• Keine Ergebnisse gefunden

Analytische Chemie

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Aktie "Analytische Chemie"

Copied!
5
0
0

Wird geladen.... (Jetzt Volltext ansehen)

Volltext

(1)

Herbstsemester 2013

Analytische Chemie

(für Biol. / Pharm. Wiss.)

Teil: Trenntechniken (Chromatographie, Elektrophorese)

Dr. Martin Pabst

ETH Zurich | Dr. Thomas Schmid | Dr. Martin Pabst, martin.pabst@org.chem.ethz.ch

HCI D323

martin.pabst@org.chem.ethz.ch http://www.analytik.ethz.ch/

Übersicht Elektrophorese:

2

• Gel-Elektrophorese

• Agarose-Gelelektrophorese, Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE)

• Natriumdodecylsulfat-PAGE (SDS-PAGE)

• Kapillarelektrophorese (CE)

• Kapillarzonenelektrophorese (CZE)

• Mizellare Elektrokinetische Chromatographie (MEKC)

(2)

Herbstsemester 2013 ETH Zurich | Dr. Thomas Schmid, Dr. Martin Pabst | martin.pabst@org.chem.ethz.ch 3

Kapillarelektrophorese

(capillary electrophoresis = CE)

Migration eines Ions im elektrischen Feld E

Analyten müssen „geladen“ sein (basische oder acide Analyten) Elektrophorese ist keine

Chromatographie!

Adenosine Triphosphate Neuraminsäuren

CE: Theoretische Grundlagen

µ EP = v

E = Geschwindigkeit eines Ions

Elektrische Feldstärke = e 6 π

1 η

z r

e ... Elementarladung

η ... Viskosität der Pufferlösung

z ... Ladung des Ions

r ... Hydrodynamischer Durchmesser des Ions

Elektrophoretische Mobilität µ EP eines Ions im elektrischen Feld E

K o n s ta n te P u ff e rl ö s u n g Io n ( A n a ly t)

Trennung aufgrund von Ladung und

Grösse der Ionen

(3)

Herbstsemester 2013 ETH Zurich | Dr. Thomas Schmid, Dr. Martin Pabst | martin.pabst@org.chem.ethz.ch

CE: Theoretische Grundlagen

5

Migration der Ionen im elektrischen Feld

+

A n o d e K a th o d e

Nach dem Probeneinlass wird Spannung angelegt (bis zu 30.000V) Analytionen trennen sich nach Ladung (und Grösse)

Analyt - Analyt +

Analyt -

Analyt +

Analyt +

Analyt -

µ

EP=v

E=

Geschwindigkeit eines Ions Elektrische Feldstärke

= e

6 π

1 η

z r

Anionen wandern in Richtung Anode und

Kationen in Richtung Kathode

Man würde in diesem Fall nur die Kationen detektieren…

Probeneinlass

Analyt -

Detektor

CE: Theoretische Grundlagen

6

Elektroosmotischer Fluss (EOF) bei Quartzkapillaren

+

A n o d e K a th o d e

EOF

Aufgrund der negativ geladenen Innenwand der Quarzkapillare bildet sich ein Fluss der Pufferlösung in Richtung Kathode aus, der elektroosmotische Fluss (EOF).

Quarzkapillare (SiO

2

)

Quarzkapillare (SiO

2

)

Analyt - Analyt +

(4)

Herbstsemester 2013 ETH Zurich | Dr. Thomas Schmid, Dr. Martin Pabst | martin.pabst@org.chem.ethz.ch

Kapillarzonenelektrophorese (CZE)

7

K a ti o n e n N e u tr a le M o le k ü le (u n g e tr e n n t) A n io n e n

• Trennung von

Kationen und Anionen

Neutrale Moleküle verlassen ungetrennt mit dem EOF die Kapillare

• Detektor wegen EOF kathodenseitig angebracht

• Nur Anionen, die schneller als der EOF wandern, erreichen den Detektor nicht

Aufbau eines CE Systems:

Fused silica capillaries High voltage power supply

(with platin electrodes)

2 x glass vials

A) B)

C)

A

B B

C

D)

D) Detector

(5)

Herbstsemester 2013 ETH Zurich | Dr. Thomas Schmid, Dr. Martin Pabst | martin.pabst@org.chem.ethz.ch 9

Detektion:

In der Regel UV Detektoren Kopplung an Massen-

Spektrometrie ist schwierig

Trennung:

Spannung (+/-) Kapillarlänge Puffer

Trennung von Metaboliten:

75cm Kapillare

Voltage: -15/-20/-25/-30 Ammonia bicarbonate EOF block, pumping

CE: Beispiel

Elektropherogram

10

Detektion:

In der Regel UV Detektoren Kopplung an Massen-

Spektrometrie ist schwierig

CE: Beispiel

Referenzen

ÄHNLICHE DOKUMENTE

• Negativladung !ep entgegensetzt Puffenlösung !eof => Micelle bewegt sich fast nicht oder gar leicht umzukehren, wie stationäre Phase. • Micelle als reine stationäre Phase,

Another prize in analytical chemistry was given to Jaroslav Heyrovsky from Prague in 1959 for his development of polarographic methods of analysis.. In these a dropping

Stationäre Phase: entweder feste Adsorbentien oder flüssige Film Analyten:3. • ausreichenden

alcohols, alkaloids, aromatic hydrocarbons, drugs, FAMEs, flavors, fuels, halogenates, herbicides, pesticides, petroleum products, solvents, waxes, general purposes. 50% dimethyl-

Batch: einfach, aber geringe Effizienz, RT Soxhlet: lange Zeit, hohe Effizienz, hohe T Soxtec: kurze Zeit, hohe Effizienz, hohe T Ultrashall: kurze Zeit, hohe Effizienz, RT.

EOF (Puffenlösung) => Mizelle bewegt sich fast nicht oder gar leicht umzukehren, wie stationäre

Stationäre Phase: entweder feste Adsorbentien oder flüssige Film

Die Art (qualitativ) und Anzahl (quantitativ) der Atome allein (Elementanalytik) oder zusammen mit ihrer Anordnung oder Verbindung untereinander als Molekül (Molekülanalytik) im