CoaTube fT3
Radioimmunoassay (coated tube) zur Bestimmung von freiem Triiodthyronin (fT3) im Humanserum
Anleitung
Nur für in-vitro Gebrauch
Produkt von
IASON GmbH Feldkirchner Straße 4 A – 8054 Graz-Seiersberg
Tel.: +43 (0)316 28 43 00 Fax: +43 (0)316 28 43 00-113
Email: order@iason.eu www.iason.eu
REF R01-033-100
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Verwendete IFU-Symbole
Symbol Deutsch Symbol Deutsch
In vitro Diagnostikum radioactive Radioaktive Komponente
Bestellnummer TRAC 125I Tracer
Hergestellt von CAL 0-CAL 5 Standards 0-5
Lagerung CO 1, CO 2 Kontrolle
Europäische Konformität
Chargennummer
Verfallsdatum CT Coated tube
Verwendungszweck Nur für in-vitro Gebrauch.
Der CoaTube® fT3 Kit ist ein coated tube Radioimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von freiem Triiodthyronin (fT3) im Humanserum. Die Testergebnisse sollten in Verbindung mit anderen klinischen oder labordiagnostischen Daten verwendet werden, um den Arzt bei der Beurteilung einer Dysfunktion der Schilddrüse zu unterstützen.
Der Test ist geeignet für die Bearbeitung auf automatiesierten RIA-Geräten.
Zusammenfasung
Unter den Schilddrüsenhormonen, welche in der Schilddrüse gebildet werden, wird Triiodothyronin (3,5,3'-Triiodo-L-thyronin, T3) als das biologisch aktivste Molekül angesehen. Es wird bis zu 80% durch die Deiodierung von Tetraiodothyronin (T4) in peripherem Geweben gebildet.T3 kommt im Blutkreislauf in einer großen (99,7%) Protein- gebundenen und einer kleinen (0,3%) ungebundenen Form vor.
Veränderungen des gesamten Schilddrüsenhormons im Blut können entweder auf Konzentrationsänderungen der Bindungsproteine oder auf die Produktion von Schilddrüsenhormonen zurückzuführen sein. Schilddrüsenerkrankungen treten nur
dann auf, wenn eine Nettoänderung der freien ungebundenen Fraktionen dauerhaft auftritt. Daher ist die Konzentration der freien Hormone das wahre Maß für den Schilddrüsenstatus. Hyperthyreose geht im Allgemeinen mit einer Erhöhung der FT3- Konzentration einher und in einigen Fällen ist die erhöhte FT3-Konzentration der einzige Indikator für eine T3-Thyreotoxikose.Die Bestimmung der freien T3- Konzentration ermöglicht auch die Überwachung von Patienten unter Liothyronin- Therapie.
Messprinzip
Dieser Assay basiert auf der Konkurrenz zwischen freiem Triiodthyronin (fT3) in der Serumprobe und Konjugat (an die Wand des Reagenzglases gebundenes T3- Analog) um eine begrenzte Anzahl von Bindungsstellen der 125 I-markierten monoklonalen Anti-Triiodothyronin-Antikörper (Tracer). Lässt man eine konstante Menge an Konjugat und Antikörper mit unterschiedlichen Mengen mit Liganden reagieren, wird die an der Festphase gemessene Radioaktivität umgekehrt proportional zur Konzentration des Liganden sein. Während einer einstündigen Inkubationszeit mit kontinuierlicher Bewegung wird der Immunkomplex auf der reaktiven Oberfläche der Reagenzgläser immobilisiert. Durch Entfernen des Überstands in allen Röhrchen kann die Radioaktivität mit einem Gammazähler gemessen werden. Durch Auftragen von Bindungswerten gegen eine Reihe von Kalibratoren, die eine bekannte Menge an FT3 enthalten, wird eine Kalibrierungskurve erstellt. Aus dieser kann die unbekannte Konzentration von FT3 in Patientenproben bestimmt werden.
Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen
Der CoaTube® fT3 Kit ist nur zur in-vitro Diagnostik und nicht zur Anwendung bei Mensch und Tier geeignet. Dieses Produkt darf nur exakt wie in der mitgelieferten Anleitung beschrieben, eingesetzt werden. IASON kann nicht für einen eventuellen Verlust oder Schaden (sofern nicht gesetzlich etwas anderes festgelegt ist) haftbar gemacht werden, der durch Nichtbeachtung der Instruktionen entsteht.
VORSICHT: Dieser Kit enthält Material menschlichen und/oder tierischen Ursprungs.
Die Kitreagenzien sind so zu handhaben, als ob eine Übertragung einer Infektionskrankheit möglich sei. Unser Produzent prüft humanes Rohmaterial, dass in diesem Kit zum Einsatz kommt auf HBsAg, HCV und HIV-Antikörper. Da es kein diagnostisches Verfahren gibt, welches derartige Erreger mit 100%iger Sicherheit ausschließt, sind die entsprechenden Komponenten wie potentiell infektiöse Proben handzuhaben.
Angemessene Vorsichtsmaßnahmen und die Regeln der guten Laborpraxis, sollten beim Gebrauch und der Entsorgung angewendet werden. Die Entsorgung der Kitreagenzien hat nach den örtlichen Vorschriften zu erfolgen.
Beschädigte Testkits
Im Falle einer starken Beschädigung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma IASON in schriftlicher Form spätestens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden. Stark beschädigte Einzelkomponenten sollten nicht für den Testlauf verwendet werden. Sie müssen gelagert werden, bis eine endgültige Lösung gefunden wurde. Danach sollten Sie gemäß den offiziellen Richtlinien entsorgt werden.
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Haltbarkeit und Lagerung der Reagenzien
Dieser Kit ist bei vorschriftsmäßiger Lagerung bis zum Ablauf des Verfallsdatum stabil. Nach Erhalt sind alle Reagenzien bei 2-8C zu lagern.
Lagerung und Vorbereitung der Patientenproben
Die Proben sollen nach der Abnahme durch Zentrifugieren getrennt werden. Sie können bis zu 24 Stunden bei 2-8°C aufbewahrt werden. Eine längere Lagerung wird bei –20°C empfohlen.
Keine lipämischen und stark hämolytischen Patientenproben verwenden.
Kein Plasma verwenden.
Wenn erforderlich, die Patientenproben bei Raumtemperatur auftauen lassen und gut vortexen. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden.
Kitbestandteile
Alle Reagenzien 1 – 5 vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen (mind. 1 h).
1. TRAC: 125I fT3-Tracer: 125I-markierte monoklonaler Antikörper in Puffer mit einem roten Farbstoff und 0,1% NaN3 als Konservierungsstoff; 1 Flasche gebrauchsfertig; 22 mL; radioactive max. 260 kBq.
2. CT: 2x50 Röhrchen; 12x75 mm; beschichtet mit T3 Konjugat.
3. CAL 0 – CAL 5: 6 Kalibratoren beinhaltend ungefähr 0, 3, 6, 12, 20, 40 pmol/L fT3 in humanem Serum mit 0,1% NaN3; 6 Fläschchen; je 1 mL, gebrauchsfertig;
Umrechnungsfaktor: 1 pmol/L = 0,0651 ng/dL.
Die genaue Konzentration entnehmen Sie bitte aus dem QC-Zertifikat.
4. CO 1, CO 2: 2 Kontrollen: 2 Fläschchen; je 1 mL; humanes Serum mit 0,1%
NaN3 und 0,5% Kathon CG; gebrauchsfertig; Konzentration siehe QC-Zertifikat
Erforderliches Zubehör
Pipetten für 100 µL, 200 µL
Geeignetes Rack für die Teströhrchen
Unbeschichtete Röhrchen
Parafilm
Schüttler
Vortexer
Aqua dest.
Counter für 125I
Testdurchführung Allgemeine Hinweise
1. Alle Reagenzien und Proben müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchmischt werden. Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden.
2. Wenn die Testdurchführung einmal begonnen wurde, muss sie ohne Unterbrechung zu Ende geführt werden.
3. Für jeden Standard, jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden, um Verschleppungen zu vermeiden.
4. Jeder Lauf muss eine Standardkurve und die Kontrollproben beinhalten.
Testdurchführung
Alle CAL, Proben und CO sollten in zweifacher Ausfertigung gleichzeitig ausgeführt werden, so dass die Bedingungen für alle gleich sind.
1. Die Anzahl der erforderlichen Röhrchen berechnen:
Standards CAL 0-CAL 5
Kontrollen CO1, CO2
Patientenproben
2 unbeschichtete Röhrchen für die Totalaktivität
2. 100 µL CAL 0-CAL 5, CO 1, CO 2 und Proben in die CT pipettieren.
3. 200 µL TRAC in alle CT pipettieren; inklusive 2 Röhrchen für Totalaktivität, mit Plastikfolie verschließen.
4. 1 h bei Raumtemperatur schüttelnd inkubieren (200-600 rpm).
5. 1 mL destilliertes Wasser zugeben.
6. Dekantieren oder absaugen des Überstandes. Nach dem Dekantieren die auf den Kopf gestellten CT´s für 2 min auf saugfähiges Papier stellen.
7. Messen der Röhrchen (inklusive Totalaktivität) für mind. 1 Minute.
oder auf einem automatischen RIA-Gerät verarbeiten.
Ergebnisberechnung
Erstellen Sie eine Standardkurve indem Sie die cpm von CAL0-CAL5 gegen die Standardkonzentrationen auftragen. Lesen Sie die Werte der Testproben ab.
Für die automatisierte Auswertung wird ein Logit-log oder Spline-Kurve- Algorhythmus empfohlen
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Assay Beispieldaten
Typische Ergebnisse der
CoaTube
fT3 Standards:Probe cpm B/T % B/B0 %
Totalaktivität 106248
CAL 0 86147 81,1 100,0
CAL 1 74700 70,3 86,7
CAL 2 60805 57,2 70,6
CAL 3 50578 47,6 58,7
CAL 4 34634 32,6 40,2
CAL 5 15872 14,9 18,4
CO 1 65228 61,4 75,7
CO 2 55693 52,4 64,6
Diese Daten dienen nur zur Illustration und sollten nicht für die Berechnung der Probenergebnisse verwendet werden.
Typische Kalibrationskurve
Diese Eichkurve dient nur als Beispiel zur Illustration.
Erwartete Werte
Normbereich für schilddrüsengesunde Personen
3,8 – 8,5 pmol fT3/L (0,25 – 0,55 ng fT3/dL)
(2,5 – 5,5 pg fT3/mL)
Wir empfehlen jedem Anwender, den Normbereich aus dem aktuellen Patientengut abzuleiten.
0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000 80000
1 10 100
cpm
Konzentration [pmol/L]
Qualitätskontrolle
Es wird empfohlen, die Kontrollproben gemäß den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen.
Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag-zu-Tag Überprüfung der Ergebnisse erzielt. Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden.
Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC-Labors sind im QC- Zertifikat, das dem Kit beiliegt, aufgeführt. Die im QC-Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden.
Es wird ebenfalls empfohlen, an nationalen oder internationalen Qualitätssicherungs- Programmen teilzunehmen, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern.
Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll-Werten und Trends angewendet werden. Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials übereinstimmen, sollten die Patientenergebnisse als ungültig eingestuft werden.
In diesem Fall überprüfen Sie bitte die folgenden Bereiche: Pipetten und Zeitnehmer, Gamma Counter, Verfallsdatum der Reagenzien, Lagerungs- und Inkubationsbedingungen, Absaug- und Waschmethode.
Sollten Sie nach Überprüfung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben, setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma IASON GmbH in Verbindung.
Test Charakteristika
Sensitivität
Analytische Sensitivität beträgt 0,3 pmol/L, bestimmt als CAL 0-2xSD.
Die Leerwert-Obergrenze (LoB), die Nachweisgrenze (LoD) und die Quantifizierungsgrenze (LoQ) wurden gemäß dem CLSI Dokument EP 17 ausgewertret.
Die Leerwert-Obergrenze (LoB): 0,43 pmol/L Die Nachweisgrenze (LoD): 0,78 pmol/L Die Quantifizierungsgrenze (LoQ): 1,35 pmol/L
Die funktionale Sensitivität ist gleich mit der Quantifizierungsgrenze.
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Spezifität
Die Zugabe von T4 und r-T3 in 5 und 4 verschiedenen Konzentrationen erfolgte im T3-freien Standard CAL 0 mit anschließender Bestimmung der fT3-Konzentration:
Zugegebener Analyt Konz. [pmol/L] Gemessene fT3 Konz. [pmol/L]
T4 50 000 <NWG*
T4 100 000 <NWG*
T4 250 000 2
T4 500 000 9
T4 1 000 000 22
r-T3 100 000 <NWG*
r-T3 500 000 3.6
r-T3 1 000 000 9
r-T3 4 000 000 24
* Nachweisgrenze
Präzision
Die intra-Assay Präzision wurde in einer einzelnen Messreihe von 6 Proben mit 20 Wiederholungen bestimmt. Die inter-Assay Präzision wurde anhand von 96 unabhängigen Doppelbestimmungen von 6 Proben abgeschätzt. Die VK-Werte sind in der untenstehenden Tabelle zusammengefasst.
Grenzen des Tests
Jede unsachgemäße Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests können die Ergebnisse beeinflussen.
Rechtliche Grundlagen
Zuverlässigkeit der Ergebnisse
Der Test muss exakt gemäß der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden.
Darüber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP (Good Laboratory Practice) oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten. Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien. Es ist sehr wichtig, bei der Testdurchführung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur Überprüfung der Genauigkeit und Präzision mitlaufen zu lassen. Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn alle Kontrollen in den
Intra Assay Präzision [n=20] Inter Assay Präzision [n=96]
Probe MW Konz. [pmol/L] VK [%] Probe MW Konz. [pmol/L] VK [%]
1 1,8 6,4 1 1,6 12,6
2 3,2 4,0 2 3,2 7,7
3 3,9 3,4 3 7,6 5,4
4 7,0 2,7 4 11,2 4,3
5 11,8 3,1 5 19,4 2,8
6 18,2 1,3 6 24,5 6,2
vorgegebenen Bereichen liegen, und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen für diesen Assay erfüllen. Wenn Sie bezüglich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben, setzen Sie sich bitte mit der Firma IASON GmbH in Verbindung.
Therapeutische Konsequenzen
Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen, selbst dann nicht, wenn alle Testergebnisse mit den in
„Zuverlässigkeit der Ergebnisse“ genannten Voraussetzungen übereinstimmen.
Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten.
Nur in Fällen, in denen die Laborergebnisse in akzeptabler Übereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen, sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden. Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage für die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen.
Haftung
Jegliche Veränderungen des Testkits und/oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen, können die gewünschten Ergebnisse und die Gültigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen. Solche Veränderungen und/oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzansprüche zur Folge. Reklamationen, die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gemäß Punkt
„Therapeutische Konsequenzen“ erfolgen, sind ebenfalls abzuweisen. Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschränkt. Jegliche Schäden, die während des Transports am Kit entstanden sind, unterliegen nicht der Haftung des Herstellers.
Literaturhinweise
1. Braun BE, Muller MJ, Seitz HJ, Krieg M. Clinical value of free-thyroxine measurements. Clin Chem 1983; 29(12):2057-60
2. Beck-Peccoz P, Romelli PB, Cattaneo MG, Faglia G, With EL, Barlow JW, Stockigt JR. Evaluation of free thyroxine methods in the presence of iodothyronine-binding autoantibodies. J Clin Endocrinol Metab 1984;58(4):736-9
3. Reiner C. Factors interfering with and influencing the measurement of direct and indirect parameters of free thyroxine (Review). Dtsch Med Wochenschr 1986;111(34):1292-9-
4. Bartalena L, Bogazzi F, Pinchera A. Thyroid function tests diagnostic protocols for investigation of thyroid dysfunction. Ann Ist Super Sanita 1991;27(3):531-9 5. National Academy of Clinical Biochemistry. International Thyroid Testing
Guidelines. Implications for Clinical Practice 2001.
6. Laboratory Medicine Practice Guidelines: Laboratory Support for the
Diagnosis and Monitoring of Thyroid Disease Section 3: Thyroid Tests for the Clinical Biochemist and Physican; B. Free Thyroxine (FT4) and Free
Triiodthyroxine (FT3) Estimate Tests, Guidelines Committee, Thyroid 2003;
13:21-31
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Arbeitsschema
Alle Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen (Min. 1h)
1. Pipettieren CAL 0 – CAL 5 100 µL
CO 1, CO 2 100 µL
Proben 100 µL 2. Pipettieren TRAC 200 µL
3. Inkubieren 1h bei Raumtemperatur schütteln (200-600 rpm)
4. Waschen 1 mL destilliertes Wasser zugeben, Flüssigkeit absaugen oder dekantieren,
2 Minuten auf Zellstoff abtropfen 5. Messen 1 Minute 125I-Messung durchführen;
Röhrchen zur Messung der Totalaktivität berücksichtigen
Erwartete Werte
Normbereich für schilddrüsengesunde Personen
3,8 – 8,5 pmol fT3/L (0,25 – 0,55 ng fT3/dL)
(2,5 – 5,5 pg fT3/mL)
CoaTube fT3
Radioimmunoassay (coated tube) for quantitative determination of free triiodthyronine (fT3) in human serum
Instruction for Use
Nur für in-vitro Gebrauch
Product of
IASON GmbH Feldkirchner Straße 4 A – 8054 Graz-Seiersberg
Tel.: +43 (0)316 28 43 00 Fax: +43 (0)316 28 43 00-113
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Used IFU-Symbols
Symbol English Symbol English
In vitro diagnostic device
radioactive Radioactive
Component
Order number TRAC 125I Tracer
Product of CAL 0-CAL 5 Calibrators 0-5
Storage by CO 1-CO 2 Control sera
European Conformity Batch number
Expiry date CT Coated tube
Intended use For in-vitro use only.
The CoaTube® fT3 Kit is a radioimmunoassay for quantitative determination of free triiodothyronine (fT3) in human serum. Results are to be used in conjunction with other clinical and laboratory data to assist the clinician in the assessment of thyroid dysfunction.
The test is suitable for processing on automated RIA equipment.
Summary
Among the thyroid hormones produced in the thyroid gland triiodothyronin (3,5,3'- triiodo-L-thyronin, T3) is regarded as the most biologically active molecule, produced up to 80 % by the deiodination of tetraiodothyronine (T4) in pheripheral tissues.
T3 is found in the bloodstream in a major (99.7 %) protein-bound, and a minor (0.3
%) unbound, fraction. Variations in total thyroid hormone in blood may result from either changes of binding proteins’ concentrations, or thyroid hormone production.
Thyroid disorders are existing only if a net change of free unbound fractions occur persistently, therefore the true measure of thyroid status will be the concentration of free hormones.
Hyperthyroidism is generally associated with an increase of the FT3 concentration, and in some cases the increased FT3 concentration is the only indicator of T3 thyrotoxicosis.
Determination of the free T3 concentration allows also the follow-up of patients under liothyronine therapy.
Assay principle
This assay is based on the competition between FT3 and conjugate (T3 analog bound to the wall of the test tube) for a limited number of binding sites on 125I-labelled monoclonal anti-triiodothyronine antibodies (tracer). Allowing to react a fixed amount of conjugate and antibody with different amounts of ligand the radioactivity measured on the solid phase will be inversely proportional to the concentration of ligand. During a 1-hour incubation period with continuous agitation immuno-complex is immobilized on the reactive surface of test tubes. Removing the supernatant from all tubes the radioactivity in tubes can be measured in a gamma counter.
By plotting binding values against a series of calibrators containing known amount of FT3, a calibration curve is constructed, from which the unknown concentration of FT3 in patient samples can be determined.
Warnings and precautions
The CoaTube® fT3 Kit is for in vitro diagnostic use only and is not for internal use in humans or animals. This product must be used strictly in accordance with the instructions set out in the Package Insert. IASON will not be held responsible for any loss or damage (except as required by statute) caused, arising out of non-compliance with the instructions provided.
CAUTION: this kit contains material of human and/or animal origin. Handle kit reagents as if capable of transmitting an infectious agent.
Source material from Human origin which is used in this kit was tested and found negative for HbsAG and HIV as well as for HCV antibodies. However, since there is no diagnostic procedure that excludes these agents with 100 percent certainty all components should be handled as potentially hazardous material.
Appropriate precautions and good laboratory practices must be used in the storage, handling and disposal of the kit reagents. Disposal of kit reagents should be in accordance with local regulations.
Damaged test kit
In case of serious damage to the test kit or components, the company IASON must be notified in writing at least one week after receiving the kit. Severely damaged single components should not be used for the test run. They must be stored until a final solution has been found. After that they should be disposed in accordance with official regulations.
Shelf life and storage of reagents
This kit is stable until the stated expiry date if stored as specified. Upon receipt, store all reagents at 2-8C.
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Storage and preparation of serum samples
Sera to be analysed should be assayed soon after separation. Samples can be stored at +2 - +8 °C if the assay is carried out within 24 hours, otherwise aliquots should be prepared and stored deep frozen (-20°C). Repeated freezing and thawing or increases in storage temperature must be avoided. Frozen samples should be thawed and thoroughly mixed before assaying.
Do not use lipemic, hemolyzed or turbid specimens.
Do not use plasma samples.
Materials provided
Allow all reagents 1 – 5 to reach room temperature before use (min. 1h).
1. TRAC: 125I fT3-Tracer: 125I-labelled monoclonal antibody in buffer with red dye and 0.1 % NaN3 as preservation;1 bottle; 22 mL; ready to use;
radioactive max. 260 kBq.
2. CT: 2 x 50 tubes; 12x75 mm; coated with T3 conjugate.
3. CAL 0 – CAL 5: 6 calibrators containing approximately0, 3, 6, 12, 20, 40 pmol/L fT3 in human serum with 0.1% NaN3 and 0.5%Kathon CG; 6 vials;
1 mL each, ready to use;
Conversion factor: 1 pmol/L = 0.0651 ng/dL.
The exact concentrations are listed on QC-Certificate.
4. CO 1, CO 2: 2 controls containing human serum with 0.1% NaN3 and 0.5%
Kathon CG; 2 vials;
1 mL each; ready to use; concentration see QC-Certificate.
Materials required
Pipettes for 100 µL, 200 µL
Test tube rack
Uncoated tubes
Parafilm
Shaker
Vortexer
Aqua dest.
Counter für 125I
Assay procedure General remarks
1. All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use. All reagents must be mixed without foaming.
2. Once the test has been started, all steps should be completed without interruption.
3. Use new disposal plastic pipette tips for each standard, control or sample in order to avoid cross contamination
4. Each assay run should must include a standard curve and control samples.
Test procedure
All CAL 0-CAL 5, CO 1, CO 2 and samples should be run in duplicate and should be run concurrently so that all conditions of testing are the same.
1. Calculate the number of tubes needed for the assay:
Calibrators CAL 0-CAL 5
Controls CO 1, CO 2
Samples
2 uncoated tubes for total activity
2. Pipette 100 µL of each CAL, CO and samples into CT.
3. Pipette 200 µL TRAC into all CT; inclusively 2 tubes for total activity, cover with parafilm.
4. Incubate 1 hour at room temperature under shaking (200-600 rpm).
5. Add 1.0 mL distilled water to each tube and repeat point 5.
6. Aspirate or decant the fluid and blot on filter paper for 2 minutes.
7. Count radioactivity for at least 60 sec/tube or process on the automated RIA equipment.
Calculation of results
Draw a standard curve by plotting the counts per minute (cpm) of each standard against its concentration. Read off the values of the test samples.
Alternative data reduction techniques may be employed but users should confirm that the selected curve fit is appropriate and gives acceptable results. Logit-log, or spline curve fit are recommended.
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Assay data
Typical results of
CoaTube
fT3 Calibrators:Sample cpm B/T % B/B0 %
Total activity 106248
CAL 0 86147 81.1 100.0
CAL 1 74700 70.3 86.7
CAL 2 60805 57.2 70.6
CAL 3 50578 47.6 58.7
CAL 4 34634 32.6 40.2
CAL 5 15872 14.9 18.4
CO 1 65228 61.4 75.7
CO 2 55693 52.4 64.6
This data is for illustration only and must not be used for the calculation of any sample result.
Typical calibration curve
This sample calibration curve is for illustration only.
Expected values
Normal range for euthyroid subjects 3.8 – 8.5 pmol fT3/L
(0.25 – 0.55 ng fT3/dL) (2.5 – 5.5 pg fT3/mL)
We recommend each laboratory to determine normal ranges for their local population.
0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000 80000
1 10 100
cpm
Konzentration [pmol/L] Concentration [pmol/L]
Quality control
The regular use of control samples at several analyte levels is advised to ensure day- to-day validity of results. Controls should be tested as unknowns. Quality Control charts should be maintained to follow the assay performance.
Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve. A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance.
It is recommended to use control samples according to state and federal regulations.
The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results. Use controls at both normal and pathological levels.
The controls and the corresponding results of the QC-Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit. The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results.
It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results.
Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends. If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid. In this case, please check the following technical areas: Pipetting and timing devices; gamma counter, expiration dates of reagents, storage and incubation conditions, aspiration and washing methods.
After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or IASON directly.
Test characteristics
Sensitivity
Analytical sensitivity is 0.3 pmol/L, assaying CAL 0 -2xSD.
Limit of Blank (LoB), Limit of Detection (LoD) and Limit of Quantitation (LoQ) were determined consistent with the guidlines in CLSI document EP17.
Limit of Blank (LoB): 0.43 pmol/L Limit of Detection (LoD): 0.78 pmol/L Limit of Quantation (LoQ): 1.35 pmol/L
The functional sensitivity is equal to the Limit of Quantitation (LoQ).
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Specificity
T4 and r-T3 were added in 5 and 4 different concentrations to T3 free CAL 0 and the concentration of FT3 was measured:
Added analyt Conz. [pmol/L] Messured fT3 Conz. [pmol/L]
T4 50 000 <DL*
T4 100 000 <DL*
T4 250 000 2
T4 500 000 9
T4 1 000 000 22
r-T3 100 000 <DL*
r-T3 500 000 3.6
r-T3 1 000 000 9
r-T3 4 000 000 24
* Detection Limit
Precision
The intra-assay precision was determined with 20 replicates within a single run, the inter-assay precision was estimated in 96 independent runs carried out in duplicates.
CV values are summarized below.
Limitation of use
Any improper handling of samples or modifications to this test may affect the results.
Legal aspects
Reliability of results
The test must be performed exactly as per the manufacturer’s instructions for use.
Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable national standards and/or laws. This is especially relevant for the use of control reagents. It is important to always include, within the test procedure, a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test.
Intra assayprecision [n=20] Inter assayprecision [n=96]
Sample Mean conc. [pmol/L] CV [%] Probe Mean conc. [pmol/L] CV [%]
1 1.8 6.4 1 1.6 12.6
2 3.2 4.0 2 3.2 7.7
3 3.9 3.4 3 7.6 5.4
4 7.0 2.7 4 11.2 4.3
5 11.8 3.1 5 19.4 2.8
6 18.2 1.3 6 24.5 6.2
The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications. In case of any doubt or concern please contact IASON.
Therapeutic consequences
Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under Reliability of Results.
Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient.
Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived.
The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences.
Liability
Any modification of the test kit and/or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test. Such modification and/or exchanges invalidate any claim for replacement.
Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point Therapeutic Consequences are also invalid. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer.
Useful publications
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4. Bartalena L, Bogazzi F, Pinchera A. Thyroid function tests diagnostic protocols for investigation of thyroid dysfunction. Ann Ist Super Sanita 1991;27(3):531-9
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13:21-31
20/20 Vers. 3 kn-r01-033-100-0419
Pipetting scheme
Allow all reagents to reach room temperature before use (min. 1h)
1. Pipetting CAL 0 – CAL 5 100 µL
CO 1, CO 2 100 µL
samples 100 µL 2. Pipetting TRAC 200 µL
3. Incubation Shake for 1 hour at room temperature (200-600 rpm)
4. Washing wash with 1mL distilled water, draw off liquid or decant, dry 2 minutes on absorbent material 5. Reading at least 1 minute;
don´t forget the total count tubes
Expected values
Normal range for euthyroid subjects 3.8 – 8.5 pmol fT3/L
(0.25 – 0.55 ng fT3/dL) (2.5 – 5.5 pg fT3/mL)
