Plasmide

Stamm Genotyp/Beschreibung Referenz YHUM2516/

YHUM2517

YHUM1692 mit PTEC1-TCS-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3

BHUM2892 (PTEC1-TCS-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3) wurde mit EcoRV linearisiert und über homologe Rekombination am URA3 Locus in YHUM1692 integriert. Die korrekte Integration wurde mittels Southern Hybridisierung unter Verwendung einer CFP-spezifischen Sonde überprüft.

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YHUM2518/

YHUM2519

YHUM1692 mit PTEC1-tcs-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3

BHUM2893 (PTEC1-tcs-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3) wurde mit EcoRV linearisiert und über homologe Rekombination am URA3 Locus in YHUM1692 integriert. Die korrekte Integration wurde mittels Southern Hybridisierung unter Verwendung einer CFP-spezifischen Sonde überprüft.

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YHUM2520/

YHUM2521

YHUM0639 mit PTEC1-TCS-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3

BHUM2892 (PTEC1-TCS-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3) wurde mit EcoRV linearisiert und über homologe Rekombination am URA3 Locus in YHUM0639 integriert. Die korrekte Integration wurde mittels Southern Hybridisierung unter Verwendung einer CFP-spezifischen Sonde überprüft.

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YHUM2522/

YHUM2523

YHUM0639 mit PTEC1-tcs-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3

BHUM2893 (PTEC1-tcs-PRE-3 × mTurquoise 2*-ADH1(T)::URA3) wurde mit EcoRV linearisiert und über homologe Rekombination am URA3 Locus in YHUM0639 integriert. Die korrekte Integration wurde mittels Southern Hybridisierung unter Verwendung einer CFP-spezifischen Sonde überprüft.

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Plasmid Genotyp/Beschreibung Rückgrat Referenz B2445

(YCplac33)

URA3, Amp^R, CEN YCplac33 (Gietz and Sugino, 1988)

B2797 (pRS413)

HIS3, Amp^R, CEN pRS413 (Sikorski and Hieter, 1989)

B3445 (pMAL-c2)

Plasmid für die Expression von MBP Fusionsproteinen

pMAL-c2 NEW ENGLAND

BIOLABS INC.

BHUM0030 PTEC1-TEC1, URA3, Amp^R, 2 μm pRS202 (Mösch and Fink, 1997)

BHUM0388 MBP-TEC1-FLAG, Amp^R pMAL-c2 (Madhani and Fink,

1997)

BHUM0389 MBP-STE12-FLAG, Amp^R pMAL-c2 (Madhani and Fink,

1997)

BHUM1159 PGAL-HO, URA3, Amp^R, CEN (Herskowitz and

Jensen, 1991) BHUM1424 DON1^{U. maydis}, Amp^R

Eco47IR-basierter Suizidvektor

pJET1.2 LIFE

TECHNOLOGIES

GMBH

BHUM1616 PTEC1-TCS-PRE-TEC1-TTEC1, LEU2, Amp^R YIplac128 (Heise et al., 2010) BHUM1721 FRE-PCYC1-UbiY-ǻk-CFP-TADH, URA3, Amp^R YIplac211 Stammsammlung

AG Mösch BHUM1815

(pCM252)

PCMV-rtTA-TADH-tetO-Box-Polylinker-TCYC1, TRP1, Amp^R, CEN

YCplac22 (Bellí et al., 1998)

BHUM2022 BglII-PTEC-tcs-PRE-SalI, Amp^R

Ein Teil des TEC1 Promotors (−1 bis −579), mit mutierten TCS-Elementen, wurde durch LIFE TECHNOLOGIES GMBH synthetisiert. Am 5‘ Ende des Fragments befindet sich eine BglII Schnittstelle und am 3‘ Ende ein ATG gefolgt von einer SalI Schnittstelle. Das Fragment wurde vom Hersteller pMA-T kloniert.

pMA-T diese Arbeit

BHUM2023 BglII-PTEC-TCS-pre-SalI, Amp^R

Ein Teil des TEC1 Promotors (−1 bis −579), mit mutierten PREs, wurde durch LIFE TECHNOLOGIES GMBH synthetisiert. Am 5‘ Ende des Fragments befindet sich eine BglII Schnittstelle und am 3‘ Ende ein ATG gefolgt von einer SalI Schnittstelle. Das Fragment wurde vom Hersteller pMA-T kloniert.

pMA-T diese Arbeit

Plasmid Genotyp/Beschreibung Rückgrat Referenz BHUM2024 BglII-PTEC-tcs-pre-SalI, Amp^R

Ein Teil des TEC1 Promotors (−1 bis −579), mit mutierten TCS- und PRE-Elementen, wurde durch LIFE TECHNOLOGIES GMBH synthetisiert. Am 5‘

Ende des Fragments befindet sich eine BglII Schnittstelle und am 3‘ Ende ein ATG gefolgt von einer SalI Schnittstelle. Das Fragment wurde vom Hersteller pMA-T kloniert.

pMA-T diese Arbeit

BHUM2053 PTEC1-TCS-PRE-TEC1-TTEC1, LEU2, Amp^R

In BHUM1616 wurde mittels sequenzspezifischer Mutagenese mit den Primern TEC1(P)-BglII-fw und TEC1(P)-BglII-rev an Position −581 des TEC1 Promotors das C durch ein T ersetzt, um eine BglII Schnittstelle zu generieren.

YIplac128 diese Arbeit

BHUM2054 PTEC1-tcs-PRE-TEC1-TTEC1, LEU2, Amp^R

Das BglII-PTEC-tcs-PRE-SalI Fragment wurde durch Restriktion mit BglII und SalI aus BHUM2022 geschnitten und in BglII/SalI geschnittenes BHUM2053 ligiert.

YIplac128 diese Arbeit

BHUM2055 PTEC1-TCS-pre-TEC1-TTEC1, LEU2, Amp^R

Das BglII-PTEC-TCS-pre-SalI Fragment wurde durch Restriktion mit BglII und SalI aus BHUM2023 geschnitten und in BglII/SalI geschnittenes BHUM2053 ligiert.

YIplac128 diese Arbeit

BHUM2056 PTEC1-tcs-pre-TEC1-TTEC1, LEU2, Amp^R

Das BglII-PTEC-tcs-pre-SalI Fragment wurde durch Restriktion mit BglII und SalI aus BHUM2024 geschnitten und in BglII/SalI geschnittenes BHUM2053 ligiert.

YIplac128 diese Arbeit

BHUM2308 BglII-PTEC-TCS-pre-tetO1-SalI, Amp^R

Ein Teil des TEC1 Promotors (−1 bis −579) wurde durch LIFE TECHNOLOGIES GMBHsynthetisiert. In diesem Promotor-Fragment sind die PRE-Elemente mutiert und in das PRE an Position −153 bis −159 wurde eine tet Operatorsequenz (TCCCTATCAGTGATAGAGA) inseriert. Am 5‘

Ende des Fragments befindet sich eine BglII Schnittstelle und am 3‘ Ende ein ATG gefolgt von einer SalI Schnittstelle. Das Fragment wurde vom Hersteller pMA-T kloniert.

pMA-T diese Arbeit

BHUM2344 PTEC1-TCS-pre-tetO1-TEC1-TTEC1, LEU2, Amp^R Das BglII-PTEC-TCS-pre-tetO1-SalI Fragment wurde durch Restriktion mit BglII und SalI aus BHUM2308 geschnitten und in BglII/SalI geschnittenes BHUM2054 ligiert.

YIplac128 diese Arbeit

Plasmid Genotyp/Beschreibung Rückgrat Referenz BHUM2427 PTEC1-TCS-PRE-UbiY-ǻk-CFP-TADH, URA3, Amp^R

Der TEC1 Promotor, inklusive der am 5’ Ende gelegenen PstI Schnittstelle, des ATGs und der darauf folgenden SalI Schnittstelle, wurde mit den Oligonukleotiden TEC1(P)-Acc65I-fw und TEC1(P)-NotI-rev3 aus BHUM2053 amplifiziert.

Hierbei wurde am 5‘ Ende eine Acc65I Schnittstelle und am 3‘ Ende eine NotI Schnittstelle eingefügt.

Das Fragment wurde in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM1721 ligiert.

YIplac211 (Garben, 2013)

BHUM2428 PTEC1-tcs-PRE- UbiY-ǻk-CFP-TADH, URA3, Amp^R Der TEC1 Promotor mit den mutierten TCS-Elementen, inklusive der am 5’ Ende gelegenen PstI Schnittstelle, des ATGs und der darauf folgenden SalI Schnittstelle, wurde mit den Oligonukleotiden TEC1(P)-Acc65I-fw und TEC1(P)-NotI-rev3 aus BHUM2054 amplifiziert. Hierbei wurde am 5‘ Ende eine Acc65I Schnittstelle und am 3‘ Ende eine NotI Schnittstelle eingefügt. Das Fragment wurde in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM1721 ligiert.

YIplac211 (Garben, 2013)

BHUM2429 PTEC1-TCS-pre- UbiY-ǻk-CFP-TADH, URA3, Amp^R Der TEC1 Promotor mit den mutierten PREs, inklusive der am 5’ Ende gelegenen PstI Schnittstelle, des ATGs und der darauf folgenden SalI Schnittstelle, wurde mit den Oligonukleotiden TEC1(P)-Acc65I-fw und TEC1(P)-NotI-rev3 aus BHUM2055 amplifiziert. Hierbei wurde am 5‘ Ende eine Acc65I Schnittstelle und am 3‘ Ende eine NotI Schnittstelle eingefügt. Das Fragment wurde in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM1721 ligiert.

YIplac211 (Garben, 2013)

BHUM2430 PTEC1-tcs-pre- UbiY-ǻk-CFP-TADH, URA3, Amp^R Der TEC1 Promotor mit den mutierten TCS-Elementen und PREs, inklusive der am 5’ Ende gelegenen PstI Schnittstelle, des ATGs und der darauf folgenden SalI Schnittstelle, wurde mit den Oligonukleotiden TEC1(P)-Acc65I-fw und TEC1(P)-NotI-rev3 aus BHUM2056 amplifiziert.

Hierbei wurde am 5‘ Ende eine Acc65I Schnittstelle und am 3‘ Ende eine NotI Schnittstelle eingefügt.

Das Fragment wurde in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM1721 ligiert.

YIplac211 (Garben, 2013)

BHUM2832 PSTE12 in pJET1.2

Der STE12 Promotor wurde mit den Oligonukleotiden PstI-fw und PSTE12-XbaI-rev aus YHUM0216 amplifiziert. Hierbei wurde am 5‘ Ende eine PstI Schnittstelle und am 3‘

Ende eine XbaI Schnittstelle eingefügt. Das Fragment wurde „blunt-end“ in BHUM1424 (pJET1.2) ligiert.

pJET1.2 diese Arbeit

BHUM2833 PSTE12 in pJET1.2

In BHUM2832 wurde mittels sequenzspezifischer Mutagenese mit den Primern PSTE12-XbaIMut-fw und PSTE12-XbaIMut-rev die Sequenz TCTAGA der XbaI Schnittstelle zu TCTGGA mutiert, welche nicht mehr durch XbaI erkannt werden kann.

pJET1.2 diese Arbeit

Plasmid Genotyp/Beschreibung Rückgrat Referenz BHUM2835 PCMV-rtTA-TADH, TRP1, Amp^R

Der CMV Promotor und der rtTA ORF wurden mit den Oligonukleotiden PstI-fw und rtTA-EcoRI-rev aus BHUM1815 amplifiziert. Hierbei wurde am 5‘ Ende eine PstI Schnittstelle und am 3‘

Ende eine EcoRI Schnittstelle eingefügt. Das Fragment wurde in mit PstI und EcoRI geschnittenes B2441 ligiert.

YIplac204 diese Arbeit

BHUM2837 PSTE12-rtTA-TADH, TRP1, Amp^R

Der STE12 Promotor wurde durch Restriktion mit PstI und XbaI aus BHUM2833 geschnitten und in mit PstI und XbaI geschnittenes BHUM2835 ligiert.

YIplac204 diese Arbeit

BHUM2847 FRE-PCYC1-UbiY-ǻk-3 × mTurquoise2-TADH, URA3, Amp^R

YIplac211 Stammsammlung AG Mösch

BHUM2892 PTEC1-TCS-PRE-UbiY-ǻk-3 × mTurquoise2-TADH, URA3, Amp^R

Der TEC1 Promotor wurde durch Restriktion mit Acc65I und NotI aus BHUM2427 geschnitten und in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM2847 ligiert.

YIplac211 diese Arbeit

BHUM2893 PTEC1-tcs-PRE-UbiY-ǻk-3 × mTurquoise2-TADH, URA3, Amp^R

Der TEC1 Promotor wurde durch Restriktion mit Acc65I und NotI aus BHUM2428 geschnitten und in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM2847 ligiert.

YIplac211 diese Arbeit

BHUM2894 PTEC1-TCS-pre-UbiY-ǻk-3 × mTurquoise2-TADH, URA3, Amp^R

Der TEC1 Promotor wurde durch Restriktion mit Acc65I und NotI aus BHUM2429 geschnitten und in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM2847 ligiert.

YIplac211 diese Arbeit

BHUM2895 PTEC1-tcs-pre-UbiY-ǻk-3 × mTurquoise2-TADH, URA3, Amp^R

Der TEC1 Promotor wurde durch Restriktion mit Acc65I und NotI aus BHUM2430 geschnitten und in mit Acc65I und NotI geschnittenes BHUM2847 ligiert.

YIplac211 diese Arbeit

pKS133 hphNT1, Amp^R

Mit STE7-S1- und STE7-S2-Oligonukleotiden kann diese Kassette amplifiziert und für die Deletion von Genen verwendet werden.

Stammsammlung AG Taxis

pMA-T Amp^R

Vektor für synthetische Gene

pMA-T LIFE

TECHNOLOGIES

GMBH

Im Dokument Funktionelle Analyse und Dynamik der regulatorischen Schaltkreise des TEA-Transkriptionsfaktors Tec1 in Saccharomyces cerevisiae (Seite 103-108)