Über eine neue Methode zur Bestimmung der Diaminoxydase-Aktivität

Über eine neue Methode

zur Bestimmung der Diaminoxydase-Aktivität

V o n WILFRIED LORENZ, JÜRGEN KUSCHE u n d EUGEN WERLE

Aus dem Klinisch-Chemischen Institut an der Chirurgischen Klinik der Universität München*

(Direktor: Prof. Dr. Dr. E. Werle)

(Der Schriftleitung zugegangen am 15. Februar 1967)

Herrn Prof. F. Hahn zum 60. Geburtstag gewidmet

Zusammenfassung: 1. Es wird eine neue Methode

zur Bestimmung der Diaminoxydase beschrieben.

Sie beruht auf der Messung des beim Substrat- umsatz freiwerdenden Ammoniaks mit Hilfe der GIutamatdehydrogenase-Reaktion.

2. Die Enzymaktivität ist in weiten Grenzen der Enzymmenge direkt proportional. Die Substrat- konzentrations-Aktivitätskurven mit Putrescin, Hexamethylendiamin und Benzylamin besitzen kein ausgeprägtes Optimum, im Gegensatz zu denen mit Cadaverin und Histamin.

3. Die optimalen Konzentrationen für die Indikator- reaktion sind: 0,05 ml Glutamatdehydrogenase (ent- sprechend 3,2 U),

NADH und

a- Oxo-glutarsäure.

4. Die wesentlich stärkere Hemmwirkung von Aminoguanidin bei Cadaverin als Substrat gegen- über Histamin als Substrat und die starke Hemm-

wirkung von Semicarbazid bei beiden Substraten war auch an Hand der neuen Methode nachweisbar.

5. 10- ~

M Chlorpromazin aktiviert die Diaminoxy- dase bei Cadaverin, Putrescin, Hexamethylendia- min, Benzylamin und Histamin als Substrat maxi- mal bis 450%. Das Indikatorsystem wird durch die Gegenwart von Chlorpromazin nicht beeinflußt.

6. Die Werte für die Diaminoxydase-Aktivität, mit der Glutamatdehydrogenase-Methode und der o- Amino-benzaldehyd-Methode gemessen, stimmen gut überein.

7. Nach orientierenden Versuchen eignet sich die Glutamatdehydrogenase-Methode zur Bestimmung der Diaminoxydase auch in tierischen Geweben und im Serum. Sie ist auch zur Bestimmung anderer Enzymaktivitäten geeignet, durch die Ammoniak entwickelt wird, wie z.B. zur Bestimmung der Monaminoxydase und der Urease.

Summary: 1. A new method is described for the

determination of diamine oxidase. The ammonia released from the substrate is measured with the aid of glutamate dehydrogenase.

2. Within wide limits, the enzyme activity is directly proportional to the amount of enzyme. The Sub- strate concentration-activity curves with putrescine, hexamethylene diamine and benzylamine have no marked Optimum, unlike those with cadaverine and histamine.

3. The optimal concentrations for the test reaction mixture are: 0.05 ml glutamate dehydrogenase

* Postanschrift: Dr. W . LORENZ, 8 München 15, Nuß- baumstraße 20.

(equivalent to 3.2 U);

NADH;

oc- oxoglutaric acid.

4. With the new method, it was possible to show that aminoguanidine inhibits the oxidation of cada- verine more than that of histamine, and the oxi- dation of both substrates is strongly inhibited by semicarbazide.

5. With the substrates cadaverine, putrescine, hexa-

methylene diamine, benzylamine and histamine, the diamine oxidase activity is increased up to 450%

by 10- M chlorpromazine. The test system is not affected by chlorpromazine.

6. There is good agreement between the glutamate

dehydrogenase method and the o-amino-benzal-

dehyde m e t h o d f o r the measurement of diamine oxidase activity.

7. Comparative studies show that the glutamate de- hydrogenase m e t h o d is also suitable f o r the meas- D i e oxydative Desaminierung von Diaminen u n d M o n o a m i n e n durch Diaminoxydase* bzw. M o n - aminoxydase** verläuft n a c h folgender Brutto- gleichung:

R- C H 2 - N H 2 + 02 + H20 ->

-> R - C H O + N H3 + H2O2. (1)

D e m n a c h k a n n die Aktivität dieser Enzyme durch die Bestimmung des Amin- oder Sauerstoffver- brauchs, des entstehenden Aldehyds, Hydroper- oxids oder A m m o n i a k s gemessen w e r d e n1 - 4. F ü r die Diaminoxydase beschreiben wir im folgenden eine M e t h o d e , bei der das entstehende A m m o n i a k m i t Glutamatdehydrogenase (EC 1.4.1.2) als Indi- k a t o r e n z y m im optischen Test5 n a c h Gl. (2) ge- messen w i r d :

a-Oxo-glutarat + N H3 + N A D H +

^ Glutamat + NAD© + H20 . (2)

Auf G r u n d der Gleichgewichtslage6 der Indikator- r e a k t i o n

g_[a-Oxo-glutarat]'[NH3]-[NADH]-[H©]

[Glutamat] • [NAD ©]• [H20]

k a n n das entstehende A m m o n i a k praktisch voll- ständig e r f a ß t werden.

Methoden

Enzymmaterial und -einheiten

Diaminoxydase aus Erbsenkeimlingen, nach WERLE et al.7 angereichert bis zu einer spezif. Aktivität von 0.66 U

* Diamin:02-Oxydoreduktase (EC 1.4.3.6).

** Monoamin:02-Oxydoreduktase (EC 1.4.3.4).

1 E. A. ZELLER, Advances in Enzymol. 2, 9 3 [ 1 9 4 2 ] .

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4 E . W E R L E , in HOPPE-SEYLER/THIERFELDER, Handb. d.

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SCHIRREN, Z . g e s . e x p . M e d . 1 3 8 , 5 2 2 [ 1 9 6 5 ] .

5 O . W A R B U R G U. W . CHRISTIAN, Biochem. Z . 287, 2 9 1 [ 1 9 3 6 ] .

6 H . J . STRECKER, Methods in Enzymol. 2, 2 2 0 [ 1 9 5 5 ] .

7 E . W E R L E , I . TRAUTSCHOLD U. D . A U R E S , diese Z . 3 2 6 , 2 0 0 [ 1 9 6 1 ] .

urement of diamine oxidase in animal tissues a n d in serum. It can also be used t o measure other enzymat- ic reactions in which a m m o n i a is produced, e . g . the determination of m o n o a m i n e oxidase a n d urease.

((jiMol NH3/Min.)jemgProtein,entsprechend 36BÜCHER- Einheiten/mg Protein⁸ oder 93 AE/mg Protein l O2/

10 Min. je mg Protein) nach W E R L E et al.⁷. Aus der ge- messenen Extinktionsabnahme von N A D H bei 366 nm/

Min. errechnen sich die Einheiten nach Gl. (3):

Anzahl U - (A£/Min.) • 0,9 (3) Substrate

Als Substrate der Diaminoxydase wurden verwendet:

Cadaverin und Histamin der Fa. Fluka, Buchs; Putrescin und Hexamethylendiamin in Form der Dihydrochloride von Dr. Schuchardt, München; Benzylamin (Fluka).

Für die Indikatorreaktion verwendeten wir von C. F.

Boehringer & Söhne, Mannheim: Glutamatdehydro- genase (G1DH-S), NADH-Na2 aus enzymatischer Re- aktion, Dinatrium-a-oxo-glutarat.

Ansätze

In sorgfältig gereinigte Glasküvetten9, Schichtdicke 10 mm, wurden die in Tab. 1 aufgeführten Lösungen in der angegebenen Reihenfolge pipettiert.

Tab. 1. Testmischung zur Bestimmung der Diaminoxy- dase» Aktivität.

ml Lösung Endkonzentration 2,15 Phosphatpuffer 0,2M KH2P04/Na2HP04

pH 7,4

0,1 NADH-Na2 0,19mM

0,1 oc-Oxo-glutarat-Na2 5,7mM

0,05 Glutamatdehydrogenase 3,2 U bzw. 175 B Ü C H E R -

Einh./3 ml 0,1 Diaminoxydase-Präp. 0,025—0,1 U/3 ml 0,5 Substrat 0,3mM Cadaverin oder

8mM Putrescin oder 14mM Hexamethylen-

diamin oder

16mM Benzylamin oder ImM Histamin Die Inkubation erfolgte unter Luft bei 25 °C, End- pH 7,4. Start mit 0,5 ml Substratlösung, beim Leerwert mit 0,5 ml Puffer. Der „Schleich" wurde abgewartet.

8 G . BEISENHERZ, H . J . BOLTZE, T h . B Ü C H E R , R . C Z O K , K . H . GABARDE, E . M E Y E R - A R E N D T U. G . PFLEIDERER,

Z. Naturforsch. 8b, 555 [1953].

9 E. KIRSTEN, C . G E R E Z U. R . KIRSTEN, Biochem. Z . 337, 312 [1963]; L. K . REICHELT, E. KVAMME U. B. TVEIT,

Scand. J. clin. Lab. Invest. 16, 433 [1964].

Die Extinktionsabnahme von N A D H bei 366 nm wurde im Photometer „Eppendorf" mit automatischem Kü- vettenwechsler und Registrierschreiber aufgenommen, der Küvettenwechsel erfolgte 15—45 Min. lang alle 30—60 Sek. Die Berechnung des zugehörigen A^/Min.

erfolgte durch Verbinden der einzelnen Extinktions- werte und Bildung des Quotienten aus Gesamtextink- tionsabnahme/Anzahl der Minuten. Die Enzymaktivität wurde bestimmt als konstantes A£/Min. bei 366 nm zwischen Haupt- und Leerwert. Der molare Extink- tionskoeffizient s für N A D H bei 366 nm beträgt 3,3 • 106 [cm2/Mol]10.

Die Proteinbestimmung erfolgte nach W A R B U R G und

CHRISTIAN1 1.

Zusätze

Aminoguanidinsulfat von Dr. Schuchardt, Semicarbazid- hydrochlorid und ö-Amino-benzaldehyd von E. Merck, Darmstadt, Chlorpromazin ( = 2-Chlor-10-[3-dimethyl- amino-propyl]-phenothiazin-hydrochlorid) der Farben- fabriken Bayer.

Ergebnisse

1. Ermittlung der optimalen Bedingungen für das Indikatorsystem zur Bestimmung der Diaminoxydase- Aktivität

Für das Indikatorsystem erwiesen sich die folgenden Konzentrationen als optimal (Tab. 2): 0,05 ml Glu- tamatdehydrogenase (3,2 U/Ansatz), 0 , 1 9 m M N A D H , 5, 7 M M a-Oxo-glutarat. H ö h e r e N A D H - Konzentrationen setzen die Glutamatdehydroge- nase-Aktivität herab, was teilweise auf der durch N A D H verursachten Dissoziation der Glutamat- dehydrogenase in Untereinheiten beruhen könnte1 2. Mit Cadaverin als Substrat erhält m a n f ü r die ge- koppelten Reaktionen ein p H - O p t i m u m bei p H 7,4 und ein zweites in etwa gleicher H ö h e bei p H 8,0, das nicht sehr ausgeprägt ist. D a das p H - O p t i m u m der Diaminoxydase mit Cadaverin als Substrat bei p H 7,5 liegt1 3, bevorzugen wir p H 7,4. Eine günstige Pufferkonzentration ist 0,2M Phosphat.

2. Enzymkonzentration und Reaktionsverlauf A b b . 1 zeigt, d a ß die Reaktion bei gegebener Sub- stratkonzentration in den Ansätzen mit 0,05 u n d 0,1 U vom Start weg linear verläuft, mit 0,35 u n d

1 0 H . J. HOHORST, Biochem. Z. 328, 509 [1956].

1 1 O. W A R B U R G U. W . CHRISTIAN, Biochem. Z. 310, 384 [1942].

12 E. BÄSLER in HOPPE-SEYLER/THIERFELDER, Handb.

d. physiol.- u. pathol.-chem. Analyse, Bd. Via, S. 683, Springer-Verlag, Heidelberg 1964.

1 3 R . K A P E L L E R - A D L E R , Federat. Proc. 2 4 , 742 [1965].

Tab. 2. Ermittlung der optimalen Bedingungen für das Indikatorsystem und des optimalen pH-Werts zur Be- stimmung der Diaminoxydase-Aktivität. Die Konzen- trationen der Diaminoxydase (0,07 U/Ansatz) und des Cadaverins (0,3mM) waren in allen Ansätzen gleich. Die beim Variieren einer Inkubationsbedingung jeweils kon- stant gehaltenen Bedingungen waren: pH 7,4; Glutamat- dehydrogenase 3,2 U/3 ml Ansatz; NADH 0,19mM;

a-Oxo-glutarat 5,7MM; Phosphat 0,2M. Weitere Angaben s. unter Methodik.

Inkubationsbedingungen währenddessen

konstant gehalten variiert im Bereich von

als opti- mal be- funden pH, [NADH], [a-OG], [GIDH] 0,16 bis 3,2 U

[Phosphat] 3,6 U

pH, [GIDH], [a-OG], [NADH] 0,09 bis 0,19mM

[Phosphat] l,llmM

pH, [GIDH], [NADH], [a-OG] 1,5 bis 7,5mM

[Phosphat] _17,lmM

[GIDH], [NADH], pH 6,0 bis 7,4; 8,0

[a-OG], [Phosphat] 8,5

pH, [GIDH], [Phosphat] 0,067 0,2M

[NADH], [a-OG] bis 0,5M

Putre sein NADH

1/ f

\

y

0t35U

0,1 ü )

0,05U )

10 20

tfMinJ

Abb. 1. Enzymkonzentration und Reaktionsverlauf.

Diaminoxydase-Aktivität in AE (Extinktionsabnahme von NADH/Min.), Putrescinkonzentration 8mM, wei- tere Bedingungen s. unter Methodik. Versuchsbeschrei- bung s. Text.

0.45 U in der typischen Form einer Konsekutiv- abhängig von verschiedenen Substraten, Puffern reaktion

: Induktionsperiode bis 3 Min., linearer und Pufferkonzentrationen (Abb. 2).

Kurventeil bis 7 Min., anschließend Plateaubildung.

Letztere beruht nicht auf der Erschöpfung des Sub- 4. Reaktionsgeschwindigkeit mit steigender Substrat- strats der Diaminoxydase, sondern auf Mangel an konzentration

NADH, was sich daraus ergibt, daß die Reaktion Von den Substraten Cadaverin, Putrescin Hexa- nach Zusatz von

NADH wieder in Gang methylendiamin, Benzylamin und Histamin wird kommt, nicht aber nach Zugabe von 5m

Putrescin. Cadaverin am raschesten umgesetzt. Optimale Kon- NADH ist somit der limitierende Faktor unter den zentrationen der genannten Reihenfolge • 0 3m

gegebenen Bedingungen.

und

Mit Ausnahme vom

1. Reaktionsgeschwindigkeit bei steigender Enzym- ^ ^ L l l l T ^ bei konzentration in Gegenwart verschiedener Puffer- * Z l r t T f ^ " f l ^

°

arten und -konzentrationen und Substrate werfen (Ibb- 3). * Im Bereich von 0,025—0,5 mg Enzymprotein und

höher (z. B. 2 mg) ist die Reaktionsgeschwindigkeit 5. Hemmung der Diaminoxydase durch Amino- direkt proportional der Enzymkonzentration, un- guanidin und Semicarbazid

^ OM

J

0,02-

0,1 0,2 0,3 0,1*

Protein [mg]

Abb. 2. Reaktionsgeschwindigkeit und Enzymmenge.

Diaminoxydase-Aktivität in AE (Extinktionsabnahme von NADH/Min.), weitere Bedingungen s. unter Me- thodik.

: 0,3mM Cadaverin, 0,2M Phosphatpuffer

: 0 , 3 m M C a d a v e r i n , 0 , 0 6 7M P h o s p h a t p u f f e r

: 8mM Putrescin, 0,25M Trispuffer

: 0 , 1 MM H i s t a m i n , 0 , 0 6 7M P h o s p h a t p u f f e r

Jeweils Mittelwerte aus 2 Bestimmungen.

1 4 H. M. BERGMEYER, Methoden d. enzymat. Analyse, S. 11, Verlag Chemie GmbH, Weinheim/Bergstraße

1 9 6 2 .

Die starke Hemmung der Diaminoxydase durch Aminoguanidin und Semicarbazid

läßt sich auch anhand der neuen NADH-Methode nachweisen.

Bei Putrescin als Substrat hemmte Aminoguanidin 10"

M noch zu 100%, 10"

M noch zu 50%. Auch Semicarbazid hemmte 10~

M noch zu 100%. Bei Histamin als Substrat hemmte Aminoguanidin 10"

M nur zu 80%, erst 5 • 10-

M hemmten 100%

der Aktivität.

Die Aktivität der Glutamatdehydrogenase wird in Gegenwart von 10~

M Ammoniumacetat als Sub- strat durch 5 • 10~

M Aminoguanidin und 10~

M Semicarbazid nicht beeinflußt.

6. Aktivierung der Diaminoxydase durch Chlor- promazin

In Gegenwart von Chlorpromazin fanden wir einen erhöhten NADH-Verbrauch. Ansätze mit dem In- dikatorsystem allein und verschiedenen Konzen- trationen von Ammoniumacetat ergaben, daß das Indikatorsystem durch Chlorpromazin in den ver- wendeten Konzentrationen nicht beeinflußt wird.

Chlorpromazin aktiviert also die Diaminoxydase aus Erbsenkeimlingen, und zwar maximal in 10~

M Konzentration um 230—450% (Tab. 3).

7. Vergleichende Bestimmung der Diaminoxydase- Aktivität mit der Glutamatdehydrogenase-Methode und der Methode von Holmstedt und Tham

Ein Mol NH

entspricht nach Gl. (1) einem Mol Aldehyd und einem Mol O2, vorausgesetzt, daß das

1 5 W. SCHULER, Experientia [Basel] 8, 230 [1952].

1 6 B . HOLMSTEDT U. R . THAM, Acta physiol. scand. 4 5 ,

152 [1959].

0,02-

0,01-

1

— / / —

1

s '

/ / 7 *

z

-v / ip ««««,,,

-ft

>

k ^{- f f 1 •}

(S][mMol/l]-*~

Abb. 3. Reaktionsgeschwindigkeit und Substratkonzentration. Diaminoxydase-Aktivität in AE (Extinktionsab- nahme von NADH/Min.), 0,033 U Diaminoxydase (0,05 mg Protein). Weitere Bedingungen s. unter Methodik.

• • : Cadaverin, o o: Putrescin, Benzylamin, o- - -o: Hexamethylendiamin, 3 3 : Histamin!

Mittelwerte aus 2 Bestimmungen.

Tab. 3. Aktivierung der Diaminoxydase durch Chlor- promazin. Die Enzymaktivität wird als Extinktions- abnahme von NADH bei 366 nm angegeben, die Sub- strate waren in den oben beschriebenen optimalen Kon- zentrationen zugesetzt, %-Angaben bedeuten Aktivie- rung in %. Weitere Angaben s. unter Methodik.

Substrat

Chlor- Hexa-

promazin Cadaverin Putrescin methylen- Histamin diamin

A

El

El

El

El

[Mol//] Min. % Min. % Min. % Min. % 0 0,046 - 0,048 - 0,044 - 0,0022 -

0,060 30 0,056 15 0,046 5 0,0024 10 IO-4 0,070 50 0,064 30 0,052 20 0,0034 55 IO-3 0,160250 0,168 250 0,144 230 0,0122 455

H2O2 nicht durch Katalase gespalten wird. Die Be- ziehung NHß-Bildung zu N A D H - V e r b r a u c h k a n n deshalb zum Vergleich verschiedener Methoden der Diaminoxydasebestimmung herangezogen wer- d e n1'4 ( A b b . 4).

Im Bereich unserer Messungen ist die Extinktions- a b n a h m e von N A D H direkt proportional der ein- gesetzten N H 4@- M e n g e . Mit £NADH, 366 nm

= 3,3 - 1 06 [cm2/Mol] und E = e-cd (wobei

d = Schichtdicke in cm u n d E = 0,1), errechnet sich ein N H4 @- G e h a l t von 3,0 • 10~5 M o l N H4 e/ / , der sich auch aus den Messungen der Eichkurve ergibt (Abb. 4).

Abb. 4. Beziehung zwischen NH3-Konzentration und Extinktionsabnahme von N A D H bei 366 nm. Zusatz von Ammoniumacetat in 10~6 bis 2,5 • 10~4M End- konzentration. Mittelwerte aus 3 Bestimmungen, Mes- sungen nach K I R S T E N et al.9 als Endpunktsbestimmun- gen. Direkte Proportionalität ist bis 1 • 10~7M NH4® ZU erreichen. Weitere Bedingungen s. unter Methodik.

OflL

f 0,03 §

0,02

0,01

Abb. 5. Vergleich der Glutamatdehydrogenase-Methode mit der o-Amino-benzaldehyd-Methode. Ordinate: Er- gebnisse mit der Glutamatdehydrogenase-Methode, in AE (Extinktionsabnahme von NADH/Min.); Abszisse:

Ergebnisse der o-Amino-benzaldehyd-Methode, geeicht am O2-Verbrauch in der WARBURG-Apparatur, in AE nach W E R L E et al.7. 1 AE ist die Enzymaktivität, durch die 1 [ilO2/IO Min. verbraucht wird. Weitere Bedingungen s. unter Methodik. Mittelwerte aus 2 Bestimmungen.

Die Ammoniakbestimmung mit der Glutamat- dehydrogenase-Methode ist somit quantitativ zu- verlässig.

Die nach der Glutamatdehydrogenase-Methode er- mittelten Aktivitäten der Diaminoxydase stimmen mit den an Hand der ö-Amino-benzaldehyd-Me- thode ermittelten16 überein (Abb. 5). Wegen der Unbeständigkeit des jeweils entstehenden Aldehyds wird die 0-Amino-benzaldehyd-Methode an Hand des 02-Verbrauchs geeicht, gemessen in der WARBURG-Apparatur. Unter Standardbedingun- gen7 entsprechen nach der Gleichung17:

Molvolumen V = R - T/p z.B.:

5 AE = 5 [Li O2/IO Min.

- 1,97 • 10-8 Mol 02/Ansatz je Min.;

5 AE = 0,024 A£7Min.

= 7,2 • 10-6 Mol NH4®//je Min.

= 2,15 • 10-8 Mol NH4®/Ansatz je Min.

Die Ergebnisse der beiden Methoden stimmen somit gut überein (Differenz 9%).

Diskussion

Bei der relativ großen Zahl von Substraten und Produkten der Diaminoxydasereaktion sind viele Bestimmungsmethoden für das Enzym möglich:

17 H. KOBLET, Physikalische Begriffe in der klinischen Biochemie, S. 213, G. Thieme, Stuttgart 1964.

a) Mit Histamin als Substrat: 1. Biologische Be- stimmung des nach gemessener Reaktionszeit noch vorhandenen Histamins am isolierten Meer- schweinchenileum18 oder am Blutdruck der nar- kotisierten Katze1 9. 2. Fluorometrische, polaro- graphische20 oder spektrophotometrische Bestim- mung2 1.

b) Messung des 02-Verbrauchs gasvolumetrisch in der WARBURG-Apparatur22 oder spektrophoto- metrisch durch Messung der Hämiglobinbildung2 3. c) Mit Cadaverin, Putrescin oder Hexamethylen- diamin als Substrat, Messung der Aldehyde spektro- photometrisch nach Cyclisierung undKondensation mit ö-Amino-benzaldehyd16.

d) Messung des entstehenden Ammoniaks nach

V A N S L Y K E u n d C U L L E N2 4, F O L I N2 5, d e r P A R N A S -

schen Vakuumdestillation26 und Diffusionsanalyse n a c h CONWAY7'2 7.

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e) Messung von Hydroperoxid an Hand der Ent- färbungszeit einer gegebenen Menge Indigo

, photometrische Bestimmung des nach definierter Zeit noch vorhandenen Farbstoffs

, Titration mit KMn0

(vgl. dagegen 1. c.

), durch Farbstoff- entwicklung mit ö-Dianisidin

.

f) Isotopenmethoden mit [

C]Putrescin als Sub- strat

»

.

Von diesen Methoden zur Bestimmung der Diamin- oxydase-Aktivität sind die, welche sich auf die Histaminbestimmung gründen, meist nicht spezi- fisch genug, da Histamin im Gewebe und mög- licherweise auch im Blut noch durch andere Enzyme umgesetzt wird, vor allem durch Histaminnucleotid- bildung (Histamin + NAD® -> Histaminadenin- dinucleotid® + Nicotinsäureamid)

, Histamin-

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transaminase

und Histaminmethyltransferase (EC 2.1.1.8)

. Die 0

-Messungen sind für die Ver- hältnisse im tierischen Gewebe und Blut nicht empfindlich genug, teilweise auch die o-Amino- benzaldehyd-Methode.

Die bisherigen Bestimmungsmethoden auf der Basis der Ammoniakmessung sind zwar sehr empfind- lich

, erfassen aber das Ammoniak nicht selektiv

. Mit der enzymatischen Mikrobestimmung von Ammoniak glauben wir eine Methode zu besitzen, mit der man spezifisch, empfindlich und rasch die Aktivität der Diaminoxydase bestimmen kann. Die Empfindlichkeit ließe sich mit der fluorometrischen Bestimmung von NAD® oder NADH

noch er- heblich erhöhen, so daß sie derjenigen der Isotopen- methoden nahekäme. Die Glutamatdehydrogenase- Methode eignet sich zur Bestimmung der Diamin- oxydase-Aktivität im tierischen Organismus und im Schwangerenserum

sowie zur Aktivitätsbe- stimmung der Monoaminoxydase und Urease

.

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