BVD-2c in Deutschland

Zieldefinition

Bekämpfungsstand

Risikofaktoren und Diskussions-/lösungsansätze Molekulare Epidemiologie

BVD-2c in Deutschland

Horst Schirrmeier

BVD-Bekämpfung in Deutschland – sind wir schon auf der Zielgeraden ?

9. Stendaler Symposium, 6.-8. Mai 2015

Wo oder was ist denn das Ziel?

Begründung BVD-VO

• Reduzierung der kursierenden Virusmenge (PI-Prävalenz)

• Infektionsgefahr senken und unverdächtige Bestände schützen (schon erreicht ?)

neues Ziel - Eradikation

zur Eradikation

BVDV Bekämpfungsstrategie in Deutschland

(„test and cull“) 1. Legislative Basis:

• BVD-Verordnung 2008, in Kraft seit 1.11.2011

• Amtliche Methodensammlung 2. Ziel:

• Reduzierung der PI-Prävalenz (keine Eradikation)

• Etablierung von zertifizierten BVD-unverdächtigen (non PI) Tieren und Betrieben

3. Weg:

• Verpflichtende Untersuchung aller Kälber bis zum 6 Lebensmonat auf BVD- Antigen/genom

• Unverzügliche Abschaffung von Pi-Tieren

• Ausschließlich Handel mit unverdächtigen Tieren

• Verhinderung von Re- und Neuinfektionen durch geeignete zoosanitäre Maßnahmen einschließlich Vakzination (freiwillig)

• Datenmanagement (HI-Tier)

• System der Qualitätssicherung (zugelassenen Testkits, akkreditierte Labore, Ringtest)

(keine Restriktionen für Betriebe mit PI-Tieren – fundamentaler Unterschied zur Schweiz)

PI-Prävalenz und Anzahl detektierter PI-Tiere I/2011 bis I/2015 (quartalsweise)

Jahr Anzahl PI % Prävalenz Betriebe mit PI In %

2011 24 088 0.5 % 7 929 4,69%

2012 12 138 0.24 % 4 220 2,59 %

2013 6 856 0.14 % 2 319 1.42 %

2014 2 985 0.06 % 1 141 0.72%

03/2015 463 0,038% 239

6661

6303 6338

4869 3575

3037 2959 2614

2066

1668 1814 1302

897 776 746 565 463 0,55 0,52 0,53

0,4

0,28 0,25 0,24 0,21

0,17

0,13 0,15

0,11 0,08 0,06 0,06 0,05

0,04 ⁰

0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000

percent

number

PI number prevalence

PI-Prävalenz 2011

0,72%

0,26%

0,36%

0,68%

0,41%

0,46%

0,51%

0,35%

0,29%

0,23%

0,04%

0,16%

0,43%

0,45 % 0,29

%

0,23%

0,14%

0,11%

0,21%

0,25%

0,30%

0,07%

0,15%

0,02%

0,04%

0,14%

PI-Prävalenz 2012

Bezug: Anzahl Geburten

0,24%

0,19%

0,13%

0,11%

0,07%

0,13%

0,11%

0,03%

0,03%

0,11%

0,01%

0,02%

0,09%

PI-Prävalenz 2013

PI-Prävalenz 2014

Risokofaktoren und Lösungsansätze

Langes Verbleiben nach PI-Feststellung

Definition eines Zeitrahmens, z.B. innerhalb von 7 Tagen

Langer möglicher Untersuchungsrahmen (6 Monate)

Reduzierung auf 2 Monate und Reduzierung des Intervalls bei zweimaliger Untersuchung auf 40 Tage

Handel mit nicht untersuchten (männlichen) Kälbern z.B. für Export;

Import

Reduzierung von Ausnahmeregelungen, Privatrechtliche Vereinbarungen

Überbewertung des Status „unverdächtiges Tier“ - Trojaner !!!

Sperre für das Verbringen von tragenden Tieren aus Beständen mit PI- Feststellung, außer serologisch negativ (>150 d)

Unterbewertung des Status „unverdächtiger Bestand“

Zertifizierung vorantreiben, Voraussetzung für den Ausstieg aus der OS- Untersuchung

Handel aus Beständen mit floridem BVD-Geschehen (PI-Tiere)

Handelssperre für festzulegendem Zeitraum

Ungenügendes serologisches Monitoring als Erfolgskontrolle

In BVD-VO aufnehmen (Jungtierfenster, Tankmilch) – Impfung ?

Alte, nicht untersuchte Rinder (z.B.2012: 1265 PI-Tiere älter 12 Monate)

Tierkontakte an Sammelstellen, auf Ausstellungen, Weidehaltung

Defizite in Management, Risikobewußtheit und Biosicherheit

Keine legislativen Lösungen aber Formulierung klarer Zielstellungen und

„awareness“-Schulung

(„BVD control by education and partnership“)

Fehlen europäischer Regelungen wie z.B. für BHV-1 (Directive 64/432/EG)

Derzeit nicht erreichbar; Ausweg: privatrechtliche Vereinbarungen

aber: zunehmende nationale Bemühungen um eigene Programme

Risokofaktoren und Lösungsansätze

Genotypisierung

(5‘NTR)

• BVDV-1b und BVDV-1d am häufigsten (71%)

• 1f: 9%, 1e: 5%, 1h: 3%

• 1g, 1k, 1j: <1%

• BVDV-2: 8%

1a 4%

1b 46%

1d 25%

1e 5%

1f 9%

1h 3%

1j 0,1%

1g

0,2% 1k

0,1%

2a

2% 2c

6%

Genotyping of 726 German BVDV isolates 2008-2015

ELISA oder PCR ? Zahlen für 2014

99,95 99,90 99,93 100,00

38,90

99,71 99,67 99,62 81,12

97,92 100,00 97,34

2,18 0,68 5,61 0,00

72,46

0,05 0,10 0,07 0,00

61,10

0,29 0,33 0,38 18,88

2,08 0,00 2,66

97,82% 99,32 94,39 100,00

27,54

0,0%

20,0%

40,0%

60,0%

80,0%

100,0%

120,0%

ELISA PCR

72,46%

27,54%

ELISA PCR

Zugelassenene Diagnostika (Antigennachweis)

1.

Herdchek BVDV Ag/Serum Plus (IDEXX) serum, plasma, ear notches

E

-basiert,

2. PrioCheck BVDV AG PI-focus (Prionics/Thermo Fisher Scíentific) –

p80-basiert

Nur erlaubt für Ohrstanzproben >90 Tage, Ak sensitiv

SNAP/ POC Test – nicht zugelassen aber einsetzbar zur Selbstkontrolle mit Ausnahmegenehmigung

Zugelassenen Diagnostika (Genomnachweis)

1. DIAVET BVD / MD BioMerieux (formerly ADIAVET)

2. BoVir-SL BVDV real time RT-PCR Kit/ Quidel (formerly AnDiaTec) 3. virella BVDV real time RT-PCR Kit/ Gerbion

4. virotype BVDV BVDV/Qiagen Leipzig 5. BVDV PrioCHECK / Prionics Deutschland 6. LSI VetMAX BVDV 4ALL/Life technologies,

7. ViroReal Kit BVD-Virus/Ingenetix (nur für Serum)

8. RealPCR BVDV RNA Test, IDEXX

Zugelassenen Diagnostika (AK-Nachweis)

Indirect ELISA:

1. IDEXX BVDV Total Ab

2. SVANOVIR BVDV-Ak Screening and confirmation/ Svanova

1. IDEXX BVDV p80 Ab

2. PrioCHECK BVDV Ab, Thermo Fisher

3. SERELISA BVD/MD Antikörper, Synbiotics 4. ID Screen BVD p80, ID vet

5. LSI Vet BVDIL, Life Technologies

Hämorrhagisches Syndrom und Mucosal Disease like Erkrankungen durch akute Infektionen mit BVDV-2c

• Anfang 2013: Schwerste klinische Erkrankungen bei Rindern aller Altersstufen, hochgradige Verluste (bis 60%) in NRW, später auch NS und NL

• Klinik: Pneumonie, Diarrhea, Hämorrhagien, Schleimhautläsionen

• Alle Tiere hatte Status „unverdächtig“

Fotos: Dr. M. Holsteg

• Lange Virämie ( bis 8 Wochen) und Virusausscheidung bei rekonvaleszenten Tieren

• Hinweise auf Carrier (Neuerkrankungen nach Zukauf empfänglicher Tiere in Bestände mit BVDV-2 Historie )

• Isolierung eines Subtype 2c Virus, eigenes Cluster

• Charakteristisches Fluoreszenzbild (sichelförmig, membrangebunden)

Hämorrhagisches Syndrom und Mucosal Disease like Erkrankungen

durch akute Infektionen mit BVDV-2c

5‘ UTR

Phylogenetischer Baum deutscher BVDV-2

Isolaten

schwarz: Isolate NRL

blau: GenBank references rot: aktuelle hochvirulente BVDV-2c

Putativer molekularer Hintergrund der extremen Virulenz

• Duplikation in der p7/NS 2 Region

• Koexistenz von dup- und dup+ Varianten

• Adaptive Mutationen innerhalb der Duplikation Low/moderate

virulent

Jenckel et al, 2014

Highly virulent (duplication, mutation)

Experimentelle Infektion von Kälbern mit BVDV-2c

8 Kälber, 4 Wochen alt,

Intranasale Infektion mit 10 ⁶ KID50, BVDV-2c „NRW 1913-8“

4 Tiere am 5. Tag p. i. immunisiert mit Vacoviron Täglich Blut, Nasentupfer, Maultupfer, Rektaltupfer

Blutstatus

Virusisolierung (Leukozyten und Plasma) AG-ELISA (Plasma)

real time-RT-PCR (Leukozyten, Plasma, Tupfer) Pathologie, Bakteriologie

Ergebnisse (1) - zellulärer Blutstatus

Ausgeprägte Leukopenie und Thrombozytopenie (z.T <20% der Basiswerte)

Ergebnisse (2) – Virusisolierung und Schicksal

PID-1 PID1 PID2 PID3 PID4 PID5 PID6 PID7 PID8 PID9 PID10 PID11 T134

T136 T157 T164 T144 T147 T166 T172

PID-1 PID1 PID2 PID3 PID4 PID5 PID6 PID7 PID8 PID9 PID10 PID11 T134

T136 T157 T164 T144 T147 T166 T172

Leukozyten

Nasentupfer

moribund, euthanasiert verendet

100 % Mortalität

Ergebnisse (3) – Antigen-ELISA Plasma und Nasentupfer

• Rasche Antigenanflutung im Blut 5./6. Tag p.i.

• Starke

Virusausscheidung

Ergebnisse (4) – Nachweis von Virusgenom im Blut

Genomlasten analog PI-Tieren

Pathology

BU: Mannheimia hämolytica

Danke

Foto: C. Illing