VII. Anhang
7.1. Abbildungsverzeichnis
Abb. 1: Kaudale und rostrale B-Gruppen serotonerger (5-HT-) Neurone des zentralen Nervensystems (ZNS) der Säugetiere und ihre
Projektionen am Beispiel der Ratte. Seite 7
Abb. 2: Schematische Darstellung der Lokalisation kaudaler und rostraler serotonerger (5-HT-) Neurone des ventralen Rhombencephalon unter Berücksichtigung der beiden essentiellen Organisations-zentren, Isthmus-Organizer (IstO) und Grundplatte im zentralen
Nervensystem (ZNS) der Maus des Embryonaltages (E) 12. Seite 9 Abb. 3: Schematische Darstellung der Ausbildung des Isthmus-Organizer
(IstO) der Maus des Embryonaltages (E) 8-9.5. Seite 10 Abb. 4: Präparation des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus
des Embryonaltages 12 (E12). Seite 46
Abb. 5: Zellen des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus des Embryonaltages (E) 12 besitzen die Fähigkeit zur Bildung primärer
Neurospheres. Seite 80
Abb.: 6 Darstellung der zeitlichen Entwicklung (DIV12-22) eines sekundären Neurospheres aus dissoziierten, primären Neurospheres des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus (E12) unter Einfluss der Mitogene Fgf2 und Egf sowie serumfreier
Kulturbedingungen. Seite 81
Abb. 7: Zellen primärer Neurospheres des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus (E12) besitzen die Fähigkeit zur
Proliferation. Seite 83
Abb. 8: Vergleich der Genexpression zwischen primären Neurospheres (NS) und primärem Gewebe (T) des ventralen rostralen Rhomben-cephalon der Maus (E12) mittels Polymerasekettenreaktion und genspezifischer Primer nach vorangegangener reverser
Transkription (RT-PCR). Seite 86
Abb. 9: Primäre Neurospheres des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus (E12) zeigen eine heterogene zelluläre
Zusammensetzung. Seite 88
VII. Abbildungsverzeichnis
Abb. 10: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse der Expression des mitotisch in Progenitoren zentraler serotonerger (5-HT-) Neuronen exprimierten Gens Lmx1b in einem repräsentativen
Versuch. Seite 90
Abb. 11: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse eines repräsen-tativen Versuchs der Expression des Gen Gata2 als frühes Markergen der Entwicklung serotonerger (5-HT-) Neuronen in cDNA aus dissoziierten und ausplattierten primären Neurospheres des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus des
Embryonaltages (E) 12 nach externer Faktorengabe. Seite 91 Abb. 12: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse der Expression
eines repräsentativen Versuchs des Gen Pet1 als frühstes spezifisches Markergen serotonerger (5-HT-) Neurone an cDNA aus dissoziierten und ausplattierten primären Neurospheres des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus des
Embryonaltages (E) 12 nach externer Faktorengabe. Seite 92 Abb. 13: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse eines
repräsen-tativen Versuchs der Expression des Gen Gata2 als frühes Markergen der Entwicklung serotonerger (5-HT-) Neuronen in cDNA aus Primärzellen des ventralen rostralen Rhombencephalon der
Maus des Embryonaltages (E) 12 nach externer Faktorengabe. Seite 94 Abb. 14: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse der Expression
des Gen Pet1 als frühestes Markergen der Entwicklung serotonerger (5-HT-) Neuronen in cDNA aus Primärzellen des ventralen rostralen Rhombencephalon der Maus des Embryonaltages (E) 12 nach
externer Faktorengabe. Seite 95
Abb. 15: Immunhistochemischer Nachweis der Expression von Sim1 („Single-minded homologon 1“) und Serotonin (5-HT-) in Zellen des
Rhombencephalon der Maus des Postnataltages (P) 0. Seite 96 Abb. 16: Nachweis der Sim1-Expression durch nicht-radioaktive RNA-in situ-
Hybridisierung (ISH) an sagittalen Paraffinschnitten (Schnittdicke
10 µm) der Maus des Embryonaltages (E) 12. Seite 98 Abb. 17: Quantitativer Vergleich der Gesamtzahl serotonerger (5-HT-)
Neurone des rostralen Rhombencephalon der Maus in Wildtyp (wt)
und homozygoten Sim1-Mutanten des Embryonaltages (E) 14.5. Seite 99
VII. Abbildungsverzeichnis
Abb. 18: Vergleich der Gesamtzahl serotonerger (5-HT-) Neurone des rostralen Rhombencephalon der Maus zum postnatalen Zeitpunkt
(P) 0 in Wildtyp (wt) und homozygoten Sim1-Mutanten. Seite 100 Abb. 19: Analyse der Expression von Gata2, Pet1 und Tph2 als Vertreter von
Markergenen der Entwicklung serotonerger (5-HT-) Neurone und des ventral exprimierten Transkriptionsfaktors Sim1 in MN9D-Zellen
mittels Reverser Transkriptions (RT)-PCR. Seite 101 Abb. 20: Reverse-Transkriptions-(RT)-PCR-Analyse der Überexpression von
Sim1 in MN9D-Zellen nach 24 h, 48 h und 72 h nach Transfektion mit pcDNA3::Sim1 im Vergleich zu pcDNA3-transfizierten Kontrollen (Ctr) unter Berücksichtigung der jeweils für die PCR eingesetzten
cDNA-Menge. Seite 102
Abb. 21: Western-Blot-Analyse repräsentativer „Gain-of-function“-Versuche
zum Zeitpunkt der jeweils höchsten Sim1-Proteinexpression. Seite 103 Abb. 22: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse der
Mash1-Expression in cDNA aus MN9D-Zellen nach Überexpression des Transkriptionsfaktors Sim1 im Vergleich zu cDNA aus MN9D-
Kontrollansätzen zu verschiedenen Zeitpunkten. Seite 104 Abb. 23: Repräsentative Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse
der Expression von Gata2 in cDNA aus MN9D-Zellen nach Überexpression des Transkriptionsfaktors Sim1 im Vergleich zu
cDNA aus MN9D-Kontrollansätzen zu verschiedenen Zeitpunkten. Seite 105 Abb. 24: Quantitative-„Real-Time“-PCR-(qRT-PCR)-Analyse der
Pet1-Expression in cDNA aus MN9D-Zellen nach Überexpression des Transkriptionsfaktors Sim1 im Vergleich zu cDNA aus MN9D-
Kontrollansätzen zu verschiedenen Zeitpunkten. Seite 106 Abb. 25: Quantitative-„Real-Time“-PCR-Analyse der Genexpression von
Tph2 in cDNA aus Sim1-überexprimierenden MN9D-Zellen im Vergleich zu cDNA-Proben aus pcDNA3 transfizierten MN9D-Zellen
zu unterschiedlichen Zeitpunkten. Seite 107
Abb. 26: Transfektion von MN9D-Zellen mit Sim1-mRNA spezifischer siRNA bzw. einer nicht zur komplementären Sequenzbindung fähigen
Kontroll-siRNA. Seite 109
Abb. 27: Analyse der Herabregulation der Sim1-Expression mittels spezifischer siRNA (Sim1-Cy3) in MN9D-Zellen durch Reverse
Transkriptions(RT)-PCR. Seite 110
Repräsentative Analyse der Genexpression von Pet1 mittels
VII. Abbildungsverzeichnis
Abb. 28: Quantitativer-„Real-Time“-PCR in MN9D-Zellen nach Herab-regulation der Expression von Sim1 mittels spezifischer siRNA (Sim1-Cy5) nach 24 h im Vergleich zu Ctr-siRNA-Alexa 488
transfizierten MN9D-Zellen. Seite 111
Abb. 29: Quantitative-„Real-Time“-PCR-Analyse der Genexpression von Tgf-β2 in cDNA-Proben aus Sim1-überexprimierenden MN9D-Zellen im Vergleich zu cDNA-Proben nicht Sim1-überexprimierender Zellen
zu unterschiedlichen Zeitpunkten. Seite 112
Abb. 30: Graphische Darstellung der relativen Werte der Genexpression im ventralen Rhombencephalon im Vergleich zum ventralen Mesencephalon der Maus des Embryonaltages (E) 11, ermittelt durch Vergleich der entsprechenden Genexpressionsmuster mittels
cDNA-Mikroarray. Seite 114
Abb. 31: Graphische Darstellung der relative Genexpression (2- ∆∆ct) von ausgesuchten Genen, basierend auf einem Genexpressions-vergleich des ventralem Rhombencephalon mit dem ventralem
Mesencephalon der Maus des Embryonaltages (E) 11. Seite 117 Abb. 32: Gegenüberstellung der durch Quantitative-„Real-Time“-PCR
(qRT-PCR) bzw. cDNA-Mikroarray-Analyse erhaltenen, relativen Genexpressionsdaten der Kandidatengene Brn3.2, Lhx8 und Rgs4 im ventralen Rhombencephalon im Vergleich zum ventralen
Mesencephalon der Maus des Embryonaltages (E) 11. Seite 119 Abb. 33: Quantitative-„Real-Time“-PCR (qRT-PCR) Analyse der Expression
von Rgs4 in cDNA aus MN9D-Zellen nach Überexpression des Transkriptionsfaktors Sim1 im Vergleich zu cDNA aus MN9D-
Kontrollansätzen zu verschiedenen Zeitpunkten. Seite 121 Abb. 34: Quantitative-„Real-Time“-PCR-Analyse der Genexpression von
Brn3.2 in cDNA aus Sim1-überexprimierenden MN9D-Zellen im
Vergleich zu cDNA-Proben aus pcDNA3-transfizierten MN9D-Zellen. Seite 122 Abb. 35: Erweitertes Modell des regulatorischen Netzwerkes aus
intrinsischen und extrinsischen Faktoren der Entwicklung serotonerger (5-HT-) Neurone des ventralen Rhombencephalon der Maus unter Berücksichtigung der Einflussnahme von Tgf-β auf die Expression der Transkriptionsfaktoren Gata2 und Pet1, sowie multiple Sim1-abhängige Regulationswege der terminalen
Differenzierung von 5-HT-Neuronen. Seite 146
IX. Literaturverzeichnis