% fötalem Kälberserum 2.: unter Serumentzug
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht.
1. 2. 3.
β-Aktin
n = 1
A
E
Serum. Unter Zugabe von LPA wird die Menge des Bax-Proteins trotz eines Serumentzuges nicht erhöht (siehe Abb. 5.6.8).
β-Aktin
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht.
Als Kontrolle der gleichen Proteinmenge wurde ß-Aktin sichtbar gemacht, welches in allen Zellen in der gleiche Konzentration vorhanden ist.
86kDa
86kDa Thekazellen wurden f ür 4 Stunden
1.: unter Serumentzug
2.: mit 1,5% f ötalem K älberserum
Wirkung von LPA
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 4 Std.
Bax
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz 86kDa
86kDa Thekazellen wurden f ür 4 Stunden
1.: unter Serumentzug
2.: mit 1,5% f ötalem K älberserum
Wirkung von LPA
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 4 Std.
Bax
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht.
Als Kontrolle der gleichen Proteinmenge wurde ß-Aktin sichtbar gemacht, welches in allen Zellen in der gleiche Konzentration vorhanden ist.
wurde ß-Aktin sichtbar gemacht, welches in allen Zellen in der gleiche Konzentration vorhanden ist.
86kDa
86kDa Thekazellen wurden f ür 4 Stunden
1.: unter Serumentzug
2.: mit 1,5% f ötalem K älberserum
Wirkung von LPA
FCS Serumentzug LPA
Inkubation über 4 Std.
Bax
Inkubation über 4 Std.
Bax
3.: unter Serumentzug mit 5µM LPA inkubiert, die Zellen homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher Konzentration auf ein Gel aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine Membran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden Antikörpers und Chemilumineszenz 86kDa
86kDa Thekazellen wurden f ür 4 Stunden
1.: unter Serumentzug
2.: mit 1,5% f ötalem K älberserum
Abb. 5.6.9 Wirkung von LPA auf die Menge an Bax-Protein bei kurzen Inkubationszeiten
Die Versuche zeigen, dass die Menge von Bax unter Serumentzug höher ist, als bei Zugabe von Serum. Unter Verwendung von LPA wird die Menge des Bax-Proteins trotz eines Serumentzuges nicht erhöht (siehe Abb. 5.6.9).
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stdunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stdunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
*
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
*
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stdunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stdunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA bei Apoptoseeinleitung mit mehr als 24 Stunden Serumentzug
0
Inkubation über mehr als 24 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
*
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
**
Wirkung von LPA nach Apoptoseeinleitung mit kurzem Serumentzug
Inkubation über 4 Stunden
Bax, arbiträre Einheiten
*
Abb. 5.6.10 Statistische Auswertung Statistisch
L e Auswertung der antiapoptotischen Wirkung von LPA auf Thekazellen.
inks: Apoptoseeinleitung mit 24-48 Stunden Serumentzug en Serumentzug
LPA inkubiert, die Zellen Konzentration auf ein Gel embran übertragen. Mit Hilfe eines entsprechenden
ohl bei urzen Inkubationszeiten, als auch bei Inkubationszeiten von mehr als 24 Stunden eine
Rechts: Apoptoseeinleitung mit 4 Stund
Thekazellen wurden 1.: unter Serumentzug, 2.: unter Serumentzug mit 5 µM homogenisiert und deren Proteine extrahiert. Die Proteine wurden in gleicher aufgetragen, einer Elektrophorese unterzogen und auf eine M
Antikörpers und Chemilumineszenz wurde das Protein Bax sichtbar gemacht. (* = P< 0,02 bei n = 3).
ie Statistische Auswertung der Versuche zeigt, dass die Verwendung von LPA sow D
k
signifikante Reduktion von Bax im Vergleich zum reinen Serumentzug bewirkt (siehe Abb.
5.6.10).