Die Atherosklerose stellt uns in einer alternden Gesellschaft vor zunehmende Herausforderungen. Diese wird zum einen durch den Faktor Zeit begünstigt, jedoch wurde in den letzten Jahrzehnten der Forschung auch immer mehr der psychosoziale und physische Stress als Risikofaktor beforscht und bestätigt. In diversen Studien wurden die verschiedenen Aspekte des initialen Schritts der Atherogenese in verschiedenen Stressmodellen untersucht. Gerade die Faktoren der Monozytenadhäsion an das Gefäßendothel wurden hierbei besonders in den Fokus gestellt. Um diese zur dauerhaften Prophylaxe der Atherogenese zu reduzieren, wurden in der Vergangenheit zunehmend langzeitgeeignete, nebenwirkungsarme Therapieformen erforscht. Hierbei stellt die große Gruppe der Flavonoide eine große Quelle neuer Wirkstoffe dar.
Ziel dieser Arbeit war es den initialen Schritt der Atherogenese unter Flavonoideinfluss zu untersuchen.
In den Adhäsionsversuchen konnte der hemmende Effekt aller getesteten Flavonoide auf die beiden Zellreihen in signifikantem Ausmaß beobachtet werden. Diese Beobachtung legt einen gezielten Eingriff der Flavonoide in grundlegende Stresssignalwege nahe.
Als ein weiterer proadhäsiver Faktor wurde in der Vergangenheit Endothelin-1 nachgewiesen. In dieser Arbeit konnten für die Kostimulation der Zellen mit Noradrenalin und Flavonoid ein hemmender Effekt aller Flavonoide auf die Produktion von Endothelin-1 signifikant aufgezeigt werden.
Auf Genexpressionsebene wurden weniger konsistente Ergebnisse beobachtet.
Die CRH-Stimulation erbrachte keinen signifikanten Anstieg der CRHR2-Rezeptor-mRNA.
59
Die alleinige Stimulation mit Noradrenalin führte zu einer signifikanten Steigerung der CRHR2-Rezeptor-mRNA. Der Effekt der Flavonoide bei Kostimulation mit Noradrenalin und Flavonoid war bei der Gruppe der Flavanone (Isokuranetin, Pinocembrin) nicht wie erwartet, ebenso bei 6-Hydroxyflavon.
Der Nachweis der CRHR2-Rezeptoren auf Proteinebene durch die Western-Blotting-Methode lieferte keine signifikanten Nachweise.
Somit können wir für die getesteten Flavonoide eine antiadhäsive Wirkung sowohl für die Kostimulationen mit CRH als auch mit Noradrenalin auf die beiden Zellreihen darstellen. Ebenso deren Beteiligung an einer suffizienten Stressantwort über das Endothelin-1-Hormon und die CRHR2-Rezeptoren bei Kostimulation mit Noradrenalin. In zukünftigen Studien werden noch die genauen Signalwege und Rezeptoren zu erörtern sein, die für diese Prozesse verantwortlich sind.
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66 Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1 modifiziert nach Libby et al.4 : Initiation, Progression und
Komplikation koronaratherosklerotischer Plaques ... 3
Abbildung 2 modifiziert nach Chi et al.12: Initialer Schritt der Diapedese der Monozyten in das Endothelgewebe ... 5
Abbildung 3 nach Bojić et al.40: Flavan-Basis ... 12
Abbildung 4: Berechnung der prozentualen monozytären Adhäsion an HMEC-1-Zellen33 ... 29
Abbildung 5 modifiziert nach R&D Systems: QuantiGlo® ELISA Prinzip52 ... 31
Abbildung 6: Adhäsionsassay CRH ... 40
Abbildung 7: Adhäsionsassay Noradrenalin ... 41
Abbildung 8: Adhäsionsassay CRH/CRH+Flavonoid ... 42
Abbildung 9: Adhäsionsassay NOR/NOR+Flavonoid ... 43
Abbildung 10: ET-1 ELISA NOR-Stimulation... 44
Abbildung 11: ET-1 ELISA Kostimulation NOR+Flavonoid ... 46
Abbildung 12: rt-PCR Darstellung der Noradrenalin-Stimulation ... 47
Abbildung 13: rt-PCR Darstellung der Noradrenalin/Flavonoid-Kostimulationen ... 49
Tabellenverzeichnis Tabelle 1: Verwendete Flavonoid-Konzentrationen ... 23
Tabelle 2: rtPCR-Reaktionszyklus ... 35
67 Danksagung
Hiermit möchte ich mich bei allen bedanken, die maßgeblich zum Gelingen meiner Arbeit beigetragen haben. Mein Dank gilt an erster Stelle Fr. Priv.-Doz.
Dr. med. Ute Wilbert-Lampen als Leiterin der Arbeitsgruppe, für meine Übernahme als Doktorandin in der Ersten Medizinischen Klink, des Weiteren für die formelle Betreuung meiner Arbeit und für die Bereitstellung des hervorragend ausgestatteten Forschungslabors. Sie bot mir die Möglichkeit der Teilnahme an einem äußerst interessanten Projekt.
Mein großer Dank gilt an dieser Stelle Dr. med. Korbinian Lackermair als dem Betreuer meiner Arbeit. Er schlug mir zu Beginn meines zweiten Studienabschnitts die Teilnahme an der Arbeitsgruppe vor. Mit seiner grundsätzlich optimistischen Haltung stand er jederzeit, auch bei Rückschlägen stets motivierend an meiner Seite. Ich danke ihm für diese sowohl fachliche als auch menschliche Unterstützung, seine wertvollen Ratschläge waren unverzichtbar für den Erfolg dieser Arbeit. Auch über die Promotion hinaus ist er als Arzt Vorbild für mich.
Zu großem Dank bin ich Frau Zeljka Sisic verpflichtet. Mit viel Geduld, einer stets unerschöpflich positiven Energie und immer guter Laune führte sie mich durch die Grundzüge des experimentellen Arbeitens im Forschungslabor. Es gab kein Problem, das mit ihrer Erfahrung und Hartnäckigkeit nicht gelöst werden konnte.
Vielen Dank auch an Frau Bianca Hildebrand und Julia Arcifa für das zur Verfügung stellen von technischen Hilfsmitteln und wertvollen Ratschlägen.
Insbesondere möchte ich meinem Mann Alexander, meinen Eltern und Schwiegereltern danken, die mich mit ihrer Liebe, ihrem Verständnis und ihrer Kraft stets unterstützt haben.
68