Brutschrank Cytoperm Heraeus, Osterode, Deutschland Blotgerät Fastblot B64 Biometra GmbH, Göttingen Elektrophoresekammer Mini Protean II Bio-Rad Laboratories, München Geldokumentation Gel IX Imager Intas Science Imaging Instruments
GmbH, Göttingen
Heiztisch Bachhofer GmbH, Reutlingen
MINI-Vortex V1 G.Kisker GbR, Steinfurt
Multischalen NunclonTM Nunc GmbH & Co. KG, Roskilde, Dänemark
MultiSUBmini Gelkammer G.Kisker GbR, Steinfurt
Pasteurpipetten Carl Roth GmbH & Co, Karlsruhe Petrischalen TC Dish Nunc GmbH & Co. KG, Roskilde Phasenkontrastmikroskop BX60 Olympus Deutschland GmbH,
Hamburg
Pipetten Eppendorf AG, Hamburg
Eppendorf Research 2,5; 10; 100; 1000 µl
Pipettenspitzen Eppendorf AG, Hamburg
Power Pac P25 Biometra GmbH, Göttingen
Power Pac 300 Bio-Rad Laboratories GmbH,
München
Reinraumwerkbank AURA HZ 48 Nunc GmbH & Co. KG, Roskilde, Dänemark
Spritzenfilter 0,2 µm Millipore GmbH, Schwalbach
Spectrophotometer Genova MK3 HLL Landgraf Laborsysteme GmbH, Langenhagen
Stereomikroskop SZH-ILLD Olympus Deutschland GmbH, Hamburg
Thermocycler Biometra GmbH, Göttingen
TProfessional Basic
Thermomixer Eppendorf AG, Hamburg
Tubes 0,2; 0,5; 1,5 ml Carl Roth GmbH & Co, Karlsruhe UV-Einmalküvetten Brand GmbH & Co KG, Wertheim 12,5 x 12,5 x 45 mm
Ultraschallbad Sonorex TK40 Bandelin electronic GmbH & Co KG, Berlin
Wasserbad 3042 Köttermann GmbH & Co. KG,
Uetze/Hänigsen Zentrifuge Biofuge Fresco Heraeus, Osterode
Software
Intas Imaging Bildaufnahme Software Intas Science Imaging Instruments GmbH, Göttingen,
Cell D 2,6 System Olympus GmbH, Hamburg
Soft Imaging Solutions
ImageQuant TL 7.0 GE Healthcare, Freiburg
SAS 9.1 SAS Institute Inc., Cary, NC, USA
SigmaStat 3.5 Sysstat Software Inc., Erkrath
DNASTAR Lasergene 8
www.gatc-biotech.com/de/bioinformatik/dnastar-software.html BioEdit Sequence Alignment Editor version 7.0.9.0
www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/bioedit.html
Anh
GV: Germinalvesikelstadium, Di/MI: Diakinese/Metaphase I, AI/TI: Anaphase I/Telophase I, MII: Metaphase II; AII/TII: Anaphase II/
Telophase II; deg. : degeneriert
Anh
GV: Germinalvesikelstadium, Di/MI: Diakinese/Metaphase I, AI/TI: Anaphase I/Telophase I, MII: Metaphase II;
AII/TII: Anaphase II/Telophase II; deg. : degeneriert
Tabelle 9: Chromatinstatus von Eizellen nach 0, 5, 26 und 46stündiger IVM im BM+U0126.
Anh
Tabelle 10: Chromatinstatus von Eizellen nach 0, 5, 26, 46, 72 und 94stündiger IVM im BM+BMP6.
GV: Germinalvesikelstadium, Di/MI: Diakinese/Metaphase I, AI/TI: Anaphase I/Telophase I, MII: Metaphase II; AII/TII: Anaphase II/Telophase II; deg. : degeneriert
Tabelle 11: Progesteronkonzentration (ng/ml) in unterschiedlichen Medien.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) nach IVM der KOKs im BM, im BM+U0126 und BM+BMP6 für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h. Jede Kultivierung im betreffenden Medium wurde für jede Maturationszeit mind. viermal wiederholt.
Tabelle 12: 17ß-Estradiolkonzentration (ng/ml) in unterschiedlichen Medien.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) nach IVM der KOKs im BM, im BM+U0126 und BM+BMP6 für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h. Jede Kultivierung im betreffenden Medium wurde für jede Maturationszeit mind. viermal wiederholt.
Tabelle 13: mRNA-Expression nach RT-PCR von StAR in Kumuluszellen.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte der Transkripte aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem Zeitpunkt nach IVM der KOKs im BM, im BM+U0126 und BM+BMP6 für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h.
Tabelle 14: mRNA-Expression nach RT-PCR von CYP11A1 in Kumuluszellen.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte der Transkripte aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem Zeitpunkt nach IVM der KOKs im BM, im BM+U0126 und BM+BMP6 für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h.
Tabelle 15: mRNA-Expression nach RT-PCR von CYP19A1 in Kumuluszellen.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte der Transkripte aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem Zeitpunkt nach IVM der KOKs im BM, im BM+U0126 und BM+BMP6 für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h.
Tabelle 16: mRNA-Expression nach RT-PCR von 3ß-HSD in Kumuluszellen.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte der Transkripte aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem Zeitpunkt nach IVM der KOKs im BM, im BM+U0126 und BM+BMP6 für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h.
Tabelle 17: mRNA-Expression nach RT-PCR von BMP6 in Kumuluszellen.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte der Transkripte aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem
Tabelle 18: mRNA-Expression nach RT-PCR von BMP6 in Oozyten.
Angegeben sind Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte der Transkripte aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem
Tabelle 19: MAPK-Phosphorylierung in Kumuluszellen.
Angegeben sind die Mittelwerte (x) und Standardabweichungen (SD) der relativen Dichte nach IVM der KOKs für 0, 5, 26, 46, 72 und 94 h im BM, BM+U0126 und BM+BMP6 aus mind. drei unabhängigen Versuchen zu jedem Zeitpunkt
BM BM+U0126 BM+BMP6
Teile dieser Arbeit wurden veröffentlicht in:
Zeitschriften:
EBELING, S.; D. TÖPFER u. B. MEINECKE (2011):
Steroidogenesis and the influence of MAPK activity during in vitro maturation of porcine cumulus oocyte complexes.
Reprod Dom Anim 46 (3), 513-519
EBELING, S.; D. TÖPFER, J. M. WEITZEL u. B. MEINECKE (2011):
Bone morphogenetic protein-6 (BMP-6): mRNA expression and effect on steroidogenesis during in vitro maturation of porcine cumulus oocyte complexes.
Reprod Fert Dev, published online 22. September 2011
Vorträge:
TÖPFER, D., S. EBELING u. B. MEINECKE (2010):
Influence of mitogen-activated protein kinase (MAPK) activity on progesterone and 17ß-estradiol secretion of porcine cumulus cells.
43rd Annual Conference of Physiology and Pathology of Reproduction, 35th Mutual Conference on Veterinary and Human Reproductive Medicine, München, 2010 Reprod. Domest. Anim. 45(Suppl.1), 54
EBELING, S.; D. TÖPFER, J. M. WEITZEL u. B. MEINECKE (2011):
Influence of BMP-6 as potential oocyte secreted factor on steroid hormone synthesis of porcine cumulus cells during in vitro maturation.
44rd Annual Conference of Physiology and Pathology of Reproduction, 36th Mutual Conference on Veterinary and Human Reproductive Medicine, Hannover, 2011 Reprod. Domest. Anim. 46(Suppl.1), 12
Posterpräsentation:
Influence of MAPK activity on steroidogenesis in porcine cumulus cells.
44rd Annual Conference of Physiology and Pathology of Reproduction, 36th Mutual Conference on Veterinary and Human Reproductive Medicine, Hannover, 2011 Reprod. Domest. Anim. 46(Suppl.1), 43
Mit der Fertigstellung der Dissertationsschrift ist es spätestens jetzt an der Zeit, nochmals all denen zu danken, die mich begleitet und unterstützt haben.
Danke…
… an erster Stelle an Herrn Prof. Dr. Burkhard Meinecke für das Ermöglichen meiner Doktorarbeit, für das Thema und für die fachliche Betreuung. Seine Freundlichkeit, sein Humor und sein Wissen waren stets Motivation für mich!
… an Prof. Dr. Bernd Schröder für seine Bereitschaft, als Zweitgutachter zu fungieren!
… an Dr. Silja Ebeling für die gesamte Zeit der Betreuung, wertvolle Ratschläge und stets geschätzte Anregungen. Für ihren weiteren beruflichen Weg wünsche ich ihr viel Erfolg!
… vor allem Edita Podhajsky für ihre ständige Bereitschaft, alle großen und kleinen Probleme aus der Welt zu schaffen! Neben ihrer riesigen Hilfsbereitschaft war sie nicht nur dienstlich eine Bereicherung während der ganzen Zeit!
… Monika Labsch für die tolle Zusammenarbeit im Team und die vielen Momente, in denen nur Humor geholfen hat!
… den Schlachthöfen Gleidingen und Hannover für die unzähligen Stunden zum Sammeln der Ovarien!
… der AG Prof. Dr. Paul Becher mit Steffi Gilgenbach und Sophia Austermann-Busch für das Einweihen in die Geheimnisse der PCR!
… Prof. Dr. Christine Wrenzycki und Sandra Wilkening für die „Bioanalyzer-Unterstützung“ und für die wertvollen Ratschläge rund um die RNA!
… den Kolleginnen und Kollegen der Station 25 des Agnes-Karll-Krankenhauses für ihre flexible Dienstplangestaltung während des Studiums und der Promotionszeit!
… Ali, Caro, Claudia, Constanze, Hartmut, Jenny und Vivian für die krisensichere Freundschaft und vor allem Marina, die während der ganzen Zeit meine Höhen und Tiefen in vollem Umfang miterleben musste und mir stets bewusst gemacht hat, wie wichtig ein Leben neben der Doktorarbeit ist!
… an Stephan, dafür dass er meine teilweise gestresste Laune ertragen hat und einfach dafür, das es ihn gibt!
… auf eine besondere Weise an meine Familie und vor allem meiner Mutter Erika Töpfer für das fortwährende Vertrauen, die seelische und moralische Unterstützung nicht nur während der Doktorarbeit!