Auswertungen der Detektionsergebnisse zur Bestimmung der

3.5 Analytische Untersuchungen der biologischen Proben

3.5.1 Konzentrationsbestimmung von Rifampicin und Clarithromycin und derer

3.5.1.7 Auswertungen der Detektionsergebnisse zur Bestimmung der

Alle Chromatogramme wurden nach der internen Standardmethode über die jeweiligen Peakflächen ausgewertet. Die Berechnung der Konzentrationen erfolgte über die Peak Area Ratios (PAR) mit 1/x gewichteter linearer Regression online mit der LC-MS Software „Analyst 1.4“.

Mit Hilfe der LC-MS/MS wurden die Konzentrationen von Clarithromycin, 14-OH-Clarithromycin, Rifampicin und 15-O-Desacetylrifampicin im Plasma, in der PELF und in den bronchoalveolären Zellen bestimmt. Die ermittelten Steady State Konzentrationen der eingesetzten Antibiotika wurden daraufhin in einer Konzentrations-Zeit-Kurve aufgetragen und die verschiedenen Parameter aus deren Verläufen berechnet (siehe Abb. 02). Die statistische Auswertung erfolgte für die folgend genannten Pharmakokinetischen Parameter mit Hilfe des WILCOXON Tests.

0 3 6 9 12

C t

t (h) C_max

C_min

t_max C_av

AUC PTF

Abb. 02: Darstellung pharmakokinetischer Parameter

Cmax: Maximalkonzentration; tmax: Zeitpunkt der Maximalkonzentration; Cmin: Minimalkonzentration; Cav: durchschnittliche Plasmakonzentration; Ct: Konzentration zum Zeitpunkt t; t: Zeit in Stunden; PTF: Peak-through-fluctuation; AUC: Fläche unter der Konzentrations-Zeit-Kurve („area under the curve“)

Die maximale (Cmax) und minimale (Cmin) Arzneistoff-Konzentration und die Zeit bis zum Erreichen der maximalen Arzneistoff-Konzentration (tmax) wurden direkt aus der Konzentrations-Zeit-Kurve abgelesen (siehe Abb. 02). Im Anschluss daran wurden über die neun erhaltenen Einzelwerte für die Cmax, Cmin und tmax die Mittelwerte gebildet und die entsprechenden Standardabweichungen berechnet.

Als Maß für die Gesamtkonzentration des Arzneimittels im Organismus wurde die Gesamtfläche unter der Konzentrations-Zeit-Kurve („area under the curve“, AUC) bestimmt. Die Berechnung erfolgte mit der Trapezregel, bei der aus jeweils zwei

Messzeitpunkten ti und ti+1 mit den dazugehörigen Konzentrationen Ci und Ci+1 die Fläche der einzelnen Trapeze bestimmt wird. In der Folge werden die Flächeninhalte der einzelnen Trapeze addiert und man erhält die Gesamtfläche unter der Kurve. Im Rahmen einer Steady State Kinetik wird die AUC im Dosierungsintervall berechnet, das heißt für diese Studie erfolgte die Berechnung über einen Zeitraum von null bis zwölf

Die durchschnittliche Plasmakonzentration über den Zeitraum von zwölf Stunden wurde mit Cav angegeben. Die Berechnung erfolgt auf Grundlage der AUC dividiert durch das Dosierungsintervall (zwölf Stunden): verabreichte Medikament in der gleichen Dosierung als intravenöse Dauertropfinfusion verabreichen würde. Da die Medikamente in dieser Studie per os verabreicht wurden bestimmt man als weiteren Parameter die Peak-through-fluctuation (PTF), um zu beschreiben, wie weit sich die Kinetik vom Ideal der Dauertropfinfusion entfernt. Aus der Cmax, der Cmin und der Cav kann die Peak-through-Fluctuation (PTF) berechnet werden:

PTF (%) = ((Cmax - Cmin)/ Cav)

Als weiterer pharmakologischer Parameter wurde die Eliminationshalbwertszeit (t1/2) bestimmt. Sie beschreibt die Zeit in der die Konzentration eines Stoffes auf die Hälfte Berechnung von λz wurde eine logarithmische Darstellung der Konzentrations-Zeit-Kurve gewählt. Dabei wurde durch die aufgetragenen Konzentrationen, aber mindestens durch die drei letzten Messzeitpunkte eine Gerade gelegt und an dieser die Steigung bestimmt. Dieser Methode liegt die Hypothese zugrunde, dass in dieser Phase der Kinetik angenommen werden kann, dass die Eliminationsprozesse zu diesem Zeitpunkt überwiegen und nur wenig durch Resorptions- und Distributionsprozesse beeinflusst werden.

4 Ergebnisse

4.1 Etablierung der Essays zur Quantifizierung von Clarithromycin und Rifampicin Die chromatographische Quantifizierung von Clarithromycin, seinem Metaboliten und Rifampicin erfolgte im Institut für klinische Pharmakologie der Ernst-Moritz-Arndt Universität in Greifswald mit einer flüssigchromatographischen Methode mit doppelt nachgeschalteter Massenspektroskopie (LC-MS/MS). Die Messungen erfolgten nach einer für Plasma, BALF und Zellen validierten Bestimmungsmethode entsprechend den international geltenden Richtlinien.

Als Quantifizierungsgrenze wurde der niedrigste Kalibrierwert von 2,5 ng/ml definiert, Präzision und Richtigkeit waren für diesen Kalibrationswert mit < 15% erfüllt.

Tab. 03: Konzentrationsbereiche und Korrelationkoeffizienten der biologischen Matrices für Clarithromycin und Rifampicin

Matrix Analyt Korrelationskoeffizient bei 2,5 bis 25 ng/ml

Korrelationskoeffizient bei 25 bis 250 ng/ml Clarithromycin 0.9937 - 0,9983 0,9943 - 0,9989 Plasma

Rifampicin 0,9937 - 0,9988 0,9950 - 0,9999 Clarithromycin 0,9934 - 0,9999 0,9956 - 0,9985 BALF

Rifampicin 0,9914 - 0,9988 0,9954 - 0,9988 Clarithromycin 0,9939 - 0,9997 0,9951 - 0,9984 BAL - Zellen

Rifampicin 0,9956 - 0,9989 0,9933 - 0,9994 BALF: bronchoalveoläre Spülflüssigkeit, BAL: bronchoalveoläre Lavage

Die Qualitätsparameter „Richtigkeit“ und „Präzision“ zu den in dieser Studie gemessenen Konzentrationen von Clarithromycin und Rifampicin sind in Tab. 04 dargestellt. Präzision und Richtigkeit waren für die Kalibratoren und Qualitätskontrollen mit < 15 % erfüllt.

Tab. 04: Richtigkeit und Präzision (Between-day und Within-day) für die Bestimmung der Konzentration von Clarithromycin und Rifampicin (n = 6).

Clarithromycin Rifampicin

Between-days Präzision (%) Richtigkeit (%) Präzision (%) Richtigkeit (%) K 2,8 - 5,8 - 9,7 - 9,3 4,2 - 7,9 - 3,7 - 3,0 BAL: Bronchoalveoläre Lavage; BALF: Bronchoalveoläre Flüssigkeit, K: Kalibratoren, QK: Qualitätskontrollen

4.2 Konzentrationen der Antibiotika im Plasma bei den Fohlen (1. und 2. Kinetik) 4.2.1 Konzentrationen von Clarithromycin im Plasma nach der Monotherapie (1.

Kinetik)

Am siebten Tag nach Beginn der Verabreichung von Clarithromycin (7,5 mg/kg p.o., q 12 h) betrugen die Konzentrationen von Clarithromycin im Plasma der neun Fohlen zum Zeitpunkt der ersten Blutentnahme zwölf Stunden nach der letzten oralen Applikation im Mittelwert 322,13 ng/ml mit einer Standardabweichung von 293,32 ng/ml. Die maximalen Plasmakonzentrationen (Cmax) wurden nach 3,73 ± 1,79 Stunden erreicht und betrugen 614 ± 365 ng/ml. Die durchschnittliche Plasmakonzentration (Cav) betrug 462 ± 368 ng/ml. Zum Zeitpunkt der BAL, zwölf Stunden nach der Behandlung am Morgen, betrug die Konzentration von Clarithromycin im Plasma 301,17 ± 269,80 ng/ml.

48 Stunden nach der letzten peroralen Gabe von Clarithromycin konnten im Plasma Konzentrationen von 9,03 ± 14 ng/ml ermittelt werden. Bei zwei Fohlen konnte Clarithromycin zu diesem Zeitpunkt nicht mehr nachgewiesen werden. Die minimale Plasmakonzentration (Cmin) wurde mit 262 ± 254 ng/ml berechnet. Die AUC0-12h als Maß für die Substanzmenge des Arzneistoffes im Körper innerhalb der ersten zwölf Stunden lag für Clarithromycin bei 5545 ± 4420 ng x h/ml.

Die ermittelte Halbwertszeit (t1/2) für Clarithromycin betrug 6,11 ± 0,83 Stunden.

4.2.2 Konzentrationen von Clarithromycin im Plasma bei gleichzeitiger Gabe von Rifampicin (2. Kinetik)

An Tag 21, unmittelbar im Anschluss an die kombinierte Gabe von Clarithromycin und Rifampicin, betrugen die Plasmakonzentrationen für Clarithromycin zum Zeitpunkt der ersten Blutentnahme im Mittel 8,51 ± 10,79 ng/ml. Bei zwei der neun Fohlen lag die Clarithromycinkonzentration im Plasma zu diesem Zeitpunkt unterhalb der Nachweisgrenze.

Die Cmax von Clarithromycin nach der kombinierten Behandlung der Fohlen war mit 65,0

± 51,5 ng/ml signifikant (p = 0.008) niedriger als nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin. Die Cmax wurde nach 2,84 ± 1,79 Stunden schneller erreicht als nach der Monotherapie. Signifikante Abweichungen fanden sich bei der Cav mit 29,8 ± 26,3 ng/ml

(p = 0.008), bei der Cmin mit 9,26 ± 9,63 ng/ml (p = 0.008) und bei der AUC0-12h (p = 0.008), hier wurden Werte von 357 ± 315 ng x h/ml gemessen. Zum Zeitpunkt der BAL, d. h. 12 Stunden nach der letzten Gabe von Clarithromycin, betrug die Konzentration des Clarithromycin im Plasma 13,87 ± 15,82 ng/ml. Nach 24 Stunden konnte Clarithromycin im Plasma von sechs Fohlen nachgewiesen werden, nach 36 Stunden wurde es nur bei einem Fohlen, nach 48 Stunden konnte es bei keinem Fohlen mehr nachgewiesen werden. Bei einem Fohlen konnte Clarithromycin im Plasma nur bis zur sechsten Stunde nach der Applikation nachgewiesen werden.

Die ermittelte Halbwertszeit für Clarithromycin im Plasma nach der kombinierten Gabe der beiden Antibiotika lag bei 6,88 ± 3,44 Stunden und entsprach somit annähernd jener nach der Monotherapie (siehe Tab. 05).

0 6 12 18 24 30 36 42 48 0

200 400 600 800

1000 ohne Rifampicin

mit Rifampicin

Clarithromycin (ng/ml)

Zeit (h)

Abb. 03: Clarithromycinkonzentrationen im Plasma bei neun Fohlen nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

Tab. 05: Pharmakokinetische Daten für die Konzentration von Clarithromycin im Plasma beim Fohlen (n=9), nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h); Angaben in Mittelwert ± Standardabweichung.

Clarithromycinkonzentration im Plasma

Ohne Rifampicin mit Rifampicin p-Wert

AUC0-12h (ng×h/ml) 5545 ± 4420 357 ± 315* 0,008

Cmax (ng/ml) 614 ± 365 65,0 ± 51,5* 0,008

tmax (h) 3,73 ± 1,79 2,84 ± 1,79 0,086

Cmin (ng/ml) 262 ± 254 9,26 ± 9,63* 0,008

Cav (ng/ml) 462 ± 368 29,8 ± 26,3* 0,008

PTF (%) 94,6 ± 35,8 191 ± 66* 0,008

t½ (h) 6,11 ± 0,83 6,88 ± 3,44 0,515

C12h – Plasma 301 ± 270 13,9 ± 15,8* 0,012

* signifikant unterschiedliche Werte 1. und 2. Kinetik

AUC0-12: Area under the curve vom Zeitpunkt 0 bis 12 Stunden; Cmax: maximale Plasmakonzentration; tmax: Zeit bis zum Erreichen der maximalen Konzentrationen (Cmax) im Plasma; Cmin: minimale Plasmakonzentration; Cav: durchschnittliche Plasmakonzentration; PTF: Peak-trough-fluctuation; t1/2: Halbwertszeit; C12h-Plasma: durchschnittliche Plasmakonzentration 12 Stunden nach der letzten Applikation von Clarithromycin.

4.2.3 Konzentrationen von 14-OH-Clarithromycin im Plasma (1. Kinetik)

Die Konzentrationen des Metaboliten 14-Hydroxy-Clarithromycin betrugen am siebten Tag zum Zeitpunkt der ersten Blutentnahme im Mittelwert 118,33 ng/ml mit einer Standardabweichung von 80,78 ng/ml. Die maximale Plasmakonzentration betrug 161 ± 69,9 ng/ml und wurde für 14-OH-Clarithromycin nach 3,56 ± 2,59 Stunden erreicht (tmax).

Die durchschnittliche Konzentration lag bei 132 ± 86,0 ng/ml. Zum Zeitpunkt der BAL, d.

h. 12 Stunden nach der letzten Gabe von Clarithromycin, lagen die Plasmakonzentrationen der neun Fohlen bei 52,98 ± 29,07 ng/ml. 48 Stunden nach der letzten Applikation von Clarithromycin konnte der Metabolit noch bei sechs Fohlen nachgewiesen werden. Die minimale Plasmakonzentration (Cmin) von 14-OH-Clarithromycin lag bei 84,7 ± 68,1 ng/ml. Für die AUC0-12h wurden Werte von 1581 ± 1032 ng x h/ml ermittelt. Die Halbwertszeit (t½) für den Metaboliten von Clarithromycin betrug 8,11 ± 1,61 Stunden. In der Abb. 04 sind die Konzentrationen von Clarithromycin und seinem Metaboliten zum Vergleich dargestellt.

0 6 12 18 24 30 36 42 48

0 200 400 600 800 1000

7.5 mg/kg Clarithromycin p.o.

Clarithromycin

14-OH-Clarithromycin

Konzentration (ng/ml)

Zeit (h)

Abb. 04: Konzentrationen von Clarithromycin und 14-OH-Clarithromycin im Plasma von neun Fohlen nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h).

4.2.4 Konzentrationen von 14-OH-Clarithromycin im Plasma bei gleichzeitiger Gabe von Rifampicin (2. Kinetik)

Zum Zeitpunkt der ersten Blutentnahme an Tag 21, unmittelbar nach der kombinierten Behandlung der Fohlen mit Clarithromycin und Rifampicin, betrugen die Konzentrationen bei den neun Fohlen für 14-OH-Clarithromycin 23,91 ± 21,77 ng/ml.

Maximale Plasmakonzentrationen wurden nach 2,89 ± 1,76 Stunden in der Höhe von 109 ± 54,3 ng/ml gemessen. Die Cmax war somit signifikant (p = 0.038) geringer als die des Metaboliten nach der alleinigen Gabe von Clarithromycin. Die durchschnittliche Konzentration von 14-OH-Clarithromycin betrug 60,4 ± 36,8 ng/ml und war ebenfalls signifikant (p = 0.008) geringer. Bei zwei Fohlen lagen die letzten messbaren Konzentrationen von 14-OH-Clarithromycin bei der Blutentnahme nach 16 Stunden, bei sechs Fohlen wurden die letzten Konzentrationen nach 24 Stunden bestimmt. Bei einem Fohlen konnte der Clarithromycin Metabolit nach 48 Stunden im Plasma noch nachgewiesen werden. Im Mittelwert lag die minimale Plasmakonzentration bei 21,0 ± 21,3 ng/ml und war signifikant geringer als die Cmin nach alleiniger Behandlung mit Clarithromycin (siehe Tab. 06). Die AUC0-12h betrug, ebenfalls signifikant geringer, 725 ± 442 ng x h/ml. Die Halbwertszeit für den 14-OH-Metaboliten bei der kombinierten Verabreichung mit Rifampicin war signifikant erniedrigt und betrug 5,10 ± 0,88 Stunden.

Zum Zeitpunkt der BAL, d. h. 12 Stunden nach der letzten Gabe von Clarithromycin, betrug die Konzentration von 14-OH-Clarithromycin29,56 ± 26,68 ng/ml.

0 6 12 18 24 30 36 42 48 0

50 100 150 200 250

ohne Rifampicin mit Rifampicin

14-OH-Clarithromycin (ng/ml)

Zeit (h)

Abb. 05: Plasmakonzentrationen von 14-OH-Clarithromycin bei neun Fohlen nach der Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

Tab. 06: Verhältnis der Konzentrationen von Clarithromycin zu 14-OH-Clarithromycin im Plasma nach der Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h)

Clarithromycin/14-OH-Clarithromycin

ohne Rifampicin mit Rifampicin p-Wert

AUC0-12h (ng×h/ml) 3,23 ± 0,85 0,44 ± 0,15* 0,008

Cmax (ng/ml) 3,62 ± 1,10 0,53 ± 0,21* 0,008

Cmin (ng/ml) 2,77 ± 1,21 0,46 ± 0,20* 0,008

* signifikant unterschiedliche Werte 1. und 2. Kinetik

AUC0-12: Area under the curve vom Zeitpunkt 0 bis 12 Stunden; Cmax: maximale Plasmakonzentration; Cmin: minimale Plasmakonzentration

Tab. 07: Pharmakokinetische Daten von 14-OH-Clarithromycin im Plasma beim Fohlen (n=9), nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h); Angaben in Mittelwert ± Standardabweichung.

14-OH-Clarithromycin im Plasma

ohne Rifampicin mit Rifampicin p-Wert

AUC0-12h (ng×h/ml) 1581 ± 1032 725 ± 442* 0,008

Cmax (ng/ml) 161 ± 69.9 109 ± 54.3* 0,038

tmax (h) 3,56 ± 2,59 2,89 ± 1,76 0,314

Cmin (ng/ml) 84,7 ± 68,1 21,0 ± 21,3* 0,008

Cav (ng/ml) 132 ± 86,0 60,4 ± 36,8* 0,008

PTF (%) 70,4 ± 35,0 155 ± 37,5* 0,008

t½ (h) 8,11 ± 1,61 5,10 ± 0,88* 0,008

C12h – Plasma 92,0 ± 64,3 29,6 ± 26,7* 0,008

* signifikant unterschiedliche Werte 1. und 2. Kinetik

0 6 12 18 24 30 36 42 48 0

30 60 90 120 150

7.5 mg/kg Clarithromycin +10 mg/kg Rifampicin p.o.

Clarithromycin

14-OH-Clarithromycin

Konzentration (ng/ml)

Zeit (h)

Abb. 06: Konzentrationen von Clarithromycin und 14-OH-Clarithromycin im Plasma von neun Fohlen nach der Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

4.2.5 Konzentrationen von Rifampicin im Plasma nach der kombinierten Gabe mit Clarithromycin

Die Konzentration von Rifampicin im Plasma lag 36 Stunden nach der letzten Applikation, an Tag 21 bei 1242,91 ± 709,38 ng/ml. Die maximale Plasmakonzentration betrug 1273 ± 669 ng/ml und wurde nach 0,92 ± 2,66 Stunden erreicht. Die durchschnittliche Plasmakonzentration lag bei den neun Fohlen bei 677 ± 291 ng/ml.

Zum Zeitpunkt der BAL, d. h. 48 Stunden nach der letzten Gabe von Rifampicin und 12 Stunden nach der letzten Applikation von Clarithromycin, wurden im Plasma Konzentrationen von 363,17 ± 184,22 ng/ml gemessen. 48 Stunden nach der BAL war

Rifampicin mit Konzentrationen von 17,61 ± 8,82 ng/ml noch bei allen Fohlen im Plasma nachweisbar. Die AUC0-12h wurde mit8128 ± 3487 ng x h/ml berechnet. Die ermittelte Halbwertszeit für Rifampicin im Plasma beim Fohlen betrug 8,81 ± 1,71 Stunden.

4.2.6 Konzentrationen von 25-O-Desacetylrifampicin im Plasma nach der kombinierten Gabe mit Clarithromycin

Am Tag 21 wurde ebenfalls der Metabolit von Rifampicin, das 25-O-Desacetylrifampicin bestimmt. Der Metabolit wurde bei fünf der neun Fohlen im Plasma nachgewiesen. Bei diesen Fohlen lagen die Konzentrationen vor der letzten Applikation von Clarithromycin an Tag 21 bei 3,41 ± 3,92 ng/ml. Nach 0,53 ± 0,59 Stunden wurde eine maximale Plasmakonzentration von 7,65 ± 5,13 ng/ml erreicht. Die durchschnittliche Plasmakonzentration von 25-O-Desacetylrifampicin betrug 3,79 ± 2,80 ng/ml. Zum Zeitpunkt der BAL, d. h. 48 Stunden nach der letzten Gabe von Rifampicin und 12 Stunden nach der letzten Gabe von Clarithromycin, wurden im Mittelwert 25-O-Desacetylrifampicinkonzentrationen von 1,77 ± 2,27 ng/ml erreicht. Zu diesem Zeitpunkt konnte der Metabolit nur bei zwei Fohlen im Plasma nachgewiesen werden. Bei einem Fohlen konnte 25-O-Desacetylrifampicin nach sechs Stunden nachgewiesen werden, bei vier Fohlen enden die messbaren Konzentrationen nach acht Stunden und bei nur einem Fohlen konnte nach 16 Stunden eine Konzentration von 5,093 ng/ml gemessen werden. Die minimale Plasmakonzentration für den Metaboliten betrug 3,63 ± 1,59 ng/ml und die AUC0-12h 45,5 ± 33,6 ng x h/ml. Die Halbwertszeit für den Rifampicinmetaboliten betrug beim Fohlen 14,4 ± 6,12 Stunden.

Tab. 08: Pharmakokinetische Daten von Rifampicin und seinem Metaboliten, 25-O-Desacetylrifampicin im Plasma beim Fohlen (n=9), nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h);

Angaben in Mittelwert ± Standardabweichung

Rifampicin 25-O-Desacetylrifampicin

AUC0-12h (ng×h/ml) 8128 ± 3487 45,5 ± 33,6

Cmax (ng/ml) 1273 ± 669 7,65 ± 5,13

tmax (h) 0,2 ± 2.66 0,53 ± 0,59

Cmin (ng/ml) 363 ± 184 3,63 ± 1,59

Cav (ng/ml) 677 ± 291 3,79 ± 2,80

t½ (h) 8,81 ± 1,71 14,4 ± 6,12

4.3 Menge der rückgewonnenen bronchoalveolären Flüssigkeit, PELF und Konzentrationen der Antibiotika in der PELF

In der vorliegenden Studie wurde die bronchoalveoläre Lavage mit 4 x 100 ml PBS-Lösung durchgeführt. Die erste Fraktion der zurückgewonnenen Spülflüssigkeit wurde nach der Bestimmung des Gesamtvolumens der BALF verworfen. Bei der ersten BAL wurden durchschnittlich insgesamt 234,6 ± 45,5 ml zurückgewonnen, das entspricht einem Anteil von 58, 7 % der instillierten PBS-Lösung. Bei der zweiten BAL betrug das durchschnittlich zurückgewonnene Volumen 250 ± 35,5 ml. Der Anteil der rückgewonnenen Spülflüssigkeit betrug hier 62,5 %. Die einzelnen Volumina der zurückgewonnenen Spülflüssigkeiten sind der Tabelle 25 im Anhang zu entnehmen. Die Ermittlung der Pulmonary epthelial lining fluid (PELF) erfolgte nach der Berechnung von

RENNARD et al. (1986) auf Grundlage der Harnstoffbestimmung in Plasma und Spülflüssigkeit. Das Volumen der PELF in der ersten BAL betrug im Durchschnitt 16,3 ± 5,6 ml, bei der zweiten BAL 14,6 ± 7,2 ml.

Die Konzentrationen der eingesetzten Antibiotika und ihrer Metaboliten wurden in der BALF bestimmt und daraus wurde in der Folge die Konzentration in der PELF berechnet.

Tab. 09: Menge der zurückgewonnenen Spülflüssigkeit bei neun Fohlen bei jeweils zwei bronchoalveolären Lavagen nach der Instillation von jeweils 4 x 100 ml PBS-Lösung

Menge der rückgewonnenen Spülflüssigkeit

BAL 1 BAL 2

Minimale Menge (ml) 150 169

25 % Quantil (ml) 170 202

Median (ml) 203 213

75 % Quantil (ml) 233 235

Maximale Menge (ml) 250 241

Mittelwert (ml) 201,89 212,67

Standardabweichung (ml) 36,85 26,51

BAL: bronchoalveoläre Lavage

4.3.1 Konzentrationen von Clarithromycin in der BALF und in der PELF nach der Monotherapie und nach der Kombination Clarithromycin/Rifampicin

Zum Zeitpunkt der ersten BAL, an Tag 7 nach Beginn der Gabe von Clarithromycin in einer Dosierung von 7,5 mg/kg, p.o., q 12 h und zwölf Stunden nach der letzten

Applikation von Clarithromycin betrug die Konzentration dieses Antibiotikums in der BALF im Mittel 740,79 ± 554,16 ng/ml. Für die PELF wurde eine Clarithromycinkonzentration von 9497,92 ± 6124,80 ng/ml errechnet. Nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin mit Rifampicin betrug die Konzentration des Clarithromycins in der BALF an Tag 21 nach Beginn der Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h) und zwölf Stunden nach der letzten Applikation von Clarithromycin 40,21 ± 36,51 ng/ml. Die Konzentration von Clarithromycin in der PELF betrug zu diesem Zeitpunkt 695,66 ± 658,4 ng/ml und war somit signifikant (p = 0,008) niedriger als bei der Monotherapie. Die Konzentrationen sind in Abb. 07 dargestellt.

Die einzelnen Werte für die verschiedenen Clarithromycinkonzentrationen der neun Fohlen sind den Tabellen 28 und 29 im Anhang zu entnehmen.

0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 18000 20000

8, 4 5 9, 6, 3 1 2 7

Monotherapie mit Kombinationstherapie Clarithromycin Clarithromycin/Rifampicin

Clarithromycin (ng/ml)

Abb. 07: Konzentrationen von Clarithromycin in der PELF von neun Fohlen nach der alleinigen Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

Tab. 10: Clarithromycinkonzentration in der PELF von neun Fohlen nach der alleinigen Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

Clarithromycinkonzentration in der PELF

ohne Rifampicin mit Rifampicin

Minimale Menge (ng/ml) 2245,29 123,34

25 % Quantil (ng/ml) 4886,41 396,11

Median (ng/ml) 8378,12 451,83

75 % Quantil (ng/ml) 15350,94 638,07

Maximale Konzentration

(ng/ml) 18387,12 2345,02

Mittelwert (ng/ml) 9497,92 695,66*

Standardabweichung (ng/ml) 6124,8 658,4

PELF: Pulmonary epthelial lining fluid

4.3.2 Konzentrationen von 14-OH-Clarithromycin in der BALF und in der PELF nach der Monotherapie und nach der Kombination Clarithromycin/Rifampicin Die Konzentration des Metaboliten von Clarithromycin in der BALF betrug am 7. Tag nach Beginn der Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) 31,68 ± 16,60 ng/ml.

Am 21. Tag nach der Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) kombiniert mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h) lag die Konzentration von 14-OH-Clarithromycin bei 7,35 ± 5,98 ng/ml. Die Konzentrationen für 14-OH-Clarithromycin in der PELF betrugen an Tag 7 409,55 ± 202,94 ng/ml und an Tag 21 119,88 ± 75,83 ng/ml (p = 0,008).

0 100 200 300 400 500 600 700 800

8 4 5 6 9 3 7 1 2

Monotherapie mit Kombinationstherapie Clarithromycin Clarithromycin/Rifampicin

14-OH-Clarithromycin (ng/ml)

Abb.08: Konzentrationen von 14-OH-Clarithromycin in der PELF von neun Fohlen nach der alleinigen Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

Tab. 11: Clarithromycinkonzentration in der PELF von neun Fohlen nach der alleinigen Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h).

Konzentration von 14-OH-Clarithromycin in der PELF

ohne Rifampicin mit Rifampicin

Minimale Menge (ng/ml) 152,09 33,84

25 % Quantil (ng/ml) 247,45 76,53

Median (ng/ml) 409,55 101,12

75 % Quantil (ng/ml) 583,06 142,31

Maximale Konzentration

(ng/ml) 713,3 292,69

Mittelwert (ng/ml) 410,25 119,88*

Standardabweichung (ng/ml) 202,93 75,83

* signifikant unterschiedlicher Wert 1. und 2. Kinetik PELF: Pulmonary epithelial lining fluid

4.3.3 Konzentrationen von Rifampicin und 25-O-Desacetylrifampicin in der BALF und in der PELF

In der BALF konnten 48 Stunden nach der letzten Applikation von Rifampicin in einer Dosierung von 10 mg/kg, p.o., q 12 h über einen Zeitraum von elf Tagen keine Konzentrationen für Rifampicin und seinen Metaboliten bestimmt werden, sie lagen somit unterhalb der Nachweisgrenze. Selbiges gilt für die PELF.

4.4 Konzentrationen der Antibiotika in den bronchoalveolären Zellen 4.4.1 Gesamtzellzahl und Zellfraktionen in der BALF

Die Gesamtzellzahl in der BALF der neun Fohlen lag zum Zeitpunkt der ersten BAL im Mittel bei 0,51 G/L ± 0,20 G/L, die geringste Zellzahl lag bei 0,12 G/L, die maximalen bei 0,79 G/L. Bei der zweiten BAL betrug die Gesamtzellzahl eine Menge von 0,52 ± 0,32 G/L. Die Gesamtzellgehalte in der BALF der einzelnen Fohlen sind der Tab. 32 im Anhang zu entnehmen.

Im Rahmen der Aufbereitung der BALF wurden die Zellen ausgezählt und ein Ausstrich zur Differenzierung der Zellen angefertigt Die Anteile der verschiedenen Zellfraktionen sind der Tab. 12 zu entnehmen.

Tab. 12: Anteile der unterschiedlichen Zellfraktionen in der BALF bei neun Fohlen.

Zellen Anteil in % BAL 1 BAL 2 Normwerte

Mastzellen 5,3 ± 2,1 3,1 ± 2,3 0 bis 5

Neutrophile Granulozyten 0 ± 0 0,5 ± 0,7 1,2 bis 18,3

Lymphozyten 14,8 ± 2,9 14,3 ± 6,3 5 bis 20

Makrophagen 79,9 ± 2,4 81,9 ± 8,4 71 bis 86

BAL: bronchoalveoläre Lavage

4.4.2 Konzentrationen von Clarithromycin in den bronchoalveolären Zellen nach alleiniger Gabe von Clarithromycin und nach kombinierter Gabe mit Rifampicin (Tag 7 und Tag 21)

Die Konzentration von Clarithromycin in den bronchoalveolären Zellen (BAC) betrug nach der ersten Kinetik im Mittelwert 316566,69 ng/GZ (GZ = Gigazelle) bei einer Standardabweichung von 450425,9 ng/GZ. Um die erhaltenen Konzentrationen in den Zellen besser mit jenen des Plasmas und der PELF vergleichen zu können, wurde die Konzentration zusätzlich für das Zellvolumen in Milliliter angegeben. Für

bronchoalveoläre Zellen des Fohlens wird von JACKS et al. (2001) ein Zellvolumen von 1,2 µl/GZ angegeben. Auch WOMBLE et al. (2006) legen in Ihren Berechnungen dieses Volumen zu Grunde. Die daraus resultierende Konzentration von Clarithromycin für die neun Fohlen dieser Studie betrug 263805,57 ± 375354,91 ng/ml Zellvolumen. Die Konzentrationen von Clarithromycin nach der zweiten Kinetik lagen mit 12200,57 ± 12207,75 ng/GZ und 10167,14 ± 10173,13 ng/ml Zellvolumen (1,2 ml/GZ) signifikant unter denen der ersten Kinetik (p = 0,008).

0 200000 400000 600000 800000 1000000 1200000 1400000

5 4 9, 68, 3,

2 1 7

Monotherapie mit Kombinationstherapie Clarithromycin Clarithromycin/Rifampicin

Clarithromycin (ng/ml)

Abb. 09: Konzentrationen von Clarithromycin in den bronchoalveolären Zellen bei neun Fohlen nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit Rifampicin (10 mg/kg, p.o., q 12 h)

Tab. 13: Konzentrationen von Clarithromycin in den bronchoalveolären Zellen bei neun Fohlen nach der alleinigen Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) und nach der kombinierten Applikation von Clarithromycin (7,5 mg/kg, p.o., q 12 h) mit

Im Dokument Pharmakokinetik von Clarithromycin nach der Monotherapie mit Clarithromycin und nach der kombinierten Gabe von Clarithromycin mit Rifampicin beim Fohlen (Seite 64-102)