3 Material und Methoden
5.3 Vergleich der ex vivo- und in vitro -Messungen
Bei Verbrennungspatienten wurde in vorangegangenen Studien in diesem Labor die MHC-ll-Expression ex vivo gemessen, um deren prognostischen Wert hinsichtlich der Sepsis nach einem Verbrennungstrauma zu untersuchen (Pietzsch 2004). In der vorliegenden Arbeit wurde das Serum von 20 dieser Patienten im Einzelversuch mit Monozyten von gesunden Spendern kultiviert und anschießend die MHC-ll-Expression mit den ex vivo-Werten verglichen. Hierbei zeigt sich eine mäßige, aber hochsignifikante Korrelation (r = 0,571).
Die HLA-DR-Expression ex vivo beträgt 44,9 % ± 20,2 %, die in vitro-Werte liegen bei 68,7 % ± 13,7 %. Somit liegen beide Werte deutlich unter der HLA-DR-Expression von gesunden Kontrollpersonen; Sachse et al haben bei letzteren eine mittlere HLA-DR-Expression von 93% gemessen (Sachse et al 1998). Somit kann von einem Effekt des Patientenserums ausgegangen werden.
Dies stimmt mit den Vorversuchen überein, da im Vergleich der beiden Poolseren nach 48 h ein deutlicher Effekt durch das Serum von Verbrennungspatienten auftrat (siehe Kap. 3.6.1). Entsprechende Studien berichten auch von einem Effekt der untersuchten Interleukine nach 24 bis 72 h Kulturdauer (Landmann et al 1988, Thommsen et al 1995).
Betrachtet man die Einzelverläufe der Patienten (siehe Abb.16 und 17) zeigt sich bei 10 Patienten ein paralleler Verlauf (Pat. 3,4,5,6,7,10,11,12,13,17) der in vitro- und ex vivo-Werte der Patienten, bei 2 Patienten ein gegenläufiger Verlauf (Pat. 9 und 15) und bei 8 Patienten kein Zusammenhang (Pat. 1,2,8,14,16,18,19,20). Die absoluten Werte sind jedoch sehr
5 Diskussion 76 unterschiedlich (siehe Tabelle 11 und 12 im Anhang). Eine mögliche Erklärung wäre die Änderung der HLA-DR-Expression durch die Kulturdauer. Wie unter Punkt 3.6.2 beschrieben, kommt es nach 48 h Kulturdauer zu einer verminderten HLA-DR-Expression von 58,0 % ± 9,1% im Vergleich zu mit 83,4 % ± 9,7 % in der Frischblutfärbung. Somit ist die HLA-DR-Expression ex vivo mit dieser Methode nicht exakt zu reproduzieren.
5.4 Ausblick
Die vorliegende Arbeit zeigt, dass im Serum von Verbrennungspatienten Faktoren enthalten sind, die bei Monozyten gesunder Spender eine signifikante Verminderung der HLA-DR-Expression hervorrufen.
Die in der Literatur beschriebenen Effekte von Interleukin-10, Interleukin-4 und Interferon-gamma können bestätigt werden.
Eine Neutralisierung von Interleukin-10 durch monoklonale Antikörper führt zu einer Normalisierung der HLA-DR-Expression. Weitere Arbeiten in diesem Bereich wären wünschensert.
Die Neutralisierung von Interferon-gamma und Interleukin-4 hat keinen signifikanten Einfluss auf die HLA-DR-Expression. Es gibt jedoch weitere vielversprechende Arbeiten, welche die Neutralisierung von Interleukin-4 zur Verbesserung der Resistenz gegen HSV-1-Infektionen nach Verbrennungen bzw. die Neutralisierung von Interferon-gamma zur Verminderung des Hypermetabolismus und Katabolismus nach Verbrennung untersuchen.
6 Zusammenfassung 77
6 Zusammenfassung
Patienten sind nach einer schweren Verbrennungsverletzung vor allem in der zweiten Woche nach dem Trauma anfällig für Infektionen. Eine folgende Sepsis ist durch eine hohe Letalität gekennzeichnet. Trotz neuer Therapiemethoden konnte die Sterblichkeit bislang nicht nennenswert gesenkt werden.
Zahlreiche Studien geben Hinweise darauf, dass die veränderten Zytokinmuster nach einem Verbrennungstrauma eine wichtige pathogenetische Rolle bei der Suppression einer suffizienten Immunfunktion spielen. Anhand dieser Arbeit soll nun die Auswirkung ausgewählter Zytokine auf die HLA-DR-Expression von Monozyten untersucht werden mit der Zielsetzung, durch Neutralisierung dieser Zytokine eine Normalisierung der HLA-DR-Expression zu erreichen. Dies geschieht anhand eines für diese Studie erarbeiteten Zellkultursystems. Als Serumanteil wird ein Poolserum aus Serumrestmengen von Patienten mit schweren Verbrennungen erstellt, welche im Rahmen einer vorangehenden Studie gesammelt wurden.
In der vorliegenden Arbeit kann zunächst die negative Wirkung des Poolserums von Patienten mit schweren Verbrennungen auf die MHC-ll-Expression von gesunden Spendermonozyten nachgewiesen werden. Desweiteren bestätigt sich sowohl die negative Wirkung von Interleukin-10 als auch die positive Wirkung von Interleukin-4 und Interferon-gamma auf die MHC-ll-Expression.
Durch weitere Versuche mit neutralisierenden Antikörpern erhärtet sich die in Vermutung, dass durch Anti-Interleukin-10 eine Wiederherstellung der MHC-ll-Expression möglich ist.
Dies lässt die Vermutung zu, dass weitere Arbeiten in diesem Bereich Erfolg versprechend und zur Verbesserung der Prognose von Verbrennungspatienten wünschenswert sind.
7 Literaturverzeichnis 78
7 Literaturverzeichnis
Abraham E, Matthay MA et al. Consensus conference definitions for sepsis, septic shock, akute lung injury and acute respiratory distrss sindrome: Time for a reevaluation. Crit Dare Med 2000; 28(1):232-5.
Alam R. A brief Review of the Immune System. Allergy and Immunology Analysis of the Morphologicall, Cytochemical, Immunophenotypical, and Functional Characteristics of Normal Human Peripheral Blood Lineage -/CD16+/HLA-DR+/CD14-/lo Cells, CD14+ Monocytes and CD16-Dencritic Cells.
Clin Immunol 2001;100(3):325-38.
Ayala A, Ertel W, Chaundry HI. Trauma-induced Suppression of Antigen Presentation and Expression of Major Histolompatibility Class ll Antigen Complex in Leukocytes. Shock 1996;5(2):79-90.
Barlow Y. T lymphocytes and immunosuppression in the burned patient: a review. Burns 1994;20(6):487-90.
Baue AE. Multiple progressive or sequential systems failure. Arch Surg 1975;110:779-81.
Bone RC. The Pathogenesis of Sepsis. Ann Int Med 1991;115:457-69.
Bone RC. Sir Isaac Newton, sepsis, SIRS and CARS. Crit Care med 1996;24:1125-8.
Bone RC, Balk RA Cerra FB, Dellinger RP, Fein AM, Knaus WA, Schein RM, Sibbald WJ. Definitions for sepsis and organ failure and guidlines for the use of inovative therapies in sepsis. Chest 1992;101:1644-55.
Braat H, Peppelenbosch MP, Hommes DW. Interleukin-10-based therapy for inflammatory bowel disease. Expert Opin Biol Ther 2003;3(5):725-31.
7 Literaturverzeichnis 79
Bühl A, Zöfel P, Hrsg. SPSS 11, Einführung in die moderne Datenanalyse unter Windows.8.Auflage. München: Pearson Studium; 2002.
Cheadle WG. The Human Leukocyte Antigens and Their Relationship to Infection. Am J Surg 1993;165(2):75-81.
Chlanchy FLI, Holloway AC, Lari R, Cameron PU, Hamilton JA. Detection and properties of the human proliferative monocyte subpopulation. J Leuc Biol 2006;79:757-66.
Christian-Ritter KK, Hill LD, Hoie EB, Zach TL. Effect of Interleukin-4 on the Synthesis of the Third Component of Complement by Pulmonary Epithelial Cells.
Am J Patholog 1994;144(1):171-6.
deVries JE. Immunosuppressive and Anti-inflammatory Properties of Interleukin-10. Annals of Medicine 1995;27:527-41.
de Waal Malefyt R, Abrams J, Bennett B, Figdor CG, de Vries JE. Interleukin-10 Inhibits Cytokine Synthesis by Human Monocytes: An Autoregulatory Role of IL-10 Prodces by Monocytes. J Ex Med 1991;174:1209-20.
Dries DJ, Cheadle WG, Starko KM, Polk HC. Interferon-Gamma Therapy in Severely Injured patients: Results of Two Clinical Trials. In: Faist E, Baue AE, Schildberg FW, Hrsg. The Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis- Mechanism and therpeutic Approaches. Lengerich: Pabst; 1996. S.1017-24.
Erber WN. Human leucocyte differentiation antigens: Review of the CD Nomenclature. Pathology 1990;22:61-9.
Ertel W, Faist E. Immunologisches Monitoring nach schwerem Trauma.
Unfallchirurg 1993;96:200-12.
Finnerty CC, Herndon DN, Przkora R, Pereira CT, Oliveira HM, Queiroz DMM, Rocha AM, Jeschke MG. Cytokine Expression Profile Over Time In Severely Burned Pediatric Patients. Shock 2006;26(1):13-9.
Flad HD, Gemsa D. Zytokine. In: Gemsa D, Vorlander KO, Albert ED, Hrsg.
Immunologie. 4. Auflage. Stuttgart: Thieme-Verlag; 1997. S.45-69.
Flohe SB, Agrawal H, Flohe S, Rani M, Bangen JM, Schade FU. Diversity of Interferon-gamma and Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Faktor in Restoring Immune Dysfunction of Dendritic Cells and Macrophages During Polymicrobial Sepsis. Mol Med 2008;14(5-6):247-56.
7 Literaturverzeichnis 80
Fraunberger P, Walli AK, Seidel D. Stellenwert von Zytokinen in der Sepsisdiagnostik. Infusionsther Transfusionsmed 1996;23 Suppl 4:109-16.
Furukawa K, Kobayashi M, Herndon DN, Pollard RB, Suzuki F. Appearance of Monocyte Chemoattractant Protein 1 Early After Thermal Injury. Annn Surg 2002;
236(1):112-19.
Gardiner KR, Crockard AD. Class ll histocompability complex antigenexpression on peripheral blood monocytes in patients with inflammatory bowel disease. Gut 1994;35:511-16.
Gennari R, Alexander JW, Eaves-Pyles T. IFN-gamma decreases Translocation and Improves Survival Following Transfusion and Thermal Injury. Journal of Surgical Research 1994;56:530-6.
Goodwin CW. Multiple Organ Failure: Clinical Overview of the Syndrome. J Trauma1990; 30 Suppl 12:163-5.
Goris RJA. Shock, Sepsis and Mulitple Organ Failure: The Result of Whole-Body-Inflammation. In: Schlag G, Redl, H, Hrsg. Pathophysiology of Shock, Sepsis and Organ Failure. Berlin-Heidelberg: Springer-Verlag; 1993. S. 7-24.
Greenhalt DG, Saffle JR, Holmes JH, Gamelli RL, Palmieri TL, Horton JW et al.
American Burn Association Consensus Conference to Define Sepsis and Infection in Burns. J Burn Care Res 2007;28:776-90.
Griswold JA. White Blood Cell Response to Burn Injury. Übersicht und Vergleich der Immunantwort und patholog. Veränderungen nach Verbrennung. Seminars in Nephrology 1993;13(4):409-15.
Grütz G. New insights into the molecular mechanism of interleukin10 mediated immunosuppression . J Leukoc Biol 2005;77:3-15.
Harris BH, Gelfand JA. The immune response to trauma. Semin Pediatr Surg 1995; 4(2):77-82.
Haveman JW, Muller Kobolt AC, Cohen Tervaert JW, van den Berg AP, Tulleken JE, Kallenberg CGM, The TH. The central role of monocytes in the pathogenesis of sepsis: consequences for immunomonitoring and treatment. Neth J Med 1999;
55:132-41.
Heidemann M, Bengtsson A. The Immunologic Response th Thermal Injury.
World J Surg 1992;16:53-6.
7 Literaturverzeichnis 81
Herhman MJ, Appel SH, Wellhausen SR, Sonnenfeld G, Polk HC. Interferon-gamma treatmetn increases HLA-DR expression on monocytes inseverely injured patients. Clin exp Immunol 1989;77:67-70.
Hettich R, Hopt U Pospisil M, Torunsky R. Untersuchungen zur Entstehung und Therapie des Verbrennungsödems. Med Welt 1978; 29:1405-11.
Hultman, CS, Napolitano LM, CairnsBA, Brady LA, Cambpell C, deSerres S, Meyer AA. The Relationship Between Interferon-gamma and Keratinocyte Alloantigenj Expression After Burn Injury. Ann Aurg 1995; 222(3):384-93.
Huston DP. The Biology of the Immune System. JAMA 1997;278:1804-14.
Ioannovich JD, Hinzmann RD, Deichsel G, Steinmann GG. Rationale, design and performance of a clinical trral to investigate interferon-gamma (Imukin) in the prophylactic tratmetnt of severe burns-relates infections. Intensive Care Med 1996; 22:468-73.
Janeway CA, Travers P, Walport M, Shlomchik M. Immmunologie. 5.
Auflage.Heidelberg Berlin: Spektrum, Akad. Verlag; 2002.
Katakura T, Kobayashi M, Herndon DN, Suzuki F. Effect of IL-12 and soluble IL-4 rezeptor on the herpesvirus infection in human SCID chimeras whose Th2 cells predominate. Immunol. Cell Biol 2004;82:421-6.
Katakura T, Kobayashi M, Fujita K, Herndon DN, Pollard RB, Suzuki F. A Combination Therapy Using IL-12 and Soluble IL-4 Receptor on Herpes Simplex Virus Type 1 Infection in a Human-SCID Chimera Model of Thermal Injury. Clin Immunol 2002;10(3):363-70.
Kelly JL, Lyons A, Soberg CC, Mannick JA, Lederer JA. Anti-interleukin-10-antibody restores burn-indudes defects in T-cell function. Surgery 1997;122(2):
146-52.
Köller M, König W. Immunpathophysiologie des Verbrennungstraumas. Dtsch. . med. Wschr. 1991;116:67-73.
Kox W, Bone RC et al. Interferon Gamma-1b in the Treatment fo Compensatory Anti-inflammatory Response Syndrome. Arch intern med 1997;157(24):389-93.
Kremer B. Verbrennungstrauma. In: Schumpelick V, Bleese NM, Mommsen U, Hrsg. Chirurgie.3. Auflage. Ferdinand Enke Verlag: Stuttgart; 1994. S.174-8.
7 Literaturverzeichnis 82 Landmann R, Wesp M, Dukor, P. Modulation of Interferon-g-Induced Major Histoxompatibility (MHC) und CD 14 Antigen Changes by Lipophilic Muramyltripeptide MTP-PE in Human Monocytes. Cellular Immunology 1988;
117,45-55.
Lauw FN, Pajkrt D, Hack, CE, Kurimoto M, van Deventer SJH, van der Poll T.
Proinflammatory Effects of IL-10 During Human Endotoxemia. J Immunol 2000;165:2783-9.
Lin RY, Astiz ME, Saxon JC, Saha DC, Rackow EC. Relationships between plasma cytokine concentrations and leukocyte functional antigen expression in patients with sepsis. Critical Care Medicine 1994; 22(10):1595-1602.
Livingston DH. Loder PA, Kramer SM, Gibson UEM, Polk HC. Interferon gamma Administation increases monocyte HLA-DR Antigen Expression but not endogenous Interferon Production. Arch Surg 1994;19:172-8.
Lund T, Onarheim H, Reed RK. Pathogenesis of Edema Formation in Burn Injuries. World J Surg 1992;16:2-9.
Lyons A, Goebel A, Mannick JA, Lederer JA. Protecitve Effects of Early interleukin-10 Antagonism on Injury-Induced Immune Dysfunction. Arch Surg 134;1999:1317-23.
Lyons A, Kelly JL, Rodrick ML, Mannik JA, Lederer JA. Major Injury Induces Increased Production of Interleukin-10 by Cells of the Immune System With a Negative Impact on Resistance to Infection. Ann Surg 1997; 226(4):450-60.
Madihally SV, Toner M, Yarmush ML, Mitchell RN. Interferon Gamma Modulates Trauma-Induced Muscle Wasting and Immune Dysfunction. Ann Surg 2002;
236(5):649-57.
Mileski WJ, Rotlien R, Lipsky P. Interference with the Function of Adhesion Molecules by Monoclonal Antibodies as a New Approach Reducing Burn Nekrosis. In: Faist E, Baue AE, Schildberg FW, Hrsg. The Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis- Mechanism and therpeutic Approaches. Lengerich: Pabst; 1996. S. 1044-54.
Munford RS. Sepsis und septischer Schock. In: Schailzl KJG, Hrgs. Harrisons Innere Medizin. 13. Auflage. Berlin: Blackwell Wiss. Verl.; 1995. S.607-13.
Murray HW. Current and future clinical applications of interferon-gamma in host antimicrobial defense. Intensive Care Med 1996;22 Suppl 4:456-61.
7 Literaturverzeichnis 83 Nemsmann B. Verbrennungen. In: Henne-Bruns D, Dürig M, Kremer B, Hrsg.
Chirurgie. Stuttgart: Thieme Verlag; 2001. S.219-34.
Obiri NI, Hillman GG, Haas GP, Sud S, Puri RK. Expression of High Affinity Interleukin-4 Receptors on Human Renal Cell Carcinoma Cells and Inhibition of Tumor Cell Growth In Vitro by Interleukin-4. Journal of Clinical Inverstigation 1993;91: 88-93.
Pallua N, von Bülow S. Immunologische Reaktion nach thermischem Trauma. In:
Bruck JC, Müller FE, Stehen M, Hrsg. Handbuch der Verbrennungstherapie.
Landsberg: ecomed verlagsgesellschaft; 2002. S. 93-125.
Palmer JL, Tulley JM, Kovacs EJ, GAmelli RL, Taniguchi M, Faunce DE. Injury-Induced Suppression of Effector T Cell Immunity Requires CD1d-Positive APCs and CD1d- Restricted NKT Cells. J Immunol 2006;177:92-9.
Parkin J, Cohen B. An overview of the immune system. Lancet 2001;357:1777-89.
Pierangeli SS et al. Murine interferon-gamma enhances resistance to infection with strains of Pseudomonas aeruginosa in mice. Cytokine 1993;5(3):230-4.
Pietzsch M. Störungen der Monozyten- und Lymphozyteninteraktion nach schwerem Verbrennugstrauma -Diagnostischer und prognostischer Wert durchflusszytpmetrischer Meßgrößen (Dissertation). Hannover: Medizinische Hochschule; 2004.
Pinsky MR. Sepsis: A Pro-and Anti-Inflammatory Disequilibrium Syndrome.
Contrib Nephrol 2001;132:354-66.
Polk HC JR A. Randomized Prospecitve Clinicla Trail to Determine the Efficacy of Interferon-gamma in Severely Injuted Patients. Am J Surg 1992;163(2): 191-6.
Pruitt BA, Burleson DG, Drost AC, Cioffi WG, Mason AD. Humoral Manifestations of Regulation and Dysregulation of the Systemic Mediator Response in Injury and Sepsis. In: Faist E, Baue AE, Schildberg FW, Hrsg. The Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis- Mechanism and therpeutic Approaches.
Lengerich: Pabst; 1996. S.248-55.
Riede UN, Schaefer HE. Physikalische Zellschädigungen. In: Riede UN, Schaefer HE, Wehner H, Hrsg. Allgemeine und spezielle Pathologie. 3. Auflage, Stuttgart-New York: Georg Thieme Verlag;1993. S.155-68.
7 Literaturverzeichnis 84
Riede UN. Entzündungspatholgie. In: Riede UN, Schaefer HE, Wehner H, Hrsg.
Allgemeine und spezielle Pathologie. 3. Auflage, Stuttgart-New York: Georg Thieme Verlag;1993. S. 207-47.
Rinderknecht H. Genetic Determinants of Mortality in Acute Necrotizing Pancreatitis. Int J Pancreatol 1994;16(1):11-5.
Robinson SP, Patterson S, Englich N, Davies D, Knight SC, Reid CDL. Human perogheral blood contains two distinct lineages of dendritic cells. Eur J Immunol 1999;29:2769-78.
de Roche R. Epidemiologie. In: Bruck JC, Müller FE, Stehen M, Hrsg. Handbuch der Verbrennungstherapie. Landsberg: ecomed verlagsgesellschaft; 2002. S. 27-33.
Ruppert J, Friedrichs D, Xu H, Peters JH. IL-4 Decreases the Expression of the Monocyte Differentiation Marker CD 14, Paralleled by an Increasing Accessory Potency. Immunobiol 1991;182:449-64.
Sachse C, Prigge M, Cramer G, Pallua N, Henkel E. Association between Reduced Human Leukocyte Antigen (HLA)-DR Expression on Blood Monocytes and Increased Plasma Level of Interleukin-10 in Patients with Severe Burns. Clin Chem Lab Med 1999;37(3):193-8.
Schinkel C, Sendtner R, Zimmer S, Faist E. Functional Analysis of Monocyte Subsets in Surgical Sepsis. J Trauma 1998;44(5):743-49.
Schlüter B, König W, Köller M, Erbs G, Müller FE. Studies on B-lymphocyte Dysfuncions in Severely Burned Patients. J Trauma 1990;30(11):1380-9.
Shah, PM. Infektionskrankheiten. In: Schellter G, Greten H, Hrsg. Innere Medizin.
9. Auflage. Stuttgart-New York: Georg-Thieme Verlag; 1998.
Solomkin JS. Neutrophil Disorders in Burn Injury: Complement, Cytokines and Organ Injury. J Trauma 1990; 30 Suppl 12: 80-5.
Spits H, deWaal-Malefyt R. Functional Characterization of Human Interleukin-10.
Int Arch Allery Immunol 1992;99:8-15.
Struzyna J, Podja Z, Braun B, Chomicka M, Sobiczewska E, Wrembel J. Serum cytokine levels in burned patients. Burns 1995;21(6):437-40.
7 Literaturverzeichnis 85
Tilg H, Montfrans C, van den Ende A, et al. Treatment of Crohn´s disease with recombinant human interleukin induces the proinflammatory cytokine interferon gamma. Gut 2002;50:191-5.
Toliver-Kinsky TE, Varma TK, Lin CY, Herndon DN, Sherwood ER. Interferon gamma production is suppressed in thermally injured mice: Decreased production of regulatory cytokines and corresponding receptors. Shock 2002;
18(4),322-30.
Thommsen H, Kahan M, Londey M: Differential effects of interleukin-10 on the expression of HCA class ll and CD1 molecules induced by granulocyte/macrophage colony stomulation factor/interleukin-4. Eur J Immunol 1995;25(9):2465-70.
van der Poll T, Marchant A, Buurman WA, Berman L, Keogh CV, Lazarus DD et al. Endogenous IL-10 Protects Mice from Death During Septic Peritonitis. J Immunol 1995;155:5397-401.
Venet F, Tissot S, Debard AL, Faudot C, Crampe C, Pachot A, Ayala A, Monneret G. Decreased monocyte human leukocyte antigen-DR expression after severe burn injury: Correlation with severity and secondary septic shock. Crit Care Med 2007;38(8):1910-7.
Vindenes HA, Ulvestad E, Bjerknes R. Concentrations of cytokines in Plasma of patients with large burns: their relation to time after Injury, burn size, Inflamatory variables. infection and Outcome. Eur J Surg 1998;164:647-56.
Vogt PM, Mühlberger T, Drücke D, Steinau HU.: Thermische, chemische und elektrische Schäden. In Bruch HP, Trentz O, Hrsg. Chirurgie. 4.Auflage.
München: Urban&Fischer Verlag; 2001. S.447-60.
Volk HD et al. Alterations in Function und Phenotype of Monocytes from Patients with Septic Disease – Predictive Value and New Therapeutic Strategies. Behring Inst. Mitt. 1991;88:208-5.
Wakefield CH, Carey PD, Foulds S, Monson JRT, Guillou PJ. Changes in Major Histocompatibility Complex Class ll Expression in Monocytes and T cells of Patients Developing Infection after Surgery. Br J Surg 1993;80:205-9.
Ward PA, Till GO. Pathophysiologic Events Related to Thermal Injury of Skin. J Trauma1990; 3012 Suppl 12:75-9.
Warden GD. Burn Shock Resuscitation. World J Surg 1992;16:16-23.
7 Literaturverzeichnis 86
Wassermann D, Ioannovich JD, Hinzmann RD, Deichsel G, Steinmann GG.
Interferon-gamma in the prevention of severe burn-related intections: A Eurpoean phase lll multicenter trial. Crit Care Med 1998;26(3):434-9.
Weiß C, Hrsg. Basiswissen medizinische Statsitik. 3. Auflage. Heidelberg:
Springer Medizin Verlag; 2005.
Witthaut R, Werdan K. Ergebnisforschung – Bedeutung für die Sepsis und den septischen Schock. Infusionsther Transfusionsmed 1996;23 Suppl 4:127-36.
G. Wolterink: Der Verlauf der Phagozytoseaktvität und der intrazellulären pH-Werte von neutrophilen Granulozyten und Monoyten nach schwerem Verbrennungstrauma (Dissertation).Hannover: Medizinische Hochschule; 1998.
Yeh FL, Shen HD, Fang RH. Deficient transforming growth factor ß and interleukin-10 responses contribute to the septic death of burned patients. Burns 2002; 28:631-7.
Yeh FL, Lin WL, Shen HD. Changes in circulating levels of an anti-inflammatory cytokine interleukin 10 in burned patients. Burns 2000; 26:454-59.
Youn YK, LaLonde C, Demling R. The Role of Mediators in the Response to Thermal Injury. World J Surg 1992;16:30-6.
Zapata-Sirvent RL, Hansbrough JF. Temporal anasysis of human leucocyte surface antigen expression and neutrophil respiratory burst activity after thermal injury. Burns 1993;19(1):5-11.
Ziegler-Heitbrock HWL: Definition of human blood monocytes. J Leukoc Biol 2000; 67:603-6.
Zola H, Swart B. The human leucocyte differentiation antigens (HLDA) workshops: the evolving role of antibodies in research, diagnosis and therapy.
Cell Research2005;15(9):691-4.
8 Anhang 87
8 Anhang
Tabelle 1. Einfluss von Serum von Verbrennungspatienten auf die HLA-DR-Expression in %
Normalserum Serum von
Verbrennungspatienten
Zeit 24h 48h 24h 48h
Buffy coat
A 94,6 89,5 83,2 27,8
B 98,4 95 91,5 43,7
C 98,6 98,3 97,9 59,6
D 86,3 97,7 85,5 74,4
E 93,2 91 83,9 61,5
F 74,3 88,9 88 61,8
MW ± Stabw 90,9 ± 9,3 94,9 ± 4,1 88,3 ± 5,6 54,8 ± 16,5
8 Anhang 88
Tabelle 2. Einfluss von Zeit und Aufarbeitung auf die HLA-DR-Expression in %
Zeit Frischblut Sofort 24h 48h 72h 96h
Spender
2 68,8 31 82,7 57,4 20,3 38,6
3 79,7 70,8 94,4 67,8 30,6 47,4
4 93,7 62,7 93,5 52,2 46,9 31,2
5 92,6 22,4 75,5 64,5 84,2 44,5
6 88 52,4 92 63 77,4 63
7 77,6 26 78,5 43,1 84,5 91
MW ± Stabw
83,4 ± 9,71 44,2 ± 20,5 86,1 ± 8,2 58 ± 9,1 57,3 ± 28,5 52,6 ± 21,6
8 Anhang 89
Tabelle 3. Einfluss von Interleukin-10 auf die HLA-DR-Expression in % im Ansatz mit Serum von gesunden Kontrollpersonen
Interleukin-10-Konzentration
100 U 10 U 1 U Kontrolle
Spender
1 57,1 69,5 64,5 67,3
2 18,5 50,5 56 51
3 44,5 46,1 55,7 72,5
8 55,4 85,2 90,5 91,5
9 57,5 89,8 90,4 87,5
10 62,5 75,7 91,3 86
11 75,3 84,3 92,1 90,5
12 77,8 94,4 93,1 92,9
MW ± Stabw 56,1 ± 18,6 74,4 ± 17,9 79,2 ± 17,2 79,9 ± 14,9
8 Anhang 90 Tabelle 4. Einfluss von Interleukin-4 auf die HLA-DR-Expression in % im Ansatz
mit Serum von gesunden Kontrollpersonen
Interleukin-4-Konzentration
100 U 10 U 1 U Kontrolle
Spender
1 99 95,7 74,3 60,3
8 99,7 98,1 93,9 94,4
11 99,5 99,7 99,7 92,6
13 99,4 98,9 99,5 95,1
14 98,7 94,3 72,1 67,8
MW ± Stabw 99,3 ± 0,4 97,3 ± 2,3 87,6 ± 13,5 82 ± 16,7
8 Anhang 91 Tabelle 5. Einfluss von Interferon-gamma auf die HLA-DR-Expression in % im
Ansatz mit Serum von gesunden Kontrollpersonen
Interferon- gamma-Konzentration
100 U 10 U 1 U Kontrolle
Spender
2 99,5 95 86,5 81,6
13 99,3 99,5 99,3 84,6
1 99,8 90,9 64,6 60,3
14 99,8 98,8 85,4 67,8
11 99,7 99,3 99,2 92,6
MW ± Stabw 99,6 ± 0,2 96,7 ± 3,7 87 ± 14,2 77,4 ± 13,1
8 Anhang 92 Tabelle 6. Einfluss von Interleukin-10 auf die HLA-DR-Expression in % im Ansatz
mit Serum von Verbrennungspatienten
Interleukin-10-Konzentration
100 U 10 U 1 U Kontrolle
Spender
1 39,9 67,7 65,2 60,6
8 71,5 79,7 86,8 76,1
9 52,3 76,2 54 61,8
11 84,3 93,1 93,4 90,7
12 63,2 83,8 85,1 93,9
14 43,3 63,5 61,2 59,8
15 46,4 64,4 48,8 47
16 57,8 63,5 63,5 57,7
MW ± Stabw 57,7 ± 15,2 74 ± 11 70 ± 16,5 68,5 ± 16,7
8 Anhang 93 Tabelle 7. Einfluss von Interleukin-4 auf die HLA-DR-Expression in % im Ansatz
mit Serum von Verbrennungspatienten
Interleukin-4-Konzentration
100 U 10 U 1 U Kontrolle
Spender
8 78,1 68,7 60,7 64
9 83,2 72,4 51,4 69
11 98,4 98,4 93,5 90,7
14 74,4 65 66,5 59,8
15 80,4 73,5 62,2 47
16 78,3 78,2 76,8 57,7
17 86,1 85 86,6 85,5
MW ± Stabw 82,7 ± 4,7 77, 3 ± 11,3 71,1 ± 15,1 67,6 ± 15,6
8 Anhang 94 Tabelle 8. Einfluss von Interferon-gamma auf die HLA-DR-Expression in % im
Ansatz mit Serum von Verbrennungspatienten
Interferon- gamma-Konzentration
100 U 10 U 1 U Kontrolle
Spender
1 82,8 69,1 79,2 64,1
8 93,9 73,5 72,9 64
9 87,9 64,9 68,6 69
11 98,3 95,7 92,4 90,7
15 95 85,4 70,4 47
16 97,4 84,4 82,8 57,7
17 94,8 92,9 88 85,,5
MW ± Stabw 92,9 ± 5,6 81 ± 12 79,2 ± 9,1 68,3 ± 15,3
8 Anhang 95 Tabelle 9. HLA-DR-Konzentration in % in-vitro
Tag1 Tag 7 Tag 14 Tag21 Tag 28
invitro
pat1 83,3
pat2 85,3 85,5 85,4 82,9
pat3 61,3 54,9
pat4 53,3 54,4 69,3
pat5 70,8 48,6 77,4
pat6 78,3 65,3 95,5
pat7 63,6 64,3 58,4
pat8 56,6
pat9 92 75,9 87,9
pat10 50,3 81,3
pat11 47,6 62,5 87,8
pat12 93,8 66,5
pat13 55,7 82,1
pat14 70,1
pat15 60,2 58,7
pat16 74,5 58,1
pat17 56 81,9
pat18 56 52,8
pat19 55,6 63,1
pat20 64,3 60,2
8 Anhang 96 Tabelle 10. HLA-DR-Konzentration in % ex-vivo
Tag1 Tag7 Tag14 Tag21 Tag28
ex-vivo
pat1 92,9
pat2 56,5 54,3 66,8 73
pat3 48,2 40,3
pat4 9,8 16,8 48,1
pat5 74,1 25,1 66,5
pat6 32,4 20,9 53,5
pat7 63,9 51,1 53,2
pat8 40,1
pat9 42,8 74,2 50,2
pat10 11,7 41,3
pat11 17,1 23,7 76,9
pat12 55,4 34,2
pat13 15,1 50,1
pat14 25,2
pat15 55,3 51,8
pat16 49,3 56,9
pat17 20,8 51,1
pat18 40 8,7
pat19 65,6 48,8
pat20 20,6 47
8 Anhang 97 Tabelle 11. HLA-DR-Expression in % nach Zusatz von monoklonalen Antikörpern
gegen Interleukin-10, Interferon-gamma und Interleukin-4
Kontrolle Anti-IL-10 Anti IFN-gamma
Anti-IL-4
Spender
2 62,35 83 65,1 75,4
5 83,6 94,2 85 86,5
6 52,8 69,6 58,2 49,6
8 76,3 94,6 84,9 81,1
9 62,9 78,6 72,1 78,8
11 71,7 69,6 75,3 70,9
17 55,8 82,7 70,5 61,5
MW ± Stabw 65,3 ± 12 83,8 ± 9,5 72,6 ± 10,7 72,1 ± 13,9
8 Anhang 98 Tabelle 12. HLA-DR-Expression in % nach Zusatz von Interleukin-10 sowie
Interleukin-10 + monoklonalem Antikörper und Serum von gesunden Kontrollpersonen als Kontrolle
100 U IL-10 100 U IL-10+MAK Kontrolle Spender
2 61,7 67,5 60,3
5 83,7 98 98,6
6 51,1 68,6 68
7 39,1 57,2 64,2
8 50 69,3 67,8
9 89,6 96 94,9
14 84,4 90,9 92,6
15 92,2 98,2 98,7
17 85,3 85,8 94,1
MW ± Stabw 66,3 ± 22 80 ± 17,1 81 ± 15,9
Danksagung
An dieser Stelle gilt mein Dank allen, die mir während der Erstellung dieser Arbeit geholfen haben.
Mein besonderer Dank gilt:
Herrn Prof. Dr. med. E. Henkel für die Überlassung des Themas und die wertvollen Ratschläge.
Herrn Prof. Dr. rer. nat. R. Lichtinghagen für die Übernahme und die Unterstützung
Herrn Prof. Dr. rer. nat. R. Lichtinghagen für die Übernahme und die Unterstützung