4. Ergebnisse
4.5 Bestimmung der rATG-induzierten Apoptose in kultivierten, humanen Thymusstromazellen mittels Annexin V Färbung
Die Komplement-unabhängige Zytotoxizität (CIC) sowie die Komplement-abhängige Zytotoxizität (CDC) durch ATG und ATLG wurden durchflusszytometrisch mittels Annexin V und LIVE/DEAD® Färbung untersucht. Bei der vorliegenden Analyse wurden einfach positive Annexin V+ Zellen sowie doppelt positive AnnexinV+/LIVE/DEADÒ+ Zellen als tote Zellen gewertet. Allerdings war der Anteil an doppelt positiven Zellen dabei zu vernachlässigen (siehe Abbildung 12).
100 µg/ml rIgG
NegKtrl Pan-ZK
200x 200x
200x 200x
200x
200x
A B C
D ATLG+ Pan-ZK
Pan-ZK Pan-ZK
ATG + Pan-ZK
44
Abbildung 12: Exemplarische Darstellung des durch ATG und ATLG ausgelösten, dosisabhängigen Zelltods.
Unter A ist die durch ATLG, unter B die durch ATG ausgelöste dosisabhängige Apoptose dargestellt.
Der Anteil der LIVE/DEAD®+ Zellen ist konzentrationsunabhängig gering, daher kann der durch beide rATG Präparate verursachte Zelltod als Apoptose gedeutet werden. Gezeigt ist ein unabhängiges Experiment.
ATG und ATLG zeigten ähnliche Ergebnisse bezüglich der CIC und CDC. Beide Medikamente präsentierten eine dosisabhängige Apoptose. Die Fraktion an toten, also Annexin V+/LIVE/DEAD®+ Zellen zeigte mit steigender rATG Konzentration eine Zunahme. Die Anzahl der toten Zellen konnte durch die Hinzugabe von humanem Serum als Quelle humanen Komplements sowie durch die Hinzugabe von Kaninchenkomplement erhöht werden. Allerdings blieb bei beiden Komplementformen die Verstärkung des zytotoxischen rATG Effekts unterhalb der Signifikanzgrenze. Die durch Kaninchenkomplement herbeigeführte Steigerung war als stärker zu beobachten (siehe Abbildung 13).
Q1 0,31
Q2 0,078
Q3 14,9 Q4
84,7
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1.fcs 2572
Q1 0,18
Q2 0,50
Q3 25,8 Q4
73,5
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 10.fcs 2798
Q1 0,16
Q2 0,98
Q3 43,1 Q4
55,8
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 100.fcs 2450
Q1 0,14
Q2 0,70
Q3 43,5 Q4
55,7
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1000.fcs 5150
Q1 0,096
Q2 0,17
Q3 13,2 Q4
86,6
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1 + HK.fcs 8297
Q1 0,28
Q2 0,16
Q3 17,1 Q4
82,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 10 + HK.fcs 4916
Q1 0,079
Q2 0,40
Q3 26,9 Q4
72,6
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 100 + HK.fcs 10080
Q1 0,024
Q2 0,79
Q3 49,3 Q4
49,9
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1000 + HK.fcs 4168 Q1
0,44
Q2 0,40
Q3 22,4 Q4
76,7
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1.fcs 2486
Q1 0,20
Q2 0,52
Q3 32,5 Q4
66,8
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 10.fcs 3050
Q1 0,15
Q2 1,08
Q3 43,4 Q4
55,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 100.fcs 4647
Q1 0,035
Q2 0,91
Q3 70,7 Q4
28,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1000.fcs 2850
Q1 0,21
Q2 0,14
Q3 13,5 Q4
86,1
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1 + HK.fcs 8580
Q1 0,27
Q2 0,81
Q3 39,7 Q4
59,3
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 10 + HK.fcs 4059
Q1 0,32
Q2 1,49
Q3 52,8 Q4
45,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
Q1 0,12
Q2 0,72
Q3 61,8 Q4
37,3
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1000 + HK.fcs 4190
Q1 0,11
Q2 0,32
Q3 25,7 Q4
73,9
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1 + KK.fcs 1886
Q1 0,13
Q2 0,83
Q3 45,6 Q4
53,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 10 + KK.fcs 1562
Q1 0,072
Q2 0,83
Q3 70,1 Q4
29,0
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
Q1 0
Q2 0,80
Q3 72,2 Q4
27,0
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1000 + KK.fcs 1367
Q1 0,46
Q2 0,39
Q3 22,2 Q4
77,0
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1 + KK.fcs 2591
Q1 0,17
Q2 0,62
Q3 35,0 Q4
64,2
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 10 + KK.fcs 1780
Q1 0
Q2 1,15
Q3 91,0 Q4
7,89
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 100 + KK.fcs 697
Q1 0
Q2 1,09
Q3 87,4 Q4
11,5
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1000 + KK.fcs 914 Q1
0,31
Q2 0,078
Q3 14,9 Q4
84,7
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1.fcs 2572
Q1 0,18
Q2 0,50
Q3 25,8 Q4
73,5
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 10.fcs 2798
Q1 0,16
Q2 0,98
Q3 43,1 Q4
55,8
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 100.fcs 2450
Q1 0,14
Q2 0,70
Q3 43,5 Q4
55,7
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1000.fcs 5150
Q1 0,096
Q2 0,17
Q3 13,2 Q4
86,6
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1 + HK.fcs 8297
Q1 0,28
Q2 0,16
Q3 17,1 Q4
82,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 10 + HK.fcs 4916
Q1 0,079
Q2 0,40
Q3 26,9 Q4
72,6
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 100 + HK.fcs 10080
Q1 0,024
Q2 0,79
Q3 49,3 Q4
49,9
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1000 + HK.fcs 4168 Q1
0,44
Q2 0,40
Q3 22,4 Q4
76,7
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1.fcs 2486
Q1 0,20
Q2 0,52
Q3 32,5 Q4
66,8
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 10.fcs 3050
Q1 0,15
Q2 1,08
Q3 43,4 Q4
55,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 100.fcs 4647
Q1 0,035
Q2 0,91
Q3 70,7 Q4
28,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1000.fcs 2850
Q1 0,21
Q2 0,14
Q3 13,5 Q4
86,1
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1 + HK.fcs 8580
Q1 0,27
Q2 0,81
Q3 39,7 Q4
59,3
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 10 + HK.fcs 4059
Q1 0,32
Q2 1,49
Q3 52,8 Q4
45,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
Q1 0,12
Q2 0,72
Q3 61,8 Q4
37,3
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1000 + HK.fcs 4190
Q1 0,11
Q2 0,32
Q3 25,7 Q4
73,9
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1 + KK.fcs 1886
Q1 0,13
Q2 0,83
Q3 45,6 Q4
53,4
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 10 + KK.fcs 1562
Q1 0,072
Q2 0,83
Q3 70,1 Q4
29,0
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
Q1 0
Q2 0,80
Q3 72,2 Q4
27,0
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_F 1000 + KK.fcs 1367
Q1 0,46
Q2 0,39
Q3 22,2 Q4
77,0
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1 + KK.fcs 2591
Q1 0,17
Q2 0,62
Q3 35,0 Q4
64,2
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 10 + KK.fcs 1780
Q1 0
Q2 1,15
Q3 91,0 Q4
7,89
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 100 + KK.fcs 697
Q1 0
Q2 1,09
Q3 87,4 Q4
11,5
0 -103
103 104
105 Comp-blue 530_30-A :: Annexin 0
103 104 105
Comp-violet 562_40-A :: LD
TSZ_G 1000 + KK.fcs 914
Annexin V
Annexin V LIVE/DEAD®LIVE/DEAD®
ATLG
ATG
A
B
1 µg/ml
1 µg/ml
10 µg/ml 100 µg/ml 1000 µg/ml
10 µg/ml 100 µg/ml 1000 µg/ml
0,3% <0,1%
84,7%
0,2% 0,5%
73,5%
0,2% 1%
55,8%
0,1% 0,7%
55,7%
0,4% 0,4%
76,7%
0,2% 0,5%
66,8%
0,2% 1%
55,4%
<0,1% 0,9%
28,4%
14,9% 25,8% 43,1% 43,5%
70,7%
43,4%
32,5%
22,4%
45
Abbildung 13: rATG-induzierte Apoptose in kultivierten, humanen Thymusstromazellen.
EpCAM+ und EpCAM- Annexin V+ Thymusepithelzellen nach 24h Inkubation mit verschiedenen rATG Konzentrationen ± humanem Serum bzw. Kaninchenkomplement. Gezeigt sind die Mittelwerte ± SEM von n=5 (+KKomp) bzw. n=6 (-Komp, +HKomp) unabhängigen Experimenten. (-Komp = ohne Komplement; + KKomp = mit Kaninchenkomplement; +HKomp = mit humanem Serum).
Beim Vergleich zwischen EpCAM- Thymusstromazellen und EpCAM+ Thymusepithelzellen fiel auf, dass beide rATG Präparate einen stärkeren
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Mediumkontrolle GrafalonÒ ThymoglobulinÒ
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
EpCAM+ 1µg/ml EpCAM
-10 µg/ml
100 µg/ml
1000 µg/ml
®
®
Annexin+ Zellen [%] Annexin+ Zellen [%] Annexin+ Zellen [%] Annexin+ Zellen [%]
Annexin+ Zellen [%] Annexin+ Zellen [%]
Annexin+ Zellen [%] Annexin+ Zellen [%]
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Mediumkontrolle GrafalonÒ ThymoglobulinÒ
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
Annexin+Zellen[%]
-Komp
+HKomp
+KKomp 0
20 40 60 80
EpCAM+ 1µg/ml EpCAM
-10 µg/ml
100 µg/ml
1000 µg/ml
®
® Mediumkontrolle ATLG
ATG
46 apoptotischen Effekt auf EpCAM+ Thymusepithelzellen ausübten als auf EpCAM -Stromazellen. Dies kann sowohl in der Annexin V+ Fraktion (siehe Abbildung 12) als auch in der Darstellung der mittleren Fluoreszenzintensität (engl. Median Fluorescent Intensity, MFI) der Annexin-Färbung beobachtet werden (siehe Abbildung 14). Bei den ATG-Konzentrationen von 1 µg/ml und 10 µg/ml ist der Unterschied zwischen EpCAM+ und EpCAM- Thymusstromazellen signifikant, ebenso bei einer ATLG-Konzentration von 1000 µg/ml.
Abbildung 14: Vergleich der MFI der Annexin V+ Zellen zwischen EpCAM+ und EpCam- Zellen nach Inkubation mit verschiedenen rATG Konzentrationen.
A zeigt den Vergleich beider Präparate und deren zytotoxischer Effektivität auf EpCAM+ und EpCAM -Thymusstromazellen. B zeigt jeweils die Auswirkungen von ATLG und ATG auf beide Zellkompartimente. * = p<0,05. n=6.
1 10 100
1000 0
5000 10000 15000
ATG [µg/ml]
MFI[AnnexinV]
Grafalon“ EpCAM+ Grafalon“ EpCAM
-*
0 10000 20000 30000 40000 50000
ATG [µg/ml]
MFI[AnnexinV]
Thymoglobulin“ EpCAM+ Thymoglobulin“ EpCAM -Grafalon“ EpCAM+ Grafalon“ EpCAM
-1 10 100
1000 0
5000 10000 15000 20000
ATG [µg/ml]
MFI[AnnexinV]
Thymoglobulin“ EpCAM+ Thymoglobulin“ EpCAM
-*
*
1 10 100
1000 0
5000 10000 15000
ATG [µg/ml]
MFI[AnnexinV]
Grafalon“ EpCAM+ Grafalon“ EpCAM
-*
0 10000 20000 30000 40000 50000
ATG [µg/ml]
MFI[AnnexinV]
Thymoglobulin“ EpCAM+ Thymoglobulin“ EpCAM -Grafalon“ EpCAM+ Grafalon“ EpCAM
-1 10 100
1000 0
5000 10000 15000 20000
ATG [µg/ml]
MFI[AnnexinV]
Thymoglobulin“ EpCAM+ Thymoglobulin“ EpCAM
-*
*
A
B
MFI [Annexin V]
ATG [µg/ml]
ATG EpCAM+ ATG EpCAM -ATLG EpCAM+ ATG EpCAM
-MFI [Annexin V] MFI [Annexin V] EpCAM+
EpCAM
-ATG [µg/ml] ATG [µg/ml]
ATLG ATG
47 4.6 Untersuchung des Apoptosemechanismus mittels
Pan-Caspaseinhibitor QVD
Zur weiteren Charakterisierung des Apoptosemechanismus wurde der Einfluss des Pan-Caspaseinhibitors QVD auf die Interaktion zwischen rATG und kultivierten humanen Thymusstromazellen mittels Durchflusszytometrie untersucht. Dabei konnte festgestellt werden, dass der Caspaseinhibitor QVD die durch ATG sowie die durch ATLG induzierte Apoptose in kultivierten humanen Thymusstromazellen nicht signifikant inhibieren konnte (siehe Abbildung 15).
Abbildung 15: rATG-induzierte Apoptose in EpCAM+ kultivierten, humanen Thymusstromazellen unter Zugabe des Pan-Caspaseinhibitors QVD.
Gezeigt sind durchflusszytometrische Messungen der Annexin V+ apoptotischen Zellen. Es ist die Kontrolle (nur rATG) im Vergleich zum Pan-Caspaseinhibitor QVD (plus rATG) dargestellt. Es zeigte sich keine signifikante Inhibition der Apoptose durch die Hinzugabe des Pan-Caspaseinhibitors QVD.
n=4.
4. 7 Antigenexpression auf der Jurkatzelllinie, frischen humanen Thymozyten und humanen kultivierten Thymusstromazellen
Um mögliche unerwünschte Effekte von ATG und ATLG auf humanes Thymusstroma zu erklären, wurde die Expression verschiedener Oberflächenmarker auf Jurkatzellen, frischen humanen Thymozyten und humanen kultivierten Thymusstromazellen
1 10 100 1000 1 10 100 1000 0
10 20 30 40
Konzentration in µg/ml
in %
Kontrolle QVD Thymoglobulin Grafalon
Apoptotische Zellen [%]
Kontrolle QVD
Konzentration [µg/ml]
Kontrolle QVD
ATG ATLG
48 untersucht. Wie in Abbildung 16 gezeigt, konnten mehrere Oberflächenmarker gefunden werden, welche auf Jurkatzellen und kultivierten humanen Thymusstromazellen (CD31, CD90, HLA-DR) oder auf frischen Thymozyten und kultivierten humanen Thymusstromazellen (CD31, HLA-DR) exprimiert werden. CD31 wurde auf 85% der Jurkatzellen und auf 13,4% der kultivierten humanen Thymusstromazellen exprimiert. CD90 wurde auf 80,1% der Jurkatzellen und auf 84,6% der kultivierten humanen Thymusstromazellen exprimiert. HLA-DR wurde von 25,3% der Jurkatzellen und von 20% der kultvierten humanen Thymusstromazellen exprimiert. Weitere Oberflächenmarker wie CD3, CD45, EpCAM sowie Anti-Fibroblasten Antikörper wurde nur entweder auf Jurkatzellen oder auf kultivierten humanen Thymusstromazellen gefunden (CD3: 93,8% auf Jurkatzellen, <1% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen; CD45: 97,9% auf Jurkatzellen, <1% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen; EpCAM: <0.05% auf Jurkatzellen, >20%
auf kultivierten humanen Thymusstromazellen; Anti-Fibroblasten Antikörper: <0.1%
auf Jurkatzellen, >20% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen). Als gemeinsame Oberflächenmarker von frischen Thymozyten und kultiviertem humanem Thymusstroma konnten CD31 (31,5% auf frischen Thymozyten und 13,4% auf kultivierten Thymusstromazellen) sowie HLA-DR (17,1% auf frischen Thymozyten und 25,3% auf kultivierten Thymusstromazellen) identifiziert werden. CD3, CD45, EpCAM und den Anti-Fibroblasten Antikörper konnten bei der Betrachtung frischer Thymozyten im Vergleich zu kultivierten humanen Thymusstromazellen nur auf jeweils einer der Zellgruppen gefunden werden (CD3: 83,3% auf frischen Thymozyten, <1% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen; CD45: 94,9% auf frischen Thymozyten,
<1% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen; EpCAM: <0,05% auf frischen Thymozyten, >20% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen; Anti-Fibroblasten Antikörper: >0.1% frischen Thymozyten, >20% auf kultivierten humanen Thymusstromazellen).
49
Abbildung 16: Expression verschiedener Oberflächenmarker auf Jurkatzellen, frischen humanen Thymozyten und kultivierten humanen Thymusstromazellen.
In dunkelgrau ist die Antikörperfärbung, in hellgrau die jeweilige Isotypkontrolle dargestellt. Gezeigt ist die MFI eines unabhängigen Experiments.