Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Arsentrioxid in malignen lymphatischen und myeloischen Zellinien unterschiedlichen Differenzierungsgrades: CD95-unabhängige, Caspasen- und Mitochondrien-abhängige Apoptose-Induktion, Apoptose-unabhängige Prolifer

Aus dem Universitätsklinikum Benjamin Franklin

der Freien Universität Berlin

Medizinische Klinik III (Hämatologie, Onkologie und Transfusionsmedizin)

Geschäftsführender Direktor: Prof. Dr. E. Thiel

Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Arsentrioxid

in malignen lymphatischen und myeloischen Zellinien

unterschiedlichen Differenzierungsgrades:

CD95-unabhängige, Caspasen- und Mitochondrien-abhängige Apoptose-Induktion,

Apoptose-unabhängige Proliferationsinhibition

und Expression Zytostatikaresistenz-vermittelnder Proteine

Inaugural-Dissertation

zur

Erlangung der Doktorwürde zum Doctor rerum medicarum

des Fachbereichs Humanmedizin

der Freien Universität Berlin

vorgelegt von: Markus Thomas Rojewski

aus

: Baden-Baden

Referent:

Prof. Dr. med. Hubert Schrezenmeier

Korreferent: Prof. Dr. med. J. Oertel

Gedruckt mit Genehmigung des Fachbereichs Humanmedizin der

Freien Universität Berlin

Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von

Arsentrioxid in

malignen lymphatischen und myeloischen Zellinien

unterschiedlichen Differenzierungsgrades:

CD95-unabhängige,

Caspasen- und Mitochondrien-abhängige Apoptose-Induktion,

Apoptose-unabhängige Proliferationsinhibition

und Expression Zytostatikaresistenz-vermittelnder Proteine

As

O

As

O

As

O

O

O

O

As

Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Arsentrioxid – Inhaltsverzeichnis

I

1. S

UMMARY

1

2. Z

USAMMENFASSUNG

4

3. E

INLEITUNG

7

3.1

D

V

A

M

7

3.1.1

G

H

7

3.1.2

K

L

F

-A

-B

(FAB)-

W

-H

-O

(WHO)-K

8

3.1.3

A

APL

9

3.1.4

A

N

-P

-L

12

3.1.5

D

V

A

O

13

3.1.6

W

V

A

M

14

3.1.7

D

B

Z

-R

T

L

14

3.2

A

15

3.2.1

A

– N

– P

– A

: D

A

15

3.2.2

P

B

B

A

16

3.2.3

I

A

18

3.2.3.1

D

R

-L

-B

A

21

3.2.3.2

D

Z

A

24

3.2.4

W

A

P

24

3.2.4.1

M

P

24

3.2.4.2

P

,

Z

24

3.2.4.3

Z

P

25

3.2.4.4

M

P

29

3.2.5

NOS

A

30

3.2.6

M

N

A

30

3.2.6.1

A

V-FITC

30

3.2.6.2

7-A

-A

D (7–AAD)

31

3.2.6.3

N

B

C

-A

31

3.2.7

B

A

31

3.3

E

A

-W

Z

T

(15;17)

-

Z

32

3.3.1

I

A

32

3.3.2

E

Z

Z

34

3.3.3

Z

A

35

3.3.4

Z

36

3.3.5

W

W

A

(

E

, G

, A

)

36

4. Z

IELSETZUNG

37

5. M

ATERIALIEN

39

5.1

E

G

39

5.2

G

, F

Z

39

5.3

P

S

39

5.4

R

Z

41

5.5

Z

42

5.6

F

42

5.7

A

42

5.8

A

V-FITC, A

P

44

5.9

V

44

Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Arsentrioxid – Inhaltsverzeichnis

II

6. M

ETHODEN

45

6.1

Z

45

6.2

A

Z

45

6.3

I

Z

V

45

6.4

A

Z

46

6.5

B

Z

46

6.6

A

-I

Z

A

Z

46

6.7

A

-I

Z

M

-A

-H

-CD95-A

47

6.8

C

-I

B

-D-FMK, Z-A

-2,6-DBMK, Z-D(OM

)E(OM

)VD(OM

)-FMK

Z-VAD-FMK

47

6.9

A

V-FITC-F

48

6.10

7–AAD F

48

6.11

A

V-FITC/7–AAD-D

49

6.12

M

T

R

CMXR

-

. M

T

R

CM-H

XR

-F

49

6.13

JC-1-F

N

Z

R

50

6.14

D

-F

N

ROS (

)

50

6.15

N

NO-R

51

6.16

P

P

L

G

D

-F

51

6.17

FITC-VAD-FMK

FITC-YVADAPK-DNP-F

51

6.18

FITC-VAD-FMK/ M

T

R

CMXR

D

52

6.19

A

V-FITC/ M

T

R

CMXR

D

52

6.20

N

P

C

-3, P

(ADP-R

)

(PARP), GDP-D

-I

(D4-GDI),

53

K

67

52

6.21

N

P

LRP

53

6.22

PKH26-M

54

6.23

P

-F

54

6.24

N

O

P-G

(MDR-1), CD90, CD95,

TNFRI

TNFRII

55

6.25

B

F

D

56

6.26

S

A

58

7. E

RGEBNISSE

59

7.1

A

A

V

Z

-

Z

-

Z

D

59

7.1.1

A

A

MYELOISCHEN

Z

59

7.1.2

A

A

MYELOISCHEN

Z

-

Z

62

7.1.3

D

A

-

A

B

Z

-

P

P-G

(MDR-1)

66

7.1.4

A

E

P-G

(MDR-1)-E

66

7.1.5

A

E

LRP-E

70

7.1.6

D

A

-

A

B

D

T

-1 (CD90)

70

7.1.7

E

Z

S

A

73

7.1.8

V

N

Z

B

Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Arsentrioxid – Inhaltsverzeichnis

III

7.2

D

A

P

A

-I

Z

75

7.2.1

D

A

-B

Z

P

. V

Z

76

7.2.2

D

A

-

P

DER

A

-I

77

7.2.3

D

A

-

P

E

E

P

K

67

79

7.2.4

D

A

-

P

P

Z

Z

82

7.3

U

W

A

-

A

: C

-A

B

M

85

7.3.1

D

A

C

A

-

A

:

S

P

-3, P

(ADP-

)P

-1 (PARP)

GDP-D

-I

(D4-GDI)

85

7.3.2

D

A

C

A

-

A

:

S

C

-S

P

P

L

G

D

B

C

-I

FITC-VAD-FMK

FITC-YVADAPK-DNP.

90

7.3.3

D

A

-B

Z

Z

MITOCHONDRIALEN

R

92

7.3.4

D

A

-B

Z

B

ROS

(

)

96

7.3.5

C

-I

A

V-FITC

A

-

A

CCRF-CEM-

J

-Z

,

B

A

.

99

7.3.6

D

A

-B

Z

B

NO-R

108

7.3.7

A

E

P

53

NUR IN EINIGEN

A

-

Z

109

7.4

D

A

-

A

B

CD95-SPEZIFISCHER

P

CD95-

.

114

7.4.1

D

A

-

A

CD95 (F

)-B

115

7.4.2

A

E

CD95 (F

)-E

115

7.4.3

D

CCRF-CEM

J

-Z

A

-

A

B

CD95 (F

)

119

7.4.4

T

A

-

A

-

A

-CD95-A

119

7.4.5

CD95-B

123

7.4.6

D

TNFRI-

TNFRII-E

A

127

7.5

U

Z

P

,

A

-T

V

R

S

„A

B

AML

R

,

-

Z

> 70 J

K

S

-P

“

,

S

A

133

8. D

ISKUSSION

136

8.1

I

A

-

Z

UNTERSCHIEDLICHEN

D

136

8.2

I

A

-

Z

-RESISTENTEN

Z

138

8.3

V

N

Z

B

Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus von Arsentrioxid – Inhaltsverzeichnis

IV

8.4

D

A

P

A

-I

Z

141

8.5

D

A

-I

A

B

ROS

A

C

,

CD95-

C

-

143

8.5.1

D

A

C

A

143

8.5.2

M

U

C

-A

:

53-A

147

8.5.3

D

A

A

CD95-

FÜHRT ZU KEINER

R

CD95

TNFR

148

8.5.4

D

B

ROS

NOS

A

150

8.6

M

A

-I

A

152

9. A

BKÜRZUNGEN UND

S

YNONYME

154

10. A

PPENDIX

158

10.1

M

158

10.2

A

A

160

11. L

ITERATUR

161

12. E

RKLÄRUNG ZU EIGENEN

P

UBLIKATIONEN

181

13. W

EITERE EIGENE

P

UBLIKATIONEN

183

14. D

ANKSAGUNG

185