Basophile Granulozyten unterdrücken, durch ihre Sekretion von IL-4 und -6, die Proliferation von CD4+ T-Zellen in allogenen MLRs. Um zu testen, ob es neben der Proliferationsunter-drückung auch zu einer Verschiebung im T-Zellphänotyp kam, untersuchte ich den Überstand dieser MLR. Die Analyse zeigte, dass die von Basophilen Granulozyten sezernierten Zytokine zu einer Verschiebung des T-Zellphänotyps führten.
Zunächst fiel ins Auge, dass sowohl Bc als auch B6 Basophile Granulozyten die Menge des, von T-Zellen sezernierten TH1-Zytokins IFN-γ signifikant reduzierten. B6 Basophile Granulozyten reduzierten die Sekretion stärker als Bc Basophile Granulozyten (Abbildung 6.13 A und B).
Reduzierte IFN-γ Konzentrationen deuteten auf eine Verschiebung des T-Zellphänotyps hin, da TH1 Zellen durch die Sekretion von IFN-γ charakterisiert sind. Die Zugabe von IL-3 hatte keinen Einfluss auf die IFN-γ Konzentration in Ansätzen mit Bc Basophilen Granulozyten.
Bei B6 Basophilen Granulozyten führte die Addition dieses Zytokins wieder zu einem leichten Anstieg der IFN-γ Konzentration. Wurden IL-4, IL-6 oder beide Zytokine durch die Zugabe eines neutralisierenden Antikörpers gebunden, erhöhte sich die Ausschüttung von IFN-γ durch
Abbildung 6.13:Basophile Granulozyten vermindern die Ausschüttung des TH1-Zytokins IFN-γ.
Analyse des Zellkulturüberstands der allogenen MLR.ABalb/c (Bc) Basophile Granulozyten (Baso Bc) senken den IFN-γ-Spiegel im Überstand. Die Zugabe eines neutralisierenden Anti-körpers gegen IL-4 (αIL-4 + Baso Bc) oder IL-6 (αIL-6 + Baso Bc) hebt diesen Effekt wieder auf. Aktivierte Basophile Granulozyten (IL-3, schwarze Balken) verstärkten die Reduktion von IFN-γ.BC57BL/6 (B6) Basophile Granulozyten hatten die gleiche Wirkung, reduzierten im unaktivierten Zustand die Konzentration jedoch stärker als Bc Basophile Granulozyten.
Ebenso wie bei Bc Basophilen Granulozyten führte die Zugabe vonαIL-4 oderαIL-6 zur Stei-gerung des IFN-γ-Wertes. Sterne direkt über den Balken geben die Signifikanz zum Ansatz ohne Basophile wieder. (n=3)
Neben der Reduktion der IFN-γKonzentration führte die Addition von Basophilen Granulozyten zu einem Anstieg des TH2-Zytokins IL-6. Dieses wird von Basophilen Granulozyten sezerniert und kann die Entwicklung von TH2-Zellen fördern. Die Aktivierung der Basophilen Granulozyten über IL-3 erhöhte die nachweisbare Menge von IL-6. In Ansätzen, die B6 Basophile Granulo-zyten enthielten, war mehr IL-6 nachweisbar als in Ansätzen mit Bc Basophilen GranuloGranulo-zyten (Abbildung 6.14 A und B).
Abbildung 6.14:Bc (A) und B6 (B) Basophile Granulozyten führten zur Ausschüttung von IL-6. Die mittels ELISA gemessenen IL-6 Konzentrationen stiegen bei IL-3 Zugabe und bei Neutralisation von IL-4. Sterne direkt über den Balken geben die Signifikanz zum Ansatz ohne Basophile wieder. (n=3)
Darüber hinaus führten Basophile Granulozyten zu einer verstärkten Sekretion des TH2 Schlüs-selzytokins IL-4. Dieses Zytokin wird sowohl von Basophilen Granulozyten als auch von T-Zellen sezerniert. Wie auch bei IL-6 waren die nachgewiesenen Konzentrationen von IL-4 höher, wenn Basophile Granulozyten aus B6 Mäusen in der Kultur enthalten waren. IL-3 erhöhte die IL-4 Konzentration unabhängig von der Art der zugesetzten Basophilen Granulozyten. Wie aus Ab-bildung 6.10 hervorgeht, hatte die Neutralisation von IL-6 keinen Einfluss auf die Unterdrückung der T-Zellteilung, jedoch führte die Blockade dieses Zytokins zu einer verminderten Ausschüt-tung von IL-4 (Abbildung 6.15 A und B).
Abbildung 6.15:Basophile Granulozyten verstärken die Ausschüttung des TH2 Zytokins IL-4. Ana-lyse des Zellkulturüberstands der allogenen MLR. A Balb/c (Bc) Basophile Granulozyten erhöhen die Ausschüttung des TH2 Zytokins IL-4 (Baso Bc), vor allem nach Aktivierung der Basophilen Granulozyten mit IL-3 (Baso Bc, schwarzer Balken). Die Zugabe vonαIL-6 senkte die Sekretion von IL-4 signifikant (Baso Bc).BIn Ansätzen mit B6 Basophilen Granulozyten wurde unabhängig vom Aktivierungszustand der Basophilen Granulozyten wesentlich mehr IL-4 ausgeschüttet. Auch hier reduzierte die Blockade von IL-6 die IL-4 Konzentration. Sterne direkt über den Balken geben die Signifikanz zum Ansatz ohne Basophile wieder. (n=3)
Auch das von TH2-Zellen sezernierte Zytokin IL-13 war in sehr hohen Konzentrationen in den Überständen nachweisbar, wenn sich Basophile Granulozyten in der Kultur befanden. Ansätze mit B6 Basophilen Granulozyten wiesen höhere IL-13 Konzentrationen auf als Ansätze mit Bc Basophilen Granulozyten. Dies ist ein weiteres Indiz für einer Verschiebung des T-Zellphänotyps durch Basophile Granulozyten in Richtung TH2, da IL-13 von T-Zellen, nicht aber von Baso-philen Granulozyten sezerniert wird. Die Sekretion von IL-13 ließ sich durch die Blockade von IL-4, unabhängig von der Art der zugesetzten Basophilen Granulozyten, stark reduzieren. Die Blockade von IL-6 führte nur bei Bc Basophilen Granulozyten zu einer verringerten IL-13 Menge im Überstand (Abbildung 6.16 A und B).
Abbildung 6.16:Basophile Granulozyten steigern die Sekretion des TH2-Zytokins IL-13 in der MLR. ADie Konzentration des TH2-Zytokins IL-13 stieg, wenn Bc Basophile Granulozyten in den Ansätzen vorhanden waren. Die Zugabe von IL-3 erhöhte diesen Wert. Die Ausschüttung von IL-13 ließ sich sowohl durch die Neutralisation von IL-4 als auch durch IL-6 unterbinden.
B B6 Basophile Granulozyten führten, unabhängig von ihrer Aktivierung (Baso B6, weißer bzw. schwarzer Balken), zu einer stärkeren IL-13 Abgabe als Bc Basophile Granulozyten. Die Sekretion von IL-13 ließ sich nur durch die Neutralisation von IL-4 unterbinden (αIL-4 + Baso B6, weißer bzw. schwarzer Balken). αIL-6 Antikörper hatten keinen Einfluss auf die IL-13 Konzentration. Sterne direkt über den Balken geben die Signifikanz zum Ansatz ohne Basophile wieder. (n=3)
Da Basophile Granulozyten in MLR-Ansätzen sowohl die T-Zellproliferation unterdrückten als auch die Bildung von TH2-Zytokinen und -Zellen förderten und beide genannten Eigenschaften sich positiv auf den Verlauf einer GvHD auswirken könnten, untersuchte ich im Anschluss den Einfluss Basophiler Granulozyten in einem Mausmodell der akuten GvHD.