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rac2fw-inact CGGTGGGAAAGAaCTGCCTGCTGATC
rac2rv-inact GATCAGCAGGCAGtTCTTTCCCACCG
Primer für rac1 und rac2 zur Klonierung in den pGBKT7-Vektor für den Hefe-Zwei- Hybrid Screen, sowie direkte Interaktionstests mittels Matchmaker 3- System.
rac1pGBKfwEcoRI GAATTCATGCAGGCGATCAAG
rac1pGBKrewBamHI GGATCCTTAGAGCAGGGCG
rac2pGBKfwEcoRI GAATTCATGCAGGCCATCAAG
rac2pGBKrewBamHI GGATCCTTAGAGCAGGGCG
Primer für die konstitutiv aktive Form von rac1 und rac2 zur Klonierung in die Gateway-Vektoren für die Herstellung transgener Fliegen (Für die Klonierung der inaktiven Form wurden die gleichen Primer eingesetzt.)
rac1act-fw-GW caccATGCAGGCGATCAAGT
rac1act-rev-GW TTAGAGCAGGGCGCACTTG
rac2act-fwGW caccATGCAGGCCATCAAGT
rac2act-rewGW GAGCAGGGCGCACTTGTG
Primer zur Klonierung von kette-fl in pB42AD. Diese ungerichtete Klonierung wird über die XhoI Schnittstellen durchgeführt. Dieses Konstrukt konnte im Rahmen dieser Arbeit nicht hergestellt werden.
kette-fw-pB42AD CTCGAGATGGCACGCCCA
kette-rev-pB42AD CTCGAGTTAGAGTGCCAGC
Primer für das 1-1041 bp -Fragment des sra-1-Gens zur Klonierung in pGADT7 (eingefügte Schnittstellen: EcoRI und XhoI).
sra-fw-1-1041 GAATTCATGACGGAGAAGATTA
sra-rew-1-1041 CTCGAGATGCACCATTAGATC
Primer zur Klonierung von sra1-fl in pGADT7. Zur Generierung des Konstrukts wurden cDNAs verwendet, die Teilfragmente des sra-1 Gens beinhalten (LD47929 und LD19991).
Als Schnittstellen für das N-terminale Fragment wurden EcoRI und ClaI eingefügt, sowie ClaI und XhoI für den C-terminalen Teil.
sra-fw-Eco ist komplementär zu sra-fw-1-1041(siehe oben)
47929-rew-Cla1 ATCGATGCGATCCAGCCGTA
19991-fw-Cla1 ATCGATCGCATCTTTAAGAAC
19991-rew-Xho CTCGAGTCAATTGTTTATGCTC
Primer zur Klonierung von chic- fl in pUAST-CYFP. Die chic cDNA (LD15851) wurde über
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die eingefügten Schnittstellen EcoRI und NotI in den Zielvektor eingebracht.
Eco-chic-CYFP-fw GAATTCATGAGCTGGCAAGAT
Not-chic-CYFP-rw GCGGCCGCACCCGCAAGT
4.14 Fliegenlinien (Drosophila melanogaster)
Die mit dem Präfix BL versehenen Linien wurden vom Bloomington Drosophila Stock Center (Indiana University, Bloomington, Indiana, USA) bezogen, Informationen über die einzelnen Linien sind auf der Homepage www.flystocks.bio.indiana.edu zu erfahren. Die anderen Fliegenlinien stammen aus Labor-internen Stammhaltungen.
Tabelle 4.5: Verwendete Fliegenlinien.
Linie Beschreibung Lokalisation Referenz
white white-Mutation der
Augenfarbe (w-) X Chr. Laborzucht der
Arbeitsgruppe Renkawitz-Pohl M{3xP3-RFP.attP} zur ΦC31-vermittelten
Integration von Gateway Konstrukten
3. Chr.
Balancerlinien und Marker
If/CyO hg lacZ If (Inflated) Marker für schmale Augen und
verschmolzene Ommatidien;
dominanter CyO (Curly) Marker für nach oben gebogene Flügel;
lacZ-Expression im Hinterdarm
2. Chr. M. Affolter
Dr/TDlZ, Sb Dr (Drop) Marker für schmale tropfenförmige Augen; lacZ- Expression im
Maxillarsegment, Sb (Stubble) verkürzte Thorakalborsten
3. Chr.
sp/CyO bb; Dr/TDlZ,Sb sp (sternopleura) vermehrte Borsten auf der
Sternopleuralplatte; CyO P{wg-LacZ} Expression in wingless- Muster; Dr Augenmarker, lacZ Expression, Sb verkürzte Borsten
2. + 3. Chr.
If/CyO bb; TM2,
Ubx,e/TM6 bb, Hu, Tb If Augenmarker; CyO P{wg-LacZ} Expression in wingless- Muster; TM2 Balacer mit Ubx (Ultrabithorax) Marker,
vergrösserte Haltere,
zusätzliche Borste, e (ebony) dunkle Körperfärbung: TM6
2. + 3. Chr.
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Balancer mit Hu (Humeral) zusätliche Humoralborste, TM6 P{ftz-lacZ} LacZ
Expression in ftz Muster dicke Puppen
sp/CyO;
TM2,Ubx/MKRS,Sb (CSTM)
sp vermehrte Borsten, CyO Flügelmarker, MKRS Balancer mit Sb, Marker für verkürzte Thorakalborsten, TM2 Balancer mit Ubx
2. + 3. Chr.
Gal4 - Treiberlinien
TGX-(twist-GAL4) Gal4 Expression im gesamten
Mesoderm (Stadium 7-12) X. Chr. A. Michelson Mef2-Gal4 Gal4 Expression im gesamten
Mesoderm (Stadium 11-15) 3. Chr. Ranganayakulu et al., 1996 P{UAS-Dcr}; Mef2-Gal4 Gal4 und Dicer Expression im
gesamten Mesoderm;
Verwendung zur
Überexpression von RNAi Linien
X.Chr+ 3.
Chr BL25756
sg24-Gal4 (twist-Gal4) Gal4 Expression im gesamten
Mesoderm (Stadium 7-12) 2. Chr. A. Michelson rP298-Gal4 (duf-Gal4) Gal4 Expression in FCs,
wachsenden Myotuben X. Chr. Menon und Chia, 2001 sns pro3-Gal4 Gal4 Expression in FCMs 2. Chr. S. Abmayr P(GawB)NP3156/TM6 Embryonale flare- Gal4
Expression in der Muskulatur 3. Chr. 104394 (Kyoto) P(GawB)NP3252/TM6 Embryonale sck- Gal4
Expression in der Muskulatur 3. Chr. 104427 (Kyoto) c855a-Gal4 Gal4 Expression in Testis-
Muskeln 3. Chr. BL6990
1151-Gal4 Gal4 Expression in der
gesamten adulten Muskulatur 1. Chr. zur Verfügung gestellt von L.A.
Shashidara, IISER Pure UAS- tragende Linien
P(UASp-GFP.Act5C) 2-1 Expression der wildtypischen Form von Act5C. Protein mit einem N-terminalen GFP-Tag unter UAS-Kontrolle
2. Chr. BL9258 (Roeper et al., 2005)
P(UASp-Act5C.mRFP)29 Expression der wildtypischen Form von Act5C. Protein mit einem N-terminalen RFP-Tag unter UAS-Kontrolle
2. Chr. BL24778
P(UAS-tsr.S3E)3.3.1 Expression der inaktiven Form des Twinstar Proteins unter UAS-Kontrolle
3. Chr. BL9239
(Ng und Luo, 2004)
P(UAS-tsr.S3A)4.1 Expression der konstitutiv-aktiven Form des Twinstar Proteins unter UAS-Kontrolle
1. Chr. BL9236
(Ng und Luo, 2004)
P(UAS-ssh.N)30 Expression der wildtypischen
Form von Slingshot mit einem 2. Chr. BL9112
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HA-Tag unter UAS-Kontrolle P(UAS-ssh.CS)43 Expression der kathalytisch
inaktiven Form von slingshot unter UAS-Kontrolle, basiert auf dem
Aminosäurenaustausch (Cys468Ser)
2. Chr. BL9115
P(UAS-capt.B)1 Expression der wildtypischen Form des Capulet Proteins unter UAS-Kontrolle
2. Chr. BL5943
P(UAS-pod1.R)3/TM3 Expression der wildtypischen Form des Pod1 Proteins unter UAS-Kontrolle
3. Chr. BL8801
P(UAS-pod.GFPmyc)3/TM3
Expression der wildtypischen Form des Pod1 Proteins unter UAS-Kontrolle, zusätzlich mit GFP und myc Tag versehen
3. Chr. BL8800
P(UAS-YFP.ltd)RhoGDI11 Expression der wildtypischen, YFP-getagten Form des Rab32 Proteins unter UAS-Kontrolle
3. Chr. BL9815
P(UAS-Roc1a.D)8.1 Expression der wildtypischen Form des Roc1a Proteins unter UAS-Kontrolle
2. Chr. BL34047
P(UAS-Hsc70-4.WT)B Expression der Hsc70-4 kodierenden Genregion unter UAS-Kontrolle
2. Chr. BL5846
P(UAS-flare-GFP) Expression des flare Gens unter UAS- Kontrolle, mit eGFP-Tag versehen
1. und 3.
Chr.
Ren et al., 2007
P(UAS-kette) Expression des kette Gens
unter UAS- Kontrolle 3. Chr. Transgene Linie der
Arbeitsgruppe Renkawitz-Pohl P(UAS-sra-myr)/TDlacZ Expression des myristylierten
sra1 Gens unter UAS- Kontrolle
3. Chr. Schenk et al., 2003
P(UAS-sra-myr∆C)/TDlacZ Expression der myristylierten dominant negativen Form von sra1 unter UAS- Kontrolle
3. Chr. Schenk et al., 2003
P(UAS-rac2-eGFP) Expression des rac2 Gens unter UAS- Kontrolle, mit eGFP-Tag versehen
3. Chr. Doktorarbeit C.
Dottermusch, 2009
P(UAS-rac1N17) Expression der dominant negativen Form von rac unter UAS-Kontrolle
3. Chr. BL6292
P(UAS-rac1V12) Expression der konstitutiv aktiven Form von rac unter UAS-Kontrolle
3. Chr. BL6291
P(UAS-wupRA L9) Expression der L9/wupRA Isoform des wupA-Gens unter UAS-Kontrolle
zur Verfügung gestellt von A.
Ferrus (Sahota et al., 2009) P(UAS-Scar-fl-CYFP) Expression des scar Gens 2. Chr.