R IASON anti - TPO
Coated tube Radioimmunoassay zur Bestimmung von Autoantikörper gegen Thyreoidale Peroxidase in Humanserum
Anleitung
Nur für in-vitro Gebrauch
Produkt von
IASON GmbH Feldkirchner Straße 4 A – 8054 Graz-Seiersberg
Tel.: +43 (0)316 28 43 00 Fax: +43 (0)316 28 43 00-113
Email: office@iason.eu www.iason.eu
REF R01-021-100
Verwendete IFU-Symbole
Symbol Deutsch Symbol Deutsch
In vitro Diagnostikum TRAC 125I TPO-Tracer
Bestellnummer CT Beschichtete
Röhrchen
Hergestellt von BU Puffer
Lagerung bei CAL 1-CAL 6 Standards
radioactive Radioaktive
Komponente
CO 1 CO 2 Kontrollsera
Europäische Konformität
WASH Waschpuffer
Chargenbezeichnung Verwendbar bis
Verwendungszweck Nur für in-vitro Gebrauch.
Auto-Antikörper gegen Thyreoidea-Mikrosomen sind überwiegend gegen das für die Synthese der Schilddrüsenhormone wichtige Enzym Thyreoidale Peroxidase (TPO) gerichtet. TPO ist neben Thyreoglobulin (Tg) und dem TSH-Rezeptor eines der drei bekannten Hauptantigene des Schilddrüsengewebes.
Eine Bestimmung von Autoantikörper gegen TPO ist bei Verdacht auf eine Autoimmunthyreoiditis , bei euthyreoter Struma bzw. zum Beleg der autoimmunen Genese einer Hyperthyreose indiziert.
Messprinzip
Der
R
IASON anti - TPO Test ist ein kompetitiver Assay, basierend auf Röhrchen, die mit monoklonalen Antikörper gegen TPO beschichtet sind. In einem Inkubationsschritt kompetitieren Autoantikörper im Serum mit den immobilisierten Antikörpern um eine gemeinsame Bindungsstelle an dem 125I-markierten Tracer (TPO-Antigen). Nichtgebundener Tracer wird durch einen Waschschritt aus den Röhrchen entfernt. Eine hohe Konzentration an Autoantikörper resultiert gemäß dem kompetitiven Testprinzip in einer verminderten Bindung von Tracer an die Röhrchenwand. Die Konzentration von Autoantikörper im Serum ist somit umgekehrt proportional zur verbleibenden Radioaktivität im Röhrchen.Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen
Der RIASON anti - TPO Kit ist nur zur in-vitro Diagnostik und nicht zur Anwendung bei Mensch und Tier geeignet. Dieses Produkt darf nur exakt wie in der mitgelieferten Anleitung beschrieben, eingesetzt werden. IASON kann nicht für einen eventuellen Verlust oder Schaden, (sofern nicht gesetzlich etwas anderes festgelegt ist), haftbar gemacht werden, der durch Nichtbeachtung der Instruktionen entsteht.
VORSICHT: Dieser Kit enthält Material menschlichen und/oder tierischen Ursprungs.
Die Kitreagenzien sind so zu handhaben, als ob eine Übertragung einer Infektionskrankheit möglich sei. Unser Produzent prüft humanes Rohmaterial, dass in diesem Kit zum Einsatz kommt, auf HBsAg, HCV und HIV-Antikörper. Da es kein diagnostisches Verfahren gibt, welches derartige Erreger mit 100%iger Sicherheit ausschließt, sind die entsprechenden Komponenten wie potentiell infektiöse Proben handzuhaben.
Angemessene Vorsichtsmaßnahmen und die Regeln der guten Laborpraxis, sollten beim Gebrauch und der Entsorgung angewendet werden. Die Entsorgung der Kitreagenzien hat nach den örtlichen Vorschriften zu erfolgen.
Beschädigte Testkits
Im Falle einer starken Beschädigung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma IASON in schriftlicher Form spätestens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden. Stark beschädigte Einzelkomponenten sollten nicht für den Testlauf verwendet werden. Sie müssen gelagert werden, bis eine endgültige Lösung gefunden wurde. Danach sollten Sie gemäß den offiziellen Richtlinien entsorgt werden.
Haltbarkeit und Lagerung der Reagenzien
Dieser Kit ist bei vorschriftsmäßiger Lagerung bis zum Ablauf des Verfalldatums stabil. Nach Erhalt sind alle Reagenzien bei 2-8C zu lagern.
Lagerung und Vorbereitung der Patientenproben
Die Proben sollen so rasch wie möglich nach der Abnahme getrennt und analysiert oder bei bzw. unter –20°C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist
Autoantikörper Aktivität führen.
Keine lipämischen und stark hämolytischen Patientenproben verwenden.
Kein Plasma verwenden.
Wenn erforderlich, die Patientenproben bei Raumtemperatur auftauen lassen und gut vortexen. Serum sollte vor dem Test noch einmal zentrifugiert werden, um die Partikel zu entfernen (5 min bei 10 000 g). Bitte diesen Schritt nicht auslassen, wenn die Proben trüb sind oder Partikel haben.
Kitbestandteile
Alle Reagenzien 1 – 6 vor Gebrauch auf Raumtemperatur (20-25°C) bringen.
1. TRAC: 125I hTPO-Tracer; 2 Fläschchen; lyophilisiert, max. 41 kBq radioactive
mit je 10 mL BU rekonstituieren, danach vollständig in das entsprechende BU-Fläschchen überführen, um ein Endvolumen von 14 mL zu haben.
Nach Rekonstitution bei 2-8°C bis zu 1 Monat haltbar.
2. CT: 2x50 Röhrchen; beschichtet mit TPO Antikörper. Nicht benötigte Röhrchen in die originale Folienverpackung zurückgeben und zukleben.
Aufbewahren bei 2-8°C und innerhalb 1 Monat verbrauchen.
3. BU: Puffer; 2x14 mL, gebrauchsfertig; zum Rekonstituieren von TRAC.
4. CAL 1- CAL 6: Standards; 0; 8; 40; 200; 1000; 7500 U/mL; (Einheiten sind arbiträre IASON Einheiten); je 0,2 mL, gebrauchsfertig.
5. CO 1 CO 2: Kontrollen; je 0,2 mL, gebrauchsfertig; Konzentration siehe QC- Zertifikat.
6. WASH: Waschlösung; 20 mL; konzentriert; vor Gebrauch 1:25 mit Aqua dest.
verdünnen (z.B. 20mL WASH auf 500 mL Aqua dest. bringen).
Erforderliches Zubehör
Pipetten für 20 µL und 250 µL sowie für 2 mL
Aqua dest.
Geeignetes Rack für die Teströhrchen
Unbeschichtete Röhrchen für die Totalaktivität
Horizontalschüttler
Vortexer
Counter für 125I
Testdurchführung
Allgemeine Hinweise
1. Alle Reagenzien und Proben müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchmischt werden. Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden.
2. Wenn die Testdurchführung einmal begonnen wurde, muss sie ohne Unterbrechung zu Ende geführt werden.
3. Für jeden Standard, jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden, um Verschleppungen zu vermeiden.
4. Jeder Lauf muss eine Standardkurve und die Kontrollproben beinhalten.
Testdurchführung
Die Anzahl der erforderlichen Röhrchen berechnen:CAL ,CO, Patientenproben, 2 unbeschichtete Röhrchen für die Totalaktivität. Es wird empfohlen, dass alle Proben doppelt bestimmt werden. Alle Reagenzien inklusive der erforderlichen Anzahl der Röhrchen auf Raumtemperatur bringen.
1. 20 µL CAL, CO sowie Serumproben pipettieren.
2. 250 µL TRAC pipettieren. Totalaktivität nicht vergessen.
Alle Röhrchen gut vortexen
3. 90 Minuten bei Raumtemperatur (20-25°C) auf einem Schüttler (ca. 350 rpm) inkubieren.
4. 2 mL WASH in jedes Röhrchen pipettieren (außer Totalaktivität) und Flüssigkeit absaugen oder dekantieren.
5. Jedes Röhrchen mindestens 1 Minute im RIA-Counter messen.
Ergebnisberechnung
Setzen Sie die cpm von CAL 1 (Konz. 0 U/mL) als 0-Bindung ein und drücken Sie die cpm von CAL 2 bis CAL 6 in % der 0-Bindung aus. Tragen Sie dieses Verhältnis (B/Bo x 100 ) gegen die Konzentration der Standards auf.
Für die automatisierte Auswertung wird ein Spline-Algorhythmus empfohlen.
Proben mit hoher TPOAb-Konzentration können 1:10 mit CAL 1 verdünnt werden. Weitere Verdünnungen können von dieser 10x Verdünnung vorbereitet werden. Einige Seren lassen sich nicht linear verdünnen.
Assay Beispieldaten
Typische Ergebnisse der
R
IASON anti-TPO Standards:Probe Mittelwert %B/T %B/Bo
Totals 40556 100 -
CAL 1 = 0 U/mL 26508 65.4 100
CAL 2 = 8 U/mL 24318 60.0 91.7
CAL 3 = 40 U/mL 19581 48.3 73.9
CAL 4 = 200 U/mL 7770 19.2 29.4
CAL 5 = 1000 U/mL 2345 5.8 8.9
CAL 6 = 7500 U/mL 490 1.2 1.8
CO 1 13320 32.8 50.2
CO 2 6489 16.0 24.5
Diese Daten dienen nur zur Illustration und sind nicht für die Berechnung der Probenergebnisse heranzuziehen.
Typische Eichkurve
Eichkurve
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000
0,1 20 40 200 1000 7500
Konzentration
cpm
Diese Eichkurve dient nur als Beispiel zur Illustration.
Erwartete Werte
IAU*
U/mL Negativ
Grauzone
< 40 40 - 50 Positiv > 50
* IASON arbiträre Einheiten
Es wird empfohlen, dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt. Eine klinische Diagnose sollte nicht allein mit Hilfe der Ergebnisse einer einzelnen diagnostischen Methode erhoben werden. Die Ergebnisse sollten mit anderen klinischen Befunden und Observationen korrelieren.
Qualitätskontrolle
Es wird empfohlen, die Kontrollproben gemäß den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen.
Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag-zu-Tag Überprüfung der Ergebnisse erzielt. Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden.
Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC-Labors sind im QC- Zertifikat, das dem Kit beiliegt, aufgeführt. Die im QC-Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden.
Es wird ebenfalls empfohlen, an nationalen oder internationalen Qualitätssicherungs- Programmen teilzunehmen, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern.
Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll-Werten und Trends angewendet werden. Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials übereinstimmen, sollten die Patientenergebnisse als ungültig eingestuft werden.
In diesem Fall überprüfen Sie bitte die folgenden Bereiche: Pipetten und Zeitnehmer, Gamma Counter, Verfallsdatum der Reagenzien, Lagerungs- und Inkubationsbedingungen, Absaug- und Waschmethode.
Sollten Sie nach Überprüfung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben, setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma IASON GmbH in Verbindung.
Klinische Spezifität:
50 gesunde Blutspender wurden mit dem RIASON anti - TPO getestet. Alle 50 Spender (100%) wurden negativ auf TPOAb getestet.
Klinische Sensitivität:
Proben von 50 Patienten, die mit Hashimoto-Thyreoditis oder Mobus Basedow, diagnostiziert worden, wurden mit dem RIASON anti - TPO untersucht. Davon 35 (70%) wurden positiv auf TPOAb getestet.
Untere Nachweisgrenze
Der negative Kalibrator wurde 20-mal getestet und der Mittelwert sowie die Standardabweichung wurden berechnet. Die untere Nachweisgrenze bei -2 Standardabweichungen betrug 2,85 U/mL.
Präzision
Klinische Genauigkeit
Die Analyse der Patientenseren mit anderen Autoimmunerkrankungen außer Hashimoto Thyreoiditis oder Morbus Basedow ergab folgende Ergebnisse:
30% (n=10) von Proben positiv getestet auf GAD Antikörper, 100% (n=4) von Proben positiv getestet auf 21-OH Antikörper, 44% (n=27) von Proben positiv getestet auf Acetylcholin-Rezeptor und 10% (n=10) von Seren positiv getestet auf Rheumafaktoren wurden auch positiv auf TPOAb getestet mit RIASON anti - TPO.
Interferenzen:
Es konnten keine Interferenzen für nachfolgende aufgelistete Substanzen festgestellt werden:
Hämoglobin bei 5 mg/mL;
Bilirubin bei 20 mg/dL;
Intralipid bis zu 1000 mg/dL;
Grenzen des Tests
Als Voraussetzung für zuverlässige und reproduzierbare Ergebnisse soll das Assayverfahren erst nach vollständigem Durchlesen und Verstehen der Packungsbeilagen und in Befolgung guter Laborpraktiken durchgeführt werden.
Jede unsachgemäße Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests können die Ergebnisse beeinflussen.
Rechtliche Grundlagen
Zuverlässigkeit der Ergebnisse
Der Test muss exakt gemäß der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden.
Darüber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP (Good Intraassay Präzision (n=25) Interassay Präzision (n=20)
Probe Mittelwert
[U/mL] VK [%] Probe Mittelwert
[U/mL] VK [%]
A 107 10.1 1 122 6.2
B 186 10.1 2 719 6.0
Laboratory Practice) oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten. Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien. Es ist sehr wichtig, bei der Testdurchführung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur Überprüfung der Genauigkeit und Präzision mitlaufen zu lassen. Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen, und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen für diesen Assay erfüllen. Wenn Sie bezüglich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben, setzen Sie sich bitte mit der Firma IASON GmbH in Verbindung.
Therapeutische Konsequenzen
Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen, selbst dann nicht, wenn alle Testergebnisse mit den in
„Zuverlässigkeit der Ergebnisse“ genannten Voraussetzungen übereinstimmen.
Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten.
Nur in Fällen, in denen die Laborergebnisse in akzeptabler Übereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen, sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden. Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage für die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen.
Haftung
Jegliche Veränderungen des Testkits und/oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen, können die gewünschten Ergebnisse und die Gültigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen. Solche Veränderungen und/oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzansprüche zur Folge. Reklamationen, die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gemäß Punkt
„Therapeutische Konsequenzen“ erfolgen, sind ebenfalls abzuweisen. Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschränkt. Jegliche Schäden, die während des Transports am Kit entstanden sind, unterliegen nicht der Haftung des Herstellers.
Literatur
M. Horimoto et al. Production and characterisation of a human monoclonal thyroid peroxidase autoantibody. Autoimmunity 1992 14: 1-7;
Rees Smith B. Thyroid autoantibodies. Scand. J. Clin. Lab. Invest. (2001) 61 (Suppl. 235):45-52
Arbeitsschema
Bringen Sie alle Reagenzien, vor dem Start, auf Raumtemperatur (20-25°C)
1. Pipettieren CAL 1- CAL 6 20 µL
CO 1 CO 2 20 µL
Probe 20 µL 2. Pipettieren TRAC 250µL
Alle Röhrchen gut vortexen
3. Inkubieren 90 Minuten bei Raumtemperatur (20-25°C) auf einem Schüttler (ca. 350 Upm)
4. Pipettieren WASH 2 mL
Flüssigkeit absaugen bzw. dekantieren
5. Messen Mind. 1 Minute
Röhrchen zur Messung der Totalaktivität berücksichtigen
Auswertung: Spline Algorithmus
Erwartete Werte
IAU*
U/mL Negativ
Grauzone
< 40 40 - 50 Positiv > 50
* IASON arbiträre Einheiten
RIASON anti - TPO
Coated tube radioimmunoassay for the quantitative determination of autoantibodies against thyroid peroxidase in human serum
Kit instruction
For in-vitro use only Product of
IASON GmbH Feldkirchner Straße 4 A – 8054 Graz-Seiersberg
Tel.: +43 (0)316 28 43 00 Fax: +43 (0)316 28 43 00-113
Email: office@iason.eu www.iason.eu
REF R01-021-100
Symbol English Symbol English In vitro diagnostic
device
BU Assay diluent
Order number CAL 1-CAL 6 Calibrators
Product of TRAC 125I-TPO-Tracer
Storage CO 1 CO 2 Control sera
Batch code WASH Wash buffer
concentrate
European Conformity CT Coated tubes
Expiry date radioactive Radioactive compound
Intended Use
For in-vitro use only.
The RIASON anti-TPO kit is a coated tube radioimmunoassay intended for the quantitative determination of autoantibodies against thyroid peroxidase (TPO) in human serum. Results are to be used in conjunction with other clinical and laboratory data to assist the clinician in the assessment of thyroid dysfunction.
Assay principle
Autoantibodies to the thyroid microsomal component, often referred to as the microsomal antigen, are usually found in patients with the thyroid autoimmune diseases Hashimoto´s and Grave´s disease. Recent studies have shown that microsomal antigen is the enzyme thyroid peroxidase (TPO).
The RIASON anti-TPO kit is a competitive immunoassay using polystyrene tubes coated with monoclonal TPO antibodies. In the assay, TPO autoantibodies compete with the monoclonal antibodies immobilised on the tube for a common binding site of the 125I-labelled TPO antigen. On completion of the incubation period, any unbound
125I-labelled TPO is removed from the tube by a wash step. High concentrations of TPO antibody in the measured sample result in reduced binding by the immobilised antibody. Hence the antibody concentration of the sample is inversely proportional to the radioactivity bound to the tube.
Warnings and precautions
The RIASON anti-TPO kit is for in vitro diagnostic use only and is not for internal use in humans or animals. This product must be used strictly in accordance with the instructions set out in the Package Insert. IASON will not be held responsible for any loss or damage (except as required by statute) caused, arising out of non-compliance with the instructions provided.
CAUTION: this kit contains material of human and/or animal origin. Handle kit reagents as if capable of transmitting an infectious agent.
Source material from Human origin which is used in this kit was tested and found negative for HbsAG and HIV as well as for HCV antibodies. However, since there is no diagnostic procedure that excludes these agents with 100 percent certainty all components should be handled as potentially hazardous material.
Appropriate precautions and good laboratory practices must be used in the storage, handling and disposal of the kit reagents.
Damaged test kit
In case of serious damage to the test kit or components, the company IASON must be notified in writing at least one week after receiving the kit. Severely damaged single components should not be used for the test run. They must be stored until a final solution has been found. After that they should be disposed in accordance with official regulations.
Shelf life and storage of reagents
This kit is stable until the stated expiry date if stored as specified.
Upon receipt, store all reagents at 2-8C.
Storage and preparation of serum samples
Sera to be analysed should be assayed soon after separation or stored, preferably in aliquots, at or below -20°C. Repeated freezing and thawing or increases in storage
antibody activity.
Do not use lipaemic or grossly haemolysed serum samples.
Do not use plasma in the assay.
When required, thaw test sera at room temperature and mix gently to ensure homogeneity.
Centrifuge the sera prior to assay (preferably for 5 min. at 10.000 g in a microfuge) to remove any particulate matter. Please do not omit this centrifugation step if sera are cloudy or contain particulates.
Materials provided
Allow all reagents 1-6 to reach room temperature (20-25°C) before use.
1. 125I-TPO-TRAC (2 vials); freeze dried; max. 41 kBq radioactive
reconstitute each vial with 10 mL BU and transfer this to the remaining BU so that there is a final volume of 14 mL. Once reconstituted, store at 2-8°C for up to 1 month;
2. CT Coated tubes (2 x 50 tubes coated with anti-TPO monoclonal antibody). After opening a bag of tubes keep any unused tubes in the original foil bag. Put them in the plastic bag with the desiccant and store at 2-8°C for up to 1 month;
3. BU Assay diluent (2 x 14 mL); ready to use;
for reconstitution of TRAC.
4. CAL 1 – CAL 6 Calibrators: (0.2 mL each; coloured blue); ready to use.
Units are arbitrary IASON units;
5. CO 1 and CO 2 Control sera 1 and 2 (0.2 mL; coloured blue); ready to use.
Refer to package insert for concentration;
6. WASH Concentrated wash buffer (20 mL);
Dilute 1:25 with distilled water before use (e.g. 20 mL concentrated wash buffer made up to 500 mL with distilled water);
Materials required but not provided in the kit:
Pipettes capable of dispensing 20 µL, 250 µL and 2 mL
Distilled water
Vortex mixer
Suitable rack for assay tubes
Uncoated tubes for total counts
Orbital shaker
Counter for 125I
Assay procedure
General remarks
1. All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use. All reagents must be mixed without foaming.
2. Once the test has been started, all steps should be completed without interruption.
3. Use new disposal plastic pipette tips for each standard, control or sample in order to avoid cross contamination
4. Each assay run should must include a standard curve and control samples.
Test procedure
Calculate the number of tubes needed for the assay. Allow all the reagents supplied including the tubes to reach room temperature. All test sera, controls, and calibrators should be assayed in duplicate. Two uncoated tubes should be used for total counts measurement.
1. Pipette 20 µL of CAL 1- CAL 6, CO 1 CO 2 and test sera into the tubes.
2. Pipette 250 µL of reconstituted TRAC into each tube including the tubes for total counts and put the total count tubes aside.
3. Mix each tube gently on a vortex mixer.
4. Incubate for 90 min. at room temperature (20-25°C) on a shaker (approx. 350 rpm).
5. Add 2 mL WASH to each tube, then aspirate or decant.
6. Count each tube including the total count tubes for 125I for at least 1 minute.
Calculation of results
Draw a standard curve by plotting the counts per minute (cpm) of each standard against it’s concentration. Read off the values of the test samples.
Alternative data reduction techniques may be employed but users should confirm that the selected curve fit is appropriate and gives acceptable results.
Spline curve fits are recommended.
Samples with high TPOAb concentrations can be diluted in TPOAb negative human serum. For example, 10 µL of sample + 90 µL diluent to give a 10x dilution. Other dilutions can be prepared from a 10x dilution or otherwise as appropriate. Some sera will not dilute in a linear way.
Sample assay data
Typical results obtained with RIASON anti-TPO calibrators:
Probe Mean count %B/T %B/Bo
Totals 40556 100 -
CAL 1 = 0 U/mL 26508 65.4 100
CAL 2 = 8 U/mL 24318 60.0 91.7
CAL 3 = 40 U/mL 19581 48.3 73.9
CAL 4 = 200 U/mL 7770 19.2 29.4
CAL 5 = 1000 U/mL 2345 5.8 8.9
CAL 6 = 7500 U/mL 490 1.2 1.8
CO 1 13320 32.8 50.2
CO 2 6489 16.0 24.5
This data is for illustration only and must not be used for the calculation of any sample result.
Typical calibration curve
Eichkurve
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000
0,1 20 40 200 1000 7500
Konzentration
cpm
This sample calibration curve is for illustration only.
Calibration curve
Concentration
Expected Values
IAU*
U/mL Negative
Grey zone
< 40 40 - 50 Positive > 50
*IASON arbitrary units
Each laboratory is recommended to determine ranges for their local population. The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences. The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests.
Quality control
The regular use of control samples at several analyte levels is advised to ensure day- to-day validity of results. Controls should be tested as unknowns. Quality Control charts should be maintained to follow the assay performance.
Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve. A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance.
It is recommended to use control samples according to state and federal regulations.
The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results. Use controls at both normal and pathological levels.
The controls and the corresponding results of the QC-Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit. The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results.
It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results.
Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends. If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid. In this case, please check the following technical areas: Pipetting and timing devices; gamma counter, expiration dates of reagents, storage and incubation conditions, aspiration and washing methods.
After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or IASON directly.
Test characteristics Clinical specificity
Sera from 50 individual healthy blood donors were assayed in the
R
IASON anti – TPO kit. 50 (100%) were identified as being negative for TPOAb.Clinical sensitivity
Sear from 50 patients diagnosed with Hashimoto’s Thyroiditis or Graves‘ Disease were assayed with the
R
IASON anti – TPO kit. 35 (70%) were identified as being positive for TPOAb.Lower detection limit
The zero calibrator was assayed 20 times and the mean and standard deviation calculated. The lower detection limit at -2 standard deviations was 2.85 U/mL.
Precision
Intra assay cv (n = 25) Inter assay cv (n = 20) Sample Mean
[U/mL] CV [%] Sample
Mean
[U/mL] CV [%]
A 107 10.1 1 122 6.2
B 186 10.1 2 719 6.0
Clinical accuracy
Analysis of sera from patients with autoimmune diseases other than Hashimoto’s Thyroiditis or Graves’ Disease indicated that 30% (n=10) of sera positive for antibodies to GAD, 100% (n=4) of sera positive for antibodies to 21-OH, 44% (n=27) of sera positive for acetylcholine receptor and 10% (n=10) of sera positive for rheumatoid factor were positive for TPOAb in the
R
IASON anti - TPO kit.Interferences
No interference was observed when samples were spiked with the following materials:
haemoglobin at 5 mg/mL
bilirubin at 20 mg/dL
intralipid up to 3000 mg/dl
Legal aspects
Reliability of results
The test must be performed exactly as per the manufacturer’s instructions for use.
Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable national standards and/or laws. This is especially relevant for the use of control reagents. It is important to always include, within the test procedure, a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test.
The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications. In case of any doubt or concern please contact IASON.
Therapeutic consequences
Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under Reliability of Results.
Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient.
Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived.
The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences.
Liability
Any modification of the test kit and/or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test. Such modification and/or exchanges invalidate any claim for replacement.
Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point Therapeutic Consequences are also invalid. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer.
Literature
M. Horimoto et al. Production and characterisation of a human monoclonal thyroid peroxidase autoantibody. Autoimmunity 1992 14: 1-7;
Rees Smith B. Thyroid autoantibodies. Scand. J. Clin. Lab. Invest. (2001) 61 (Suppl. 235):45-52
Pipetting scheme
Allow all reagents to reach room temperature (20-25°C) before use- 1. Pipetting CAL 1 – CAL 6
20 µL
CO 1 CO 2 20 µL
Samples 20 µL 2. Pipetting. TRAC 250 µL
Vortex all tubes
3. Incubation 90 min. at room temperature (20-25°C) on a shaker
4. Washing Add 2 mL WASH;
Aspirate or decant 5. Reading 1-2 minutes; 125I-Reading
Don´t forget the total count tubes
Expected Values
IAU*
U/mL Negative
Grey zone
< 40 40 - 50 Positive > 50
*IASON arbitrary units
