Expression von CD152 (CTLA-4) auf T-Lymphozyten im Melanom und im Blut nach Hyperthermie

Aus dem Bernhard-Nocht-Institut für Tropenmedizin,

Hamburg

Sektion für Medizinische Mikrobiologie, Abteilung für Immunologie

Prof. Dr. med. Bernhard Fleischer

Expression von CD152 (CTLA-4)

auf T-Lymphozyten im Melanom

und im Blut nach Hyperthermie

Dissertation

Zur Erlangung des Grades eines Doktors der Medizin

dem Fachbereich Medizin der Universität Hamburg

vorgelegt von

Athanasios Tsianakas

aus Hamburg

Hamburg , 2007

Angenommen vom Fachbereich Medizin

der Universität Hamburg am: 03.06.2008

Veröffentlicht mit Genehmigung des Fachbereichs

Medizin der Universität Hamburg

Prüfungsausschuss, der/die Vorsitzende: Prof. Dr. B. Fleischer

Prüfungsausschuss: 2. Gutachter/in: Prof. Dr. V. Steinkraus

Prüfungsausschuss: 3. Gutachter/in: Prof. Dr. B. Bröker

Inhaltsverzeichnis

1 Einleitung 3 1.1 Das Immunsystem 3 1.2. T-Zell-Aktivierung 5 1.2.1 Kostimulation 6

1.3 Abschalten der T-Zellantwort 8 1.3.1 CTLA-4 9 1.3.2 CTLA-4 und seine Rolle als negativer Regulator der 11

T-Zellantwort 1.3.3 CTLA-4 und seine Bedeutung in der Tumortherapie 16

1.4 Hyperthermie in der Tumortherapie 19

1.5 Ziel der Arbeit 20

2 Material und Methoden 22

I. Material 22

2.1 Chemikalien 22

2.2 Glas- und Plastikware 22

2.3 Laborgeräte 22

2.4 Software-Programme 23

2.5 Zellbiologische und immunhistochemische Arbeiten 23

2.5.1 Kulturmedien, Puffer und Stammlösungen 25

2.5.2 Antikörper 26

2.6 Melanomgewebe 27

2.7 Hyperthermie-PBL 27

II. Methoden 28

2.8 Zellbiologische Methoden 28

2.8.1 Auftauen und Einfrieren eukaryontischer Zellen 28

(Kryokonservierung) 2.8.2 Zellzählung 29

2.8.3 Isolierung peripherer Blutlymphozyten (PBL) 29

2.8.3.1 Isolierung von T-Zellen 30

2.8.4 Messung der Zellproliferation durch den Einbau von 31 radioaktivem Thymidin

2.9 Zytozentrifugation 32

2.10 Melanome und deren Aufbereitung 32

2.10.1 Aufbereitung der Melanome 32

2.10.2 Kryostatschnitte 33

2.10.3 Beschichtung der Objektträger 33

2.11 Immunhistochemische Färbemethode 33

2.11.1 Indirekte immunhistologische Doppelfärbung 33

2.11.2 Anfertigen von Dauerpräparaten 35

2.12 Auswertung und Dokumentation 35

2.12.1 Auswertung der immunhistologischen Präparate 35

2.12.2 Photographische Dokumentation 36

2.12.3 Photographische Auswertung mit Softwareunterstützung 36 3 Ergebnisse 37

3.1 Auswertung der Melanompräparate 37

3.2 Auswertung der Hyperthermie-behandelten Patienten 40

3.3 Hyperthermie-Proliferationstests 43

3.4 Verbesserung und Objektivierung der Auszähltechnik CTLA-4- 47

positiver Zellen 3.4.1 Vorarbeiten 47

3.4.2 Vergleich der Computer-gestützten mit der manuellen 50

Auszählung von Immunfluoreszenzfärbungen 4 Diskussion 52

4.1 CTLA-4 auf tumorinfiltrierenden Lymphozyten von Melanomen 52

4.2 CTLA-4-Expressionsdynamik auf peripheren Blutlymphozyten von 54 Hyperthermie-behandelten Tumorpatienten 4.3 Einführung einer Computer-gestützten Auswertungsmethode von 55

Fluoreszenz-markierten Zellen 5 Zusammenfassung 57 6 Literaturverzeichnis 60 7 Danksagung 69 8 Lebenslauf 70 9 Anhang 71 10 Erklärung 84

Einleitung 3

1

1

E

Ei

in

nl

le

ei

it

tu

un

n

g

g

1 1..11 DDaassIImmmmuunnssyysstteemm D Daass IImmmmuunnssyysstteemm ddeess MMeennsscchheenn hhaatt ddiiee AAuuffggaabbee,, ddiieesseenn vvoorr sscchhääddlliicchheenn uunndd k krraannkkhheeiittsseerrrreeggeennddeenn MMiikkrroooorrggaanniissmmeenn wwiiee VViirreenn,, BBaakktteerriieenn,, PPiillzzeenn uunndd P Paarraassiitteenn zzuu sscchhüüttzzeenn.. DDaabbeeii llaasssseenn ssiicchh MMeecchhaanniissmmeenn ddeerr aannggeebboorreenneenn uunndd e errwwoorrbbeenneenn RReessiisstteennzz vvoonneeiinnaannddeerr ttrreennnneenn.. DDiiee aannggeebboorreennee ((uunnssppeezziiffiisscchhee)) R Reessiisstteennzz uummffaasssstt ddiiee rreeiinn mmeecchhaanniisscchheenn AAbbwweehhrrbbaarrrriieerreenn ddeerr HHaauutt uunndd ddeerr S Scchhlleeiimmhhääuuttee,, ddiiee PPhhaaggoozzyytteenn ((MMaakkrroopphhaaggeenn uunndd GGrraannuulloozzyytteenn)),, nnaattüürrlliicchhee K Kiilllleerrzzeelllleenn((NNKK--ZZeelllleenn))ssoowwiieeddaassKKoommpplleemmeennttssyysstteemm.. D Diiee eerrwwoorrbbeennee ((ssppeezziiffiisscchhee)) RReessiisstteennzz iisstt eeiinn aaddaappttiivveess SSyysstteemm,, ddaass ssiicchh iinn ddiiee z zwweeiiFFaammiilliieennddeerrBB--uunnddTT--LLyymmpphhoozzyytteennaauuffttrreennnneennlläässsstt.. D DiieeBB--LLyymmpphhoozzyytteenn ttrraaggeenniihhrreenn NNaammeennaauuffggrruunndd iihhrreessbbeeii VVööggeellnnggeeffuunnddeenneenn E Ennttwwiicckklluunnggssoorrtteess ((bbuurrssaa ffaabbrriicciiii)).. SSiiee hhaabbeenn ddiiee AAuuffggaabbee,, ssppeezziiffiisscchhee llöösslliicchhee A Annttiikköörrppeerr ggeeggeenn FFrreemmddaannttiiggeennee zzuu pprroodduuzziieerreenn ((hhuummoorraallee AAbbwweehhrr)).. SSiiee u unntteerrlliieeggeenn ddaabbeeii ddeerr KKoonnttrroollllee dduurrcchh TT--LLyymmpphhoozzyytteenn.. DDiieessee eerrhhiieelltteenn iihhrreenn N Naammeenn aabbggeelleeiitteett vvoonn iihhrreemm RReeiiffuunnggssoorrggaann,, ddeemm TThhyymmuuss.. EEiinn TT--LLyymmpphhoozzyytt e errhhäälltt sseeiinn SSttiimmuullaattiioonnssssiiggnnaall wwiieeddeerruumm vvoonn AAnnttiiggeenn--pprräässeennttiieerreennddeenn ZZeelllleenn ( (aannttiiggeenn pprreesseennttiinngg cceellll,, AAPPCC)) wwiiee ddeenn ddeennddrriittiisscchheenn ZZeelllleenn uunndd ddeenn M Maakkrroopphhaaggeenn.. DDaabbeeii pprräässeennttiieerrtt eeiinnee ssoollcchhee ZZeellllee iihhrr AAnnttiiggeenn iinn FFoorrmm vvoonn P Peeppttiiddeenn,, ggeebbuunnddeenn aann mmeemmbbrraannssttäännddiiggee MMHHCCIIII--MMoolleekküüllee ((mmaajjoorr hhiissttoo- -c coommppaattiibbiilliittyyccoommpplleexx;;bbeeiimmMMeennsscchheennaauucchhHHLLAA ffüürrhhuummaannlleeuukkooccyytteeaannttiiggeenn)) g geennaannnntt)) ddeemm ffüürr ddiieesseess AAnnttiiggeenn ssppeezziiffiisscchheenn TT--ZZeellll--RReezzeeppttoorr ((TTCCRR)).. DDiieessee g grrooßßeeKKllaasssseeddeerr MMHHCCIIII--kkoonnttaakkttiieerreennddeenn TT--LLyymmpphhoozzyytteennttrraaggeennCCDD44--MMoolleekküüllee ( (cclluusstteerr ooff ddiiffffeerreennttiiaattiioonn 44)) aauuff iihhrreerr MMeemmbbrraannoobbeerrffllääcchhee.. DDiieessee ZZeelllleenn nneennnntt m maannddaahheerraauucchhCCDD44++ ooddeerr TT--HHeellffeerr--ZZeelllleenn.. SSiieesscchhüütttteennnnaacchhiihhrreerrAAkkttiivviieerruunngg v veerrsscchhiieeddeennee ZZyyttookkiinnee wwiiee IILL--22 ((IInntteerrlleeuukkiinn 22)),, IILL--44,, IILL--66,, IILL--1100 uunndd IINNFF--γγ ( (IInntteerrffeerroonnγγ))aauuss,,ddiieeffüürrddiieeSSttiimmuullaattiioonnvvoonnBB--ZZeelllleenn,,MMaakkrroopphhaaggeennuunnddTT--ZZeellll- -W Waacchhssttuummeesssseennttiieellllssiinndd.. DDaabbeeiilläässssttssiicchhbbeeoobbaacchhtteenn,, ddaasssseessddrreeiiGGrruuppppeenn vvoonn C CDD44--ZZeelllleennmmiittuunntteerrsscchhiieeddlliicchheennZZyyttookkiinnmmuusstteerrnnggiibbtt::

Einleitung 4 1 1.. DDiiee TT--HHeellffeerr--11--ZZeelllleenn ((TThh11)),, ddiiee cchhaarraakktteerriissttiisscchheerrwweeiisseeIILL--22,, IILL- -3 3,, TTNNFFββ ((TTuummoorrnneekkrroosseeffaakkttoorr--ββ)) uunndd IIFFNNγγpprroodduuzziieerreenn,, wwaass vvoorr aalllleemm M Maakkrroopphhaaggeenn ssttiimmuulliieerrtt,, ssiicchh ggeeggeenn iinnttrraazzeelllluulläärree EErrrreeggeerr wwiiee bbeeiissppiieellsswweeiissee M MyykkoobbaakktteerriieennooddeerraauucchhVViirreennzzuuwweehhrreenn.. 2 2.. DDiieeTT--HHeellffeerr--22--ZZeelllleenn((TThh22))sseezzeerrnniieerreennttyyppiisscchheerrwweeiisseeIILL--44,,IILL--55,, I ILL--66,, IILL--99,, IILL--1100 uunndd IILL--1133,, wwaass ddiiee PPrroodduukkttiioonn vvoonn IIggEE uunndd ddiiee BBiilldduunngg e eoossiinnoopphhiilleerr GGrraannuulloozzyytteenn aannrreeggtt.. DDiieessee VVoorrggäännggee ssiinndd ffüürr ddeenn OOrrggaanniissmmuuss w wiicchhttiigg,,uummssiicchheeffffeekkttiivvggeeggeennWWüürrmmeerr((HHeellmmiinntthheenn))uunnddeexxttrraazzeelllluulläärreeEErrrreeggeerr z zuuwweehhrreenn.. 3 3.. DDiiee rreegguullaattoorriisscchheenn TT--ZZeelllleenn ((TTrreegg)),, wweellcchhee eeiinneenn iimmmmuunn- -s suupppprriimmiieerreennddeennEEffffeekkttaauussüübbeenn.. D Diiee TThh11 uunndd TThh22--ZZeelllleenn hheemmmmeenn ssiicchh dduurrcchh iihhrr ZZyyttookkiinnmmuusstteerr ggeeggeennsseeiittiigg,, ssoo d daassssbbeeiieeiinneerrIImmmmuunnaannttwwoorrtteeiinnTTyyppddoommiinniieerrtt.. D DiieeGGrruuppppee ddeerrTTrreegg eerrlleebbtteeiinn ddeenn lleettzztteenn JJaahhrreenn eeiinnee rreeggeellrreecchhttee RReennaaiissssaannccee.. L Laauutteettee iihhrr hhiissttoorriisscchheerr NNaammee iinn ddeerr 7700eerr uunndd 8800eerr JJaahhrreenn nnoocchh TT- -S Suupppprreessssoorrzzeelllleenn,, ssoo wweerrddeenn ssiiee sseeiitt MMiittttee ddeerr 9900eerr JJaahhrree aallss TT--rreegguullaattoorriisscchhee L Lyymmpphhoozzyytteenn ((TTrreegg--ZZeelllleenn)) bbeezzeeiicchhnneett.. IIhhrr AAnntteeiill aann ddeerr CCDD44--TT--ZZeellllppooppuullaattiioonn b beettrrääggtt 55--1100%% ((LLee eett aall..,, 22000077)).. IIhhrree FFuunnkkttiioonn lliieeggtt iimm iimmmmuunniinnhhiibbiittoorriisscchheenn B Beerreeiicchh.. DD..hh.. ssiiee ssiinndd ffüürr ddiiee DDäämmppffuunngg ddeerr EEnnttzzüünndduunnggssrreeaakkttiioonneenn ddeess I Immmmuunnssyysstteemmss vveerraannttwwoorrttlliicchh.. IInnssbbeessoonnddeerree oobblliieeggtt iihhnneenn ddiiee AAuuffggaabbee ddeerr V Veerrhhiinnddeerruunngg vvoonn AAuuttooiimmmmuunneerrkkrraannkkuunnggeenn wwiiee bbeeiissppiieellsswweeiissee ddeerr R Rhheeuummaattooiiddeenn AArrtthhrriittiiss.. EEiinnee SSuubbppooppuullaattiioonn ddeerr TTrreegg iisstt dduurrcchh ddiiee kkoonnssttiittuuttiivvee E Exxpprreessssiioonn vvoonn CCDD2255 ggeekkeennnnzzeeiicchhnneett ((CCDD44++CCDD2255++ TTrreegg)).. SSiiee wweerrddeenn h haauuppttssääcchhlliicchhiimmTThhyymmuussggeebbiillddeettuunnddeennttsstteehheennbbeerreeiittssiinnddeenneerrsstteennTTaaggeennnnaacchh G Geebbuurrtt.. DDiiee TTrreegg--ZZeelllleenn wweeiisseenn zzuuddeemm ttyyppiisscchheerrwweeiissee eeiinnee kkoonnssttiittuuttiivvee E Exxpprreessssiioonn vvoonn GGIITTRR ((gglluuccooccoorrttiiccooiidd--iinndduucceedd TTNNFFRR ffaammiillyy--rreellaatteedd ggeennee)),, C CTTLLAA--44,,CCDD4455RRBBlloowwCCDD6622LLssoowwiieevvoonnFFooxxPP33--((XX--lliinnkkeeddFFoorrkkhheeaadd//wwiinnggeeddhheelliixx t trraannssccrriippttiioonnffaaccttoorr))aauuff((ÜÜbbeerrssiicchhttCCeessaannaaeettaall..,,22000066;;LLeeeettaall..,,22000077)).. I ImmGGeeggeennssaattzzzzuuddeennnnaattüürrlliicchhvvoorrkkoommmmeennddeennTTrreeggggiibbtteessaauucchh ddiiee GGrruuppppeeddeerr i inndduuzziieerrbbaarreennrreegguullaattoorriisscchheennTT--ZZeelllleenn..DDiieesseewweerrddeennjjeennaacchhZZyyttookkiinn--EExxpprreessssiioonn a allss TTrr11-- ((ZZyyttookkiinnee IILL1100 uunndd IIFFNNγγ))uunndd TThh33--ZZeelllleenn ((ZZyyttookkiinn TTGGFFββ)) bbeezzeeiicchhnneett.. S Siiee eennttsstteehheenn wwäähhrreenndd eeiinneerr IImmmmuunnrreeaakkttiioonn,, uumm eeiinnee ppaatthhoollooggiisscchh vveerrlläännggeerrttee

Einleitung 5 I Immmmuunnaannttwwoorrttzzuuvveerrhhiinnddeerrnn((ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiitteennHHuummrriicchheettaall..,, 22000066;; LLeeeettaall..,, 2 2000077)).. D Diiee zzwweeiittee ggrrooßßee GGrruuppppee ddeerr TT--ZZeelllleenn hheeiißßtt CCDD88--ZZeelllleenn.. SSiiee ttrraaggeenn eeiinn CCDD88- -M Moolleekküüll aauuff iihhrreerr MMeemmbbrraannoobbeerrffllääcchhee uunndd eerrkkeennnneenn iihhrr aannttiiggeenneess PPeeppttiidd iimm K KoonntteexxttvvoonnMMHHCC--MMoolleekküülleennddeerrKKllaasssseeII((MMHHCCII))..CCDD88++TT--ZZeelllleennkköönnnneennssiicchh z zuu zzyyttoottooxxiisscchheenn LLyymmpphhoozzyytteenn ((CCTTLL)) ddiiffffeerreennzziieerreenn,, ddiiee ffrreemmddee ooddeerr v viirruussbbeeffaalllleenneeZZeelllleennttöötteennkköönnnneenn.. 1 1..22..TT--ZZeellll--AAkkttiivviieerruunngg W Wiiee oobbeenn bbeerreeiittss kkuurrzz eerrwwäähhnntt,, eerrhhäälltt ddeerr TT--LLyymmpphhoozzyytt sseeiinn SSttiimmuullaattiioonnssssiiggnnaall ü übbeerrMMHHCC--PPeeppttiidd--KKoommpplleexxee..DDiieeCCDD44--ZZeelllleenn((TT--HHeellffeerr--ZZeelllleenn))bbiinnddeennddaabbeeiimmiitt i ihhrreemm TTCCRR ssppeezziiffiisscchh aann MMHHCCIIII--KKoommpplleexxee,, ddiiee ssiicchh nnuurr aauuff pprrooffeessssiioonneellll A Annttiiggeenn--pprräässeennttiieerreennddeennZZeelllleenn((AAPPCC))bbeeffiinnddeenn..DDaassMMHHCCIIII--MMoolleekküüllpprräässeennttiieerrtt E Eppiittooppee vvoonn AAnnttiiggeenneenn,, ddiiee ddiiee AAPPCC vvoorrhheerr eennddoozzyyttiieerrtt uunndd iimm PPhhaaggoossoomm f frraaggmmeennttiieerrtthhaatt((LLäännggeevvoonn1122--2244AAmmiinnoossääuurreenn))..DDeerrTTCCRRddeerrCCDD44--ZZeelllleekkaannnn n nuurraannddeennMMHHCCIIII--PPeeppttiidd--KKoommpplleexxbbiinnddeenn,,wweennnneerraannbbeessttiimmmmtteennssppeezziiffiisscchheenn B Biinndduunnggsssstteelllleenn ffüürr ddaass pprräässeennttiieerrttee AAnnttiiggeenn mmiitt ddiieesseemm hhaarrmmoonniieerrtt.. DDaass iissttddeerr G Grruunndd,, wweesshhaallbb ddiiee IImmmmuunnaannttwwoorrtt aauuff eeiinn ssppeezziiffiisscchheess AAnnttiiggeenn eebbeennffaallllss s sppeezziiffiisscchh aauussggeerriicchhtteett iisstt.. DDiiee CCDD44--ZZeellllee ttrriiggggeerrtt ssoommiitt eeiinnee ssppeezziiffiisscchhee I Immmmuunnaannttwwoorrtt.. DDiiee eebbeenn bbeesscchhrriieebbeenneenn BBiinndduunnggsssstteelllleenn ddeerr TTCCRR lliieeggeenn iimm m meennsscchhlliicchheenn OOrrggaanniissmmuuss iinn eeiinneerr ggrrooßßeenn VViieellffaalltt vvoorr.. DDiieessee eennttsstteehhtt wwäähhrreenndd d deerr RReeiiffuunnggsspphhaassee ddeess TThhyymmuuss,, wwoo eeiinnee VViieellzzaahhll vvoonn TT--ZZeellll--KKlloonneenn ggeebbiillddeett w weerrddeenn,, ddiiee ssiicchh iinn ddeerr SSeeqquueennzz uunndd AAGG--SSppeezziiffiittäätt iihhrreerr TTCCRR vvoonn eeiinnaannddeerr u unntteerrsscchheeiiddeenn.. SSiiee sstteelllleenn ddaass PPootteennttiiaall zzuurr BBeekkäämmppffuunngg eevveennttuueelllleerr ssppäätteerreerr I Innffeekkttiioonneenn ddaarr.. EEiinnee CCDD44--ZZeellllee,, ddiiee nnoocchh nniiee AAnnttiiggeennkkoonnttaakktt hhaattttee,, nneennnntt mmaann n naaiivvee CCDD44--ZZeellllee iimm GGeeggeennssaattzz zzuu ddeenn GGeeddääcchhttnniiss--CCDD44--ZZeelllleenn,, wweellcchhee bbeerreeiittss K KoonnttaakkttmmiittiihhrreemmAAnnttiiggeennhhaatttteenn.. D Diiee CCDD88--ZZeelllleenn eerrkkeennnneenn mmiitt iihhrreemm TTCCRR MMHHCCII--MMoolleekküüllee,, ddiiee ssiicchh aauuff jjeeddeerr m meennsscchhlliicchheenn ZZeellllee ((AAuussnnaahhmmee EErryytthhrroozzyytteenn)) bbeeffiinnddeenn.. DDiiee AAuussssttaattttuunngg mmiitt M MHHCCII--MMoolleekküülleenn iisstt aauuff jjeeddeerr ZZeellllee eeiinneess OOrrggaanniissmmuuss iiddeennttiisscchh.. SSiiee sstteelllltt s soozzuussaaggeennddiiee „„iimmmmuunnoollooggiisscchhee IIddeennttiittäätt““ ddeerr ZZeellllee ddaarr.. WWiiee MMHHCCIIII kkaannnn aauucchh

Einleitung 6 M MHHCCIIPPeeppttiiddeepprräässeennttiieerreenn..DDoocchhssiinnddeessddiieessmmaallnniicchhttpphhaaggoozzyyttiieerrtteessoonnddeerrnniimm Z Zyyttooppllaassmmaa ffrraaggmmeennttiieerrttee PPeeppttiiddeeiinnhheeiitteenn,, ddiiee iimm eennddooppllaassmmaattiisscchheenn RReettiikkuulluumm a ann MMHHCCII ggeebbuunnddeenn wweerrddeenn.. WWäähhrreenndd ddeerr RReeiiffuunnggsspphhaassee ddeerr TT--ZZeelllleenn iimm T Thhyymmuuss wweerrddeenn ddiieejjeenniiggeenn CCDD44-- uunndd CCDD88--ZZeelllleenn dduurrcchh AAppooppttoosseeiinndduukkttiioonn e elliimmiinniieerrtt,, ddiieeggeeggeennkköörrppeerreeiiggeenneess PPeeppttiiddppootteennttiieellll rreeaakkttiivv sseeiinnkköönnnneenn.. DDiieesseerr M Meecchhaanniissmmuuss iisstt ääuußßeerrsstt wwiicchhttiigg,, uumm eeiinnee SSeellbbssttttoolleerraannzz zzuu ggeewwäähhrrlleeiisstteenn ( (VVeerrmmeeiidduunnggvvoonnAAuuttooiimmmmuunneerrkkrraannkkuunnggeennwwiieezz..BB..ddeerrRRhheeuummaattooiiddeennAArrtthhrriittiiss)).. T Trriifffftteeiinnee iimmTThhyymmuuss ffüürrttaauugglliicchh bbeeffuunnddeenneeCCDD88--ZZeellllee ssppäätteerraauuff eeiinn MMHHCCII,, d daass eeiinn ffüürr ssiiee ppaasssseennddeess PPeeppttiidd pprräässeennttiieerrtt,, bbeeddeeuutteett ddiieess,, ddaassss eess ssiicchh uumm eeiinn F Frreemmddaannttiiggeennhhaannddeellnnmmuussss,,wweeiill,,wwiieeoobbeennbbeerriicchhtteett,,aauuffSSeellbbssttaannttiiggeenneeggeepprrääggttee Z Zeelllleenn aauussggeellöösscchhtt wwuurrddeenn.. SSoollcchh eeiinn iinn eeiinneerr KKöörrppeerrzzeellllee pprroodduuzziieerrtteess F FrreemmddaannttiiggeennkkaannnnbbeeiissppiieellsswweeiisseeaauuffeeiinneerrVViirruussiinnffeekkttiioonnooddeerreeiinneerrttuummoorröösseenn E Ennttaarrttuunngg bbeerruuhheenn.. MMiitt vveerrsscchhiieeddeenneenn MMeecchhaanniissmmeenn ((CCDD9955--LLiiggaanndd,, PPeerrffoorriinn,, P Prrootteeaasseenn))wwiirrddddiieevveerräännddeerrtteeZZeelllleevvoonnCCTTLLnnuunniinnddiieeAAppooppttoosseeggeettrriieebbeenn.. 1 1..22..11KKoossttiimmuullaattiioonn N Neebbeenn ddeemm MMHHCC--TTCCRR--SSiiggnnaall bbeennööttiiggtt eeiinnee nnaaiivvee CCDD44--ZZeellllee ((ss..oo..)) iimmmmeerr nnoocchh e eiinn zzwweeiitteess SSiiggnnaall zzuurr eennddggüüllttiiggeenn SSttiimmuullaattiioonn.. DDiieesseess bbeesstteehhtt aauuss ddeerr BBiinndduunngg v voonnCCDD2288ddeerrCCDD44--ZZeelllleeaannCCDD8800((BB77..11))ooddeerrCCDD8866((BB77..22))ddeerrAAPPCC..OOhhnneeddiieessee B BiinndduunnggvveerrllääuuffttddiieeTT--ZZeellll--AAkkttiivviieerruunnggiinnssuuffffiizziieennttbbzzww..kkeehhrrttssiicchhiinnssGGeeggeenntteeiill u umm,,ddiieennaaiivveeZZeelllleewwiirrddaanneerrgg,,dd..hh..nniicchhttmmeehhrreerrrreeggbbaarr((SScchhwwaarrttzz,,11999900;;HHaarrddiinngg e ettaall..,,11999922))uunnddsstteehhttffüürrzzuukküünnffttiiggeeIImmmmuunnrreeaakkttiioonneennnniicchhttmmeehhrrzzuurrVVeerrffüügguunngg.. C CDD2288 hhaatt ddaabbeeii kkoonnkkrreett ddiiee AAuuffggaabbee,, ddiiee AAuusssscchhüüttttuunngg vvoonn IILL--22 uunndd ddiiee Z Zyyttookkiinnpprroodduukkttiioonn((dduurrcchhvveerrmmeehhrrtteeTTrraannsskkrriippttiioonnuunnddSSttaabbiilliissiieerruunnggddeerrmmRRNNAA)) z zuu eerrhhööhheenn ssoowwiiee ddiiee AAppooppttoossee zzuu vveerrhhiinnddeerrnn((dduurrcchh HHoocchhrreegguulliieerruunngg ddeess aannttii- -a appooppttoottiisscchheenn PPrrootteeiinnss BBCCLL--XXLL)).. GGeeddääcchhttnniiss--TT--ZZeelllleenn,, ddiiee bbeerreeiittss eeiinnmmaall mmiitt i ihhrreemm ssppeezziiffiisscchheenn AAnnttiiggeenn KKoonnttaakktt hhaatttteenn,, hhaabbeenn eeiinnee nniieeddrriiggeerree AAkkttiivviieerruunnggss- -s scchhwweelllleeuunnddbbeennööttiiggeennddiieeKKoossttiimmuullaattiioonnüübbeerrCCDD2288nniicchhttmmeehhrruunnbbeeddiinnggtt.. FFüürr s siiee ggeennüüggtt aauucchh eeiinnee ggeennüüggeenndd hhoohhee AAnnttiiggeennkkoonnzzeennttrraattiioonn zzuurr AAkkttiivviieerruunngg.. A Annttiiggeennbbiinndduunngg dduurrcchh ddeenn TTCCRR llöösstt iimm KKoonnttaakkttbbeerreeiicchh ddeerr AAPPCC mmiitt ddeerr CCDD44- -Z ZeelllleeeeiinneeRReeoorrggaanniissaattiioonnaauuss,,eessbbiillddeettssiicchhddiieeSSttrruukkttuurreeiinneerriimmmmuunnoollooggiisscchheenn S Syynnaappssee((IISS)),, ddiiee wwiieeddeerruummaauusszzwweeiiZZoonneennaauuffggeebbaauuttiisstt,, ddeerrzzeennttrraalleennuunnddddeerr p peerriipphheerreenn ZZoonnee.. IInn ddeerr zzeennttrraalleenn ZZoonnee bbeeffiinnddeenn ssiicchh zz.. BB.. ddiiee RReezzeeppttoorreenn

Einleitung 7 M MHHCCIIII,, TTCCRR,, BB77--11//--22,, CCDD2288,, iinn ddeerr ppeerriipphheerreenn ZZoonnee vvoorrwwiieeggeenndd A Addhhäässiioonnssmmoolleekküüllee.. C CDD2288iisstteeiinn GGllyykkoopprrootteeiinn--HHoommooddiimmeerr uunndd ggeehhöörrttwwiieeddeerrTTCCRR,, ddiieeAAnnttiikköörrppeerr u unndd ddaass MMHHCC zzuurr IImmmmuunngglloobbuulliinnssuuppeerrffaammiilliiee.. EEss wwiirrdd aauuff mmeennsscchhlliicchheenn CCDD44- -Z Zeelllleennzzuu 9955%% uunndd aauuffCCDD88--ZZeelllleennzzuu 5500%% kkoonnssttiittuuttiivveexxpprriimmiieerrtt((LLeennsscchhoowweett a all..,, 11999966)).. DDaanneebbeenn ggiibbtt eess wweeiitteerree OObbeerrffllääcchheennmmoolleekküüllee,, ddiiee ffüürr ddiiee S Siiggnnaallüübbeerrttrraagguunngg zzwwiisscchheenn AAPPCC uunndd TT--ZZeellllee vvoonn WWiicchhttiiggkkeeiitt ssiinndd wwiiee LLFFAA--11 ( (llyymmpphhooccyyttee ffuunnccttiioonn--aassssoocciiaatteedd aannttiiggeenn--11)) uunndd VVLLAAss ((vveerryy llaattee aaccttiivvaattiioonn a annttiiggeenn[[ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiitt::SSaaiittoo,,11999988]])).. I Inn ddeenn lleettzztteenn JJaahhrreenn wwuurrddeenn wweeiitteerree kkoossttiimmuullaattoorriisscchhee TT--ZZeellll--OObbeerrffllääcchheenn- -m moolleekküüllee eennttddeecckktt,, wweellcchhee mmiitt ddeenn AAPPCC kkoommmmuunniizziieerreenn.. IICCOOSS ((iinndduucciibbllee c coossttiimmuullaattoorr,, CCDD227788)) wwiirrdd aauuff nnaaiivveenn TT--ZZeelllleenn nniicchhtt eexxpprriimmiieerrtt,, ssoonnddeerrnn nnaacchh T TCCRR--SSttiimmuullaattiioonnaauuffCCDD44--ZZeelllleenniinndduuzziieerrttuunnddddaannnnaauuffTThh22iinn ggrröößßeerreerrDDiicchhttee e exxpprriimmiieerrtt aallss aauuff TThh11.. DDeenn IICCOOSS--LLiiggaannddeenn ((aauucchh BB77hh,, BB77HH22,, GGLL5500,, BB77RRPP--11 o oddeerr LLIICCOOSS ggeennaannnntt)) ffiinnddeett mmaann aauuff AAPPCC,, aabbeerr aauucchh iinn nniicchhtt--llyymmpphhaattiisscchheenn G Geewweebbeenn wwiiee HHeerrzz,, NNiieerree,, LLuunnggee,, PPeerriittoonneeuumm uunndd HHooddeenn.. DDiiee FFuunnkkttiioonn vvoonn I ICCOOSSlliieeggtt wwaahhrrsscchheeiinnlliicchhiinnddeerrAAuuffrreecchhtteerrhhaallttuunnggddeerrIImmmmuunnaannttwwoorrttuunnddnniicchhtt i inn ddeerr pprriimmäärreenn SSttiimmuullaattiioonn.. EEss bbeesstteehhtt ssoommiitt eeiinn SSyynneerrggiissmmuuss zzwwiisscchheenn CCDD2288 u unnddIICCOOSS((ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiittGGrreeeennwwaallddeettaall..,,22000055)).. E Eiinneenn wweeiitteerreenn kküürrzzlliicchh eennttddeecckktteenn LLiiggaannddeenn aauuss ddeerr BB77--FFaammiilliiee aauuff AAPPCC sstteelllltt B B77--HH33 ((BB77RRPP--22)) ddaarr ((ddaanneebbeenn EExxpprreessssiioonn iinn nniicchhtt--llyymmpphhaattiisscchheemm GGeewweebbee wwiiee H Heerrzz,, LLuunnggee,, NNiieerreenn LLeebbeerr,, HHooddeenn)).. SSeeiinn RReezzeeppttoorr aauuff TT--ZZeelllleenn iisstt nnoocchh u unnbbeekkaannnntt.. LLöösslliicchheess BB77--HH33--PPrrootteeiinn iisstt jjeeddoocchh iinn ddeerr LLaaggee,, CCDD44-- uunndd CCDD88- -Z Zeelllleennzzuussttiimmuulliieerreenn((bbeeiiTThh11ssttäärrkkeerraallssbbeeiiTThh22))..EEssggiibbttHHiinnwweeiissee,,ddaassssBB77--HH33 n neebbeenn ssttiimmuullaattoorriisscchheenn aauucchh iimmmmuunniinnhhiibbiittoorriisscchhee FFuunnkkttiioonneenn aauuffwweeiisstt ( (ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiittGGrreeeennwwaallddeettaall..,,22000055))..

Einleitung 8 A Abbbbiilldduunngg 11:: ScSchheemmaattiisscchhee DDaarrsstteelllluunngg dederr MiMittgglliieeddeerr ddeerr B7B7--FFaammiilliiee unundd ihihrreerr V Veerrbbiinndduunnggeenn 1 1..33AAbbsscchhaalltteennddeerrTT--ZZeellllaannttwwoorrtt D DiieeBBeeeennddiigguunngg ddeerrTT--ZZeellllaannttwwoorrtt iisstt aakkttuueellll eeiinn sseehhrr aakkttiivveess FFoorrsscchhuunnggssffeellddiinn d deerrIImmmmuunnoollooggiiee.. IInnhhiibbiittoorriisscchheeZZyyttookkiinnee,, ooxxiiddaattiivveerrSSttrreessss,, KKIIRRss((kkiilllleerrcceellllIIgg- -l liikkee rreecceeppttoorrss)),, iinnhhiibbiittoorriisscchhee FFcc--RReezzeeppttoorreenn ((aauuff BB--ZZeelllleenn,, MMaakkrroopphhaaggeenn,, n neeuuttrroopphhiilleennGGrraannuulloozzyytteennuunnddMMaassttzzeelllleenn))ssoowwiieeddiieeIInndduukkttiioonnvvoonnZZeellllttooddüübbeerr T Tooddeessrreezzeeppttoorreenn wwiiee FFaass bbeeggrreennzzeenn ddiiee iinnffllaammmmaattoorriisscchheenn TT--ZZeellllrreeaakkttiioonneenn ( (ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiitt::SSaaiittoo,,11999988;;LLeeiibbssoonn,,22000044))..DDaanneebbeennssppiieellttddeerrTT--uunnddBB--ZZeellll- -R ReezzeeppttoorrPPDD--11((pprrooggrraammmmeeddddeeaatthh--11,, CCDD227799)) aauussddeerrCCDD2288--FFaammiilliieemmiittsseeiinneenn L Liiggaannddeenn PPDD--LL11 ((BB77--HH11)) uunndd PPDD--LL22 ((BB77--DDCC)),, wweellcchhee iinn llyymmpphhaattiisscchheenn ( (MMoonnoozzyytteenn,, ddeennddrriittiisscchhee ZZeelllleenn)) aabbeerr aauucchh iinn nniicchhtt--llyymmpphhaattiisscchheenn GGeewweebbeenn ( (HHeerrzz,, LLuunnggee,, NNiieerree,, PPaannkkrreeaass,, LLeebbeerr,, KKeerraattiinnoozzyytteenn)) eexxpprriimmiieerrtt wweerrddeenn,, eeiinnee w wiicchhttiiggee iimmmmuunniinnhhiibbiittoorriisscchhee RRoollllee.. IInn PPDD--11--kknnoocckkoouutt--MMääuusseenn eennttwwiicckkeellnn ssiicchh s scchhwweerreeAAuuttooiimmmmuunnkkrraannkkhheeiitteenn,,GGlloommeerruulloonneepphhrriittiiss,,AArrtthhrriittiiss,, KKaarrddiioommyyooppaatthhiiee u unndd GGrraafftt--vveerrssuuss--HHoosstt--aarrttiiggee--HHaauuttrreeaakkttiioonneenn,, aann ddeenneenn ddiiee MMääuussee bbeerreeiittss iimm A Alltteerrvvoonn1100WWoocchheennsstteerrbbeenn((ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiittGGrreeeennwwaallddeettaall..,,22000055)).. 0 CTLA-4 BTLA CD80 (B7-1) CD86 (B7-2) CD28 B7-H4 PD-1 PD-L1 PD-L2 B7-H3 B7h ICOS ? HVEM VEM ?

APC

CD4

Einleitung 9 E Eiinn wweeiitteerreess CCDD2288--HHoommoolloogg iisstt BBTTLLAA ((BB-- uunndd TT--LLyymmpphhoozzyytteenn--AAtttteennuuaattoorr,, C CDD227722)),, ddeerr eebbeennffaallllss aauuff TT-- uunndd BB--LLyymmpphhoozzyytteenn,, aabbeerr aauucchh aauuff NNKK--ZZeelllleenn,, d deennddrriittiisscchheenn uunndd mmyyeellooiiddeenn ZZeelllleenn ssoowwiiee vveerrsscchhiieeddeenneenn ssoommaattiisscchheenn GGeewweebbeenn e exxpprriimmiieerrtt wwiirrdd uunndd bbeeii LLiiggaattiioonneeiinnee LLyymmpphhoozzyytteenn--iinnhhiibbiittoorriisscchheeWWiirrkkuunngg hhaatt.. S Seeiinn LLiiggaanndd iisstt HHVVEEMM ((hheerrppeess vviirruuss eennttrryy mmeeddiiaattoorr)),, wweellcchheess nniicchhtt zzuurr BB77--,, s soonnddeerrnn zzuurr TTNNFFRR--FFaammiilliiee ((TTuummoorrnneekkrroosseeffaakkttoorr--RReezzeeppttoorr--FFaammiilliiee)) ggeehhöörrtt.. H HVVEEMM wwaarr bbiissllaanngg bbeekkaannnntt aallss RReezzeeppttoorr ffüürr ddaass HHeerrppeess ssiimmpplleexx VViirruuss TTyypp II s soowwiiee ffüürr ddiiee LLiiggaannddeenn LLIIGGHHTT uunndd LLyymmpphhoottooxxiinn--αα.. HHVVEEMM ffiinnddeett ssiicchh aauuff d deennddrriittiisscchheenn ZZeelllleenn,, mmyyeellooiiddeenn ZZeelllleenn,, NNKK--ZZeelllleenn,, aabbeerr aauucchh aauuff TT-- uunndd BB- -L Lyymmpphhoozzyytteenn.. E Eiinn wweeiitteerreerr eerrsstt kküürrzzlliicchh eennttddeecckktteerr LLiiggaanndd ffüürr eeiinn iinnhhiibbiittoorriisscchh wwiirrkkeennddeess TT- -Z Zeelllloobbeerrffllääcchheennmmoolleekküülliisstt BB77--HH44((BB77xx,,BB77SS11)).. DDaassMMoolleekküüllffiinnddeettssiicchh wwiieeddiiee P PDD--11--LLiiggaannddeenn iinn llyymmpphhaattiisscchheenn ((MMiillzz,, TThhyymmuuss)) uunndd nniicchhtt--llyymmpphhaattiisscchheemm G Geewweebbeenn ((LLuunnggee,, LLeebbeerr,, HHooddeenn,, OOvvaarr,, PPllaazzeennttaa,, SSkkeelleettttmmuusskkeell,, PPaannkkrreeaass,, D Düünnnnddaarrmm)).. BB77--HH44 bbeewwiirrkktt ddiiee HHeemmmmuunngg ddeerr TTCCRR--vveerrmmiitttteelltteenn TT--ZZeellll- -P Prroolliiffeerraattiioonn uunndd iisstt wwaahhrrsscchheeiinnlliicchh wwiicchhttiigg ffüürr ddiiee HHeerruunntteerrrreegguulliieerruunngg ddeerr I Immmmuunnaannttwwoorrtt iinn ddeenn ppeerriipphheerreenn GGeewweebbeenn ((TT--ZZeellll--TToolleerraannzz)),, ((ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiitt G Grreeeennwwaallddeettaall..,,22000055)).. D Daarrüübbeerr hhiinnaauuss ssppiieelltt ddeerr GGeeggeennssttaanndd ddiieesseerr AArrbbeeiitt,, ddaass TT- -Z Zeelllloobbeerrffllääcchheennmmoolleekküüll CCTTLLAA--44 ((CCDD115522)) eeiinnee zzeennttrraallee RRoollllee bbeeii ddeerr IInnhhiibbiittiioonn u unndd BBeeeennddiigguunngg vvoonn IImmmmuunnaannttwwoorrtteenn.. DDaarraauuff ssoollll hhiieerr nnäähheerr eeiinnggeeggaannggeenn w weerrddeenn.. 1 1..33..11 CCTTLLAA--44 C CTTLLAA--44 ((ccyyttoottooxxiicc TT llyymmpphhooccyyttee aannttiiggeenn--44)) bbeessiittzztt 7755%% SSeeqquueennzzhhoommoollooggiiee zzuu C CDD2288uunnddiissttwwiieeddiieesseesseeiinnHHoommooddiimmeerraauusszzwweeiiggllyykkoossyylliieerrtteennPPeeppttiiddkkeetttteennvvoonn 1 19988 AAmmiinnoossääuurreenn LLäännggee,, ddiiee üübbeerr DDiissuullffiiddbbrrüücckkeenn mmiitteeiinnaannddeerr vveerrbbuunnddeenn ssiinndd ( (jjee3355kkDDGGrröößßee))..DDiieeGGeenneeffüürrCCDD2288,, CCTTLLAA--44,,IICCOOSSuunnddPPDD11lliieeggeennaauuffddeemm C Chhrroommoossoomm 22 eenngg bbeeiieeiinnaannddeerr.. CCDD2288 uunndd CCTTLLAA--44 bbeessiittzzeenn bbeeiiddee iinn ddeerr L Liiggaannddeennbbiinndduunnggssrreeggiioonn ddaass gglleeiicchhee PPeeppttiiddmmoottiivv aauuff:: MMYYPPPPYY.. DDiieessee Ä Ähhnnlliicchhkkeeiitt eerrkklläärrtt,, wweesshhaallbb CCTTLLAA--44 ddiieesseellbbeenn LLiiggaannddeenn wwiiee CCDD2288 bbiinnddeett,, n näämmlliicchh BB77..11 uunndd BB77..22,, ddiiee mmaann aauuff AAPPCC ffiinnddeett.. CCTTLLAA--44 bbeessiittzztt jjeeddoocchh

Einleitung 10 g geeggeennüübbeerr BB77..11 uunndd BB77..22 eeiinnee 5500--22000000ffaacchh hhööhheerree AAffffiinniittäätt aallss CCDD2288,, jjee nnaacchh A Annaallyyssee ((CCTTLLAA--44--BB77..11 hhööcchhssttee AAffffiinniittäätt,, ddaannnn CCTTLLAA--44--BB77..22 uunndd CCDD2288--BB77..22,, a amm ggeerriinnggsstteenn CCDD2288--BB77..11;; LLiinnsslleeyy eett aall..,, 11999944;; GGrreeeennee eett aall..,, 11999966;; vvaann ddeerr M Meerrwweeeettaall..,,11999977))..DDaabbeeiikkaannnneeiinnCCTTLLAA--44--DDiimmeerraannbbiisszzuuzzwweeiiBB77--MMoolleekküüllee f feessttbbiinnddeennuunndduummggeekkeehhrrtt,,wwaassddiieehhoohheeAAffffiinniittäättmmiitteerrkklläärrtt.. D Deerr zzyyttooppllaassmmaattiisscchhee TTeeiill ddeess CCTTLLAA--44--MMoolleekküüllss ((3333 AAmmiinnoossääuurreenn llaanngg)) wweeiisstt n nuurr eeiinnee ggeerriinnggee HHoommoollooggiiee zzuu CCDD2288 aauuff,, iisstt jjeeddoocchh zzwwiisscchheenn ddeenn CCTTLLAA--44- -M Moolleekküülleennvvoonn MMaauuss,, RRaattttee,, KKaanniinncchheenn uunnddHHuuhhnn zzuu110000%%kkoonnsseerrvviieerrtt((HHaarrppeerr e ett aall..,, 11999911)),, wwaass aauuff eeiinneenn hhoohheenn EEvvoolluuttiioonnssddrruucckk uunndd ddaammiitt aauuff eeiinnee sseehhrr w wiicchhttiiggeeFFuunnkkttiioonnhhiinnwweeiisstt,,wweellcchheekkeeiinneerrlleeiiMMuuttaattiioonneennzzuulläässsstt.. D Deerr ggrröößßttee TTeeiill ddeess iinn ddeerr ZZeellllee vvoorrhhaannddeenneenn CCTTLLAA--44 bbeeffiinnddeett ssiicchh iinn i innttrraazzeelllluulläärreenn VVeessiikkeellnn iimm ZZyyttooppllaassmmaa.. NNuurr wweenniiggee MMoolleekküüllee wweerrddeenn aauuff ddeerr Z Zeelllloobbeerrffllääcchhee eexxpprriimmiieerrtt.. DDeerr GGrruunndd ddaaffüürr iisstt ddiiee sscchhnneellllee EEnnddoozzyyttoossee vvoonn C CTTLLAA--44 ((LLiinnsslleeyy eett aall..,, 11999966;; AAlleeggrree eett aall..,, 11999966)).. DDiiee EEiinnlleeiittuunngg ddeess E EnnddoozzyyttoosseevvoorrggaannggeessggeesscchhiieehhttdduurrcchhddiieeBBiinndduunnggvvoonnCCllaatthhrriinn--AAddaappttoorrAAPP--22aann d deenn AAPP5500 ggeennaannnntteenn TTeeiill ddeess zzyyttooppllaassmmaattiisscchheenn CCTTLLAA--44.. DDiieesseerr SScchhrriitttt kkaannnn d duurrcchh PPhhoosspphhoorryylliissiieerruunngg ddeess ssoo ggeennaannnntteenn YY220011VVKKMM--MMoottiivvss ddeess z zyyttooppllaassmmaattiisscchheenn CCTTLLAA--44 vveerrhhiinnddeerrtt wweerrddeenn.. DDiiee eeiiggeennttlliicchhee FFuunnkkttiioonn vvoonn C CTTLLAA--44 iisstt jjeeddoocchh nnaacchhwweeiisslliicchh wweeddeerr vvoonn ddeerr pphhoosspphhoorryylliieerrtteenn nnoocchh vvoonn ddeerr e ennddoozzyyttiieerrtteennFFoorrmmaabbhhäännggiigg((NNaakkaasseekkooeettaall..,,11999999,,CCiinneekkeettaall..,,22000000,,BBaarroojjaaeett a all..,, 22000000)).. WWäähhrreenndd ddeess KKoonnttaakktteess ddeerr TT--ZZeellllee mmiitt ddeerr AAPPCC bbeeffiinnddeett ssiicchh ddeerr G GrrooßßtteeiillddeerrVVeessiikkeell iinn ddeerrNNäähheeddeess TTCCRR,, vvoorrhheerr iinn ddeerrNNäähheeddeerrMMiikkrroottuubbuullii- -o orrggaanniissiieerreennddeennZZeennttrreenn((MMTTOOCC)).. D Diiee CCTTLLAA--44--mmRRNNAA lläässsstt ssiicchh bbeerreeiittss eeiinnee SSttuunnddee nnaacchh BBeeggiinnnn ddeerr TT- -Z Zeellllaakkttiivviieerruunngg nnaacchhwweeiisseenn ((LLiinnddsstteenn eett aall..,, 11999933)) uunndd wwiirrkktt ssiicchh bbeerreeiittss vviieerr S Sttuunnddeennnnaacchhddeerr AAkkttiivviieerruunngg aauuffddiieeIILL--22--mmRRNNAAaauuss((DDeettaaiillssss.. 11..33..22;;BBrruunnnneerr e ett aall..,, 11999999)).. DDaass MMaaxxiimmuumm ddeerr CCTTLLAA--44--EExxpprreessssiioonn ffiinnddeett ssiicchh nnaacchh zzwweeii bbiiss d drreeiiTTaaggeenn((WWaalluunnaasseettaall..,,11999944)),,ddaassddeessCCTTLLAA--44--mmRRNNAA--ppeeaakkssbbeerreeiittssnnaacchh2244- -3 366SSttuunnddeenn((LLiinnddsstteenneettaall..,,11999933)).. E Exxpprriimmiieerrtt wwiirrdd CCTTLLAA--44 vvoorr aalllleemm aauuff ddeenn CCDD44--ZZeelllleenn ((11,,33%% ddeerr ppeerriipphheerreenn C CDD44--ZZeelllleenn CCTTLLAA--44--ppoossiittiivv bbeeii ggeessuunnddeenn PPeerrssoonneenn [[00,,55--22,,11%% bbeeii 9955%% K Koonnffiiddeennzziinntteerrvvaallll;; SScchhlloottmmaannnn eett aall..,, 22000000]])).. BBeeii vveerrsscchhiieeddeenneenn EErrkkrraannkkuunnggeenn s stteeiiggttddiieeFFrraakkttiioonnCCTTLLAA--44++TT--ZZeelllleennaann,, zz..BB.. aauuff 1166,,22%%bbeeiiddeerraakkuutteenn MMaallaarriiaa

Einleitung 11 t trrooppiiccaa,, 44,,33%%bbeeiiHHIIVV,, 55,,22%%bbeeiiddeerrWWeeggeenneerrsscchheennGGrraannuulloommaattoossee((SScchhlloottmmaannnn e ettaall..,,22000000,,SStteeiinneerreettaall..22000011))..BBeeiiRRüücckkggaannggddeerrPPaarraassiittäämmiieebbzzww..ddeerrVViirruussllaasstt z zeeiiggtteessiicchheeiinnRRüücckkggaannggddeerrWWeerrttee((SStteeiinneerreettaall..,,22000011;;SScchhlloottmmaannnneettaall..,,22000000)).. D Duurrcchh ddaass MMiittooggeenn PPHHAA ((PPhhyyttoohhäämmaagggglluuttiinniinn)) llaasssseenn ssiicchh iinnnneerrhhaallbb vvoonn 4488 S Sttuunnddeenn ddiiee CCTTLLAA--44--EExxpprreessssiioonnssrraatteenn iinn ddeerr ZZeellllkkuullttuurr ddrraammaattiisscchh aauuff 4466,,77%% s stteeiiggeerrnn ((SStteeiinneerr eett aall..,, 22000011)).. DDiieess zzeeiiggtt,, ddaassss CCTTLLAA--44 aallss TT--ZZeellll- -A Akkttiivviieerruunnggssmmaarrkkeerrggeelltteennkkaannnn.. A AuuffCCDD88--ZZeelllleennffiinnddeennssiicchhwweesseennttlliicchhggeerriinnggeerreeEExxpprreessssiioonnssrraatteenn((11%%aauuffCCDD88- -Z Zeelllleenn,, kkeeiinn AAnnssttiieegg dduurrcchh IImmmmuunnssttiimmuullaattiioonn)),, wwaass aauuff ddiiee WWiicchhttiiggkkeeiitt vvoonn C CTTLLAA--44vv..aa..bbzzggll..FFuunnkkttiioonnuunnddWWiirrkkuunnggbbeeiiCCDD44--ZZeelllleennhhiinnwweeiisstt.. LLeeddiigglliicchhbbeeii d deerrWWeeggeenneerrsscchheennGGrraannuulloommaattoosseekkoonnnntteebbiissllaannggeeiinneeCCTTLLAA--44--EEpprreessssiioonnaauuffiimm M Miitttteell22,,22%%ddeerrBB--ZZeelllleennnnaacchhggeewwiieesseennwweerrddeenn((SStteeiinneerreettaall..,,22000011)).. D DiieeRRoolllleevvoonnCCTTLLAA--44bbeeiiddeerrTT--ZZeellllrreeiiffuunnggiimmTThhyymmuussiissttbbiissllaannggnnoocchhuunnkkllaarr.. B BeeiiiimmmmuunnhhiissttoocchheemmiisscchheennAAnnffäärrbbuunnggeennkkiinnddlliicchheerrhhuummaanneerrTThhyymmiiffaannddssiicchh iinn d deenn RRiinnddeenn jjeewweeiillss nnuurr eeiinnee ggeerriinnggee CCTTLLAA--44--EExxpprreessssiioonn,, iimm MMaarrkk hhiinnggeeggeenn w waarreenn1111--1177%% ddeerr CCDD44++ TT--ZZeelllleenn CCTTLLAA--44--ppoossiittiivv ((CCaassttaann eett aall..,, 11999988)).. IInn ddeenn K Keeiimmzzeennttrreenn hhuummaanneerr LLyymmpphhkknnootteenn eexxpprriimmiieerrtteenn 7700,,22--8899%% ddeerr CCDD44++ TT--ZZeelllleenn C CTTLLAA--44((CCaassttaanneettaall..,,11999977)).. 1 1..33..22 CCTTLLAA--44uunnddsseeiinneeRRoolllleeaallssnneeggaattiivveerrRReegguullaattoorrddeerrTT--ZZeellllaannttwwoorrtt C CTTLLAA--44hhaatt eeiinnee eesssseennttiieellllee iinnhhiibbiittoorriisscchhee WWiirrkkuunngg aauuffddiiee TT--ZZeellllaannttwwoorrtt.. DDiieess w wuurrddee bbeessoonnddeerrss üübbeerrzzeeuuggeenndd vvoonn mmeehhrreerreenn GGrruuppppeenn mmiitt CCTTLLAA--44--kknnoocckkoouutt- -M Määuusseenn ggeezzeeiiggtt.. DDiieessee sstteerrbbeenn bbeerreeiittss iinnnneerrhhaallbb wweenniiggeerr WWoocchheenn aann ü übbeerrsscchhiieeßßeennddeerr ppoollyykklloonnaalleerr LLyymmpphhoopprroolliiffeerraattiioonn uunndd llyymmpphhaattiisscchheenn I InnffiillttrraattiioonneenniinnvveerrsscchhiieeddeenneeOOrrggaannssyysstteemmee((TTiivvoolleettaall..,,11999955;;WWaatteerrhhoouusseeeettaall..,, 1 1999955)).. EEiinnee eevveennttuueellllee AAppooppttoossee--ttrriiggggeerrnnddee EEiiggeennsscchhaafftt vvoonn CCTTLLAA--44 kkoonnnnttee l leeddiigglliicchhdduurrcchh eeiinneeAArrbbeeiittssggrruuppppee nnaacchhggeewwiieesseenn wweerrddeenn((GGrriibbbbeenn eett aall..,, 11999955)).. V Veerrssuucchhee mmiitt kkoommpplleexxeerreenn MMooddeelllleenn kkoonnnntteenn ddiiee AAppooppttoossee--iinndduuzziieerreennddee W WiirrkkuunnggvvoonnCCTTLLAA--44jjeeddoocchhnniicchhttmmeehhrrbbeessttäättiiggeenn((BBllaaiirreettaall..,,11999988;;VVaannPPaarriijjss e ett aall..,, 11999999)).. DDiiee BBlloocckkaaddee vvoonn CCTTLLAA--44 aauuff TT--ZZeelllleenn mmiitttteellss mmoonnookklloonnaalleerr C CTTLLAA--44--AAnnttiikköörrppeerr ((zzuurr CCTTLLAA--44--IInnaakkttiivviieerruunngg)) vveerrssttäärrkktt eeiinnee a akkttiivviieerruunnggssiinndduuzziieerrtteeTT--ZZeellllpprroolliiffeerraattiioonnssoowwiieeZZyyttookkiinnsseekkrreettiioonn((WWaalluunnaasseettaall..,,

Einleitung 12 1 1999944;;HHwwaannggeettaall..,,22000022)),,wwaassaauucchhzzuummAAuuffttrreetteennvvoonnAAuuttooiimmmmuunneerrkkrraannkkuunnggeenn w wiieeddeerraauuttooiimmmmuunneennEEnnzzeepphhaalloommyyeelliittiiss((CChhiittnniisseettaall..,,22000011))ooddeerrddeemmDDiiaabbeetteess m meelllliittuuss((LLuuhhddeerreettaall..,,11999988))ffüühhrreennkkaannnn.. E Ess ggiibbtt aakkttuueellll ddrreeii MMooddeellllee zzuurr EErrkklläärruunngg ddeess WWiirrkkmmeecchhaanniissmmuuss vvoonn CCTTLLAA--44 ( (ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiittCChhiikkuummaaeettaall..,,22000022)):: 1 1.. BBeeiimm LLiiggaanndd--KKoommppeettiittiioonnssmmooddeellll wwiirrdd ddaavvoonn aauussggeeggaannggeenn,, ddaassss CCTTLLAA--44 a auuffggrruunndd sseeiinneerr hhööhheerreenn BBiinndduunnggssaaffffiinniittäätt ddaass kkoossttiimmuullaattoorriisscchhee CCDD2288--MMoolleekküüll v voonn ddeerr ggeemmeeiinnssaammeenn BBiinndduunnggsssstteelllleenn BB77..11 uunndd BB77..22 vveerrddrräännggtt uunndd ssoommiitt ddiiee A Akkttiivviieerruunngg ddeerr TT--ZZeellllee bblloocckkiieerrtt.. EEiinnee eeiiggeennee iinnttrraazzyyttooppllaassmmaattiisscchhee S Siiggnnaallkkaasskkaaddee vvoonn CCTTLLAA--44 aauussggeehheenndd iisstt ffüürr ddiieesseenn EEffffeekktt nniicchhtt vvoonnnnöötteenn.. U Unntteerrssttüüttzzuunngg ffiinnddeett ddiieesseess MMooddeellll dduurrcchh EExxppeerriimmeennttee,, bbeeii ddeenneenn ddeerr i innttrraazzyyttooppllaassmmaattiisscchheeAAnntteeiillvvoonnCCTTLLAA--44ssttaarrkkmmuuttiieerrttwwuurrddeeuunndd ddeennnnoocchheeiinnee T T--ZZeellll--ssuupppprreessssoorriisscchhee WWiirrkkuunngg aauuffrreecchhtteerrhhaalltteenn wweerrddeenn kkoonnnnttee ((CCaarrrreennoo eett aall..,, 2 2000000;;MMaasstteelllleerreettaall..,,22000000)).. 2 2.. DDaass ddiissttaallee BBlloocckkaaddeemmooddeellll nniimmmmtt aann,, ddaassss CCTTLLAA--44 ddiiee ssttiimmuullaattoorriisscchhee S Siiggnnaallkkaasskkaaddee,,ddiieedduurrcchhddeennKKoonnttaakkttddeessTTCCRRmmiittddeerrAAnnttiiggeenn--bbeesseettzztteennAAPPCCiinn G Gaanngg ggeesseettzztt wwuurrddee,, uunntteerrhhaallbb ddeess TTCCRR ((aallssoo ddiissttaall)) wwiieeddeerr aauußßeerr KKrraafftt sseettzztt.. I Innhhiibbiieerrtt wwiirrdd iinnssbbeessoonnddeerree ddiiee TTCCRR-- uunndd CCDD2288--aabbhhäännggiiggee SSiiggnnaallttrraannssdduukkttiioonn d deerr eexxttrraazzeelllluulläärreenn KKiinnaassee ((EERRKK [[CCaallvvoo eett aall..,, 11999977]])) ssoowwiiee NNFF--κκBB ((nnuucclleeaarr f faaccttoorr--kkaappppaa BB [[OOllssssoonn eett aall..,, 11999999]])).. DDaadduurrcchh iinnhhiibbiieerrtt CCTTLLAA--44 lleettzzttlliicchh ddiiee P Prroodduukkttiioonnvvoonnccddkk44,, ccddkk66uunnddccyycclliinn DD33,, wwaasseeiinn SSiissttiieerreenn ddeerr TT--ZZeelllleenn iinnddeerr G G11--PPhhaassee ddeess ZZeellllzzyykklluuss bbeewwiirrkktt ((KKrruummmmeell eett aall..,, 11999955,, WWaalluunnaass eett aall..,, 11999944,, B Brruunnnneerr eett aall..,, 11999999)).. DDaanneebbeenn wweerrddeenn ddiiee IILL--22--PPrroodduukkttiioonn ddeerr aakkttiivviieerrtteenn TT- -Z Zeellllee uunndd ddiiee IILL--22--RReezzeeppttoorr--EExxpprreessssiioonn rreedduuzziieerrtt.. BBiiss hheeuuttee bblleeiibbtt uunnggeekklläärrtt,, w weellcchhee ggeennaauueenn MMeecchhaanniissmmeenn ffüürr ddiieesseenn EEffffeekktt vveerraannttwwoorrttlliicchh ssiinndd.. EEiinn m möögglliicchheerrMMeecchhaanniissmmuussiissttddiieeSSeeqquueessttrriieerruunnggzzyyttooppllaassmmaattiisscchheerrKKiinnaasseennwwiieeddeerr L Lyymmpphhoozzyytteenn--KKiinnaasseeRRllkk,,JJaannuuss--KKiinnaasseeJJaakk--22uunnddddeerrSSrrcc--KKiinnaasseennFFyynn,,LLyynnuunndd L Lcckk,, wweellcchhee ffüürr ddiiee SSiiggnnaallwweeiitteerrlleeiittuunngg vvoonn CCDD2288 eesssseennttiieellll ssiinndd aabbeerr aauucchh g glleeiicchhzzeeiittiiggvvoonnCCTTLLAA--44 vveerrwweennddeett wweerrddeenn ((BBrruunnnneerreettaall..,, 11999999,, GGrreeeennwwaallddeett a all..,,22000022)).. 3 3.. DDaass pprrooxxiimmaalleeBBlloocckkaaddeemmooddeellllppoossttuulliieerrtt,, ddaassss CCTTLLAA--44ddiirreekkttaammTTCCRRsseeiinnee i innhhiibbiittoorriisscchhee WWiirrkkuunngg eennttffaalltteett.. UUnntteerrssttüüttzzuunngg eerrhhäälltt ddiieesseess MMooddeellll dduurrcchh ddiiee B Beeoobbaacchhttuunngg,, ddaassss CCTTLLAA--44 nnaacchh ddeerr TT--ZZeellllaakkttiivviieerruunngg aauuss ddeenn iinnttrraazzeelllluulläärreenn

Einleitung 13 S Sppeeiicchheerrnn ffrreeiiggeesseettzztt uunndd iinn ddeerr iimmmmuunnoollooggiisscchheenn SSyynnaappssee nneebbeenn ddeemm TTCCRR e exxpprriimmiieerrtt wwiirrdd.. DDaabbeeii kkaannnn eess mmiitt ddeerr ζζ––KKeettttee ddeess TTCCRR--CCDD33--KKoommpplleexxeess i inntteerraaggiieerreenn uunndd ddiiee PPhhoopphhoorryylliieerruunngg ddeerr ζζ--KKeettttee vveerrhhiinnddeerrnn,, wwaass ddiiee F FuunnkkttiioonnaalliittäättddeessTTCCRRuunnddddiieeeeiiggeennttlliicchhffoollggeennddeeTT--ZZeellllaakkttiivviieerruunngghheemmmmtt((LLeeee e ettaall..,,11999988))..DDiieeggeennaauueennMMeecchhaanniissmmeennssiinnddhhiieerrbbeeiijjeeddoocchhnnoocchhuunnbbeekkaannnntt.. D Diiee ddrreeii ddaarrggeesstteelllltteenn MMooddeellllee sscchhlliieeßßeenn ssiicchh nniicchhtt ggeeggeennsseeiittiigg aauuss.. ZZuulleettzztt w wuurrddeennddiieeoobbeennggeennaannnntteenn„„kkllaassssiisscchheenn““MMooddeelllleedduurrcchheeiinnMMooddeellllddeerrrreevveerrsseenn H Heemmmmmmuunngg eerrggäännzztt.. DDeennnn eess kkoonnnnttee eexxppeerriimmeenntteellll ggeezzeeiiggtt wweerrddeenn,, ddaassss dduurrcchh d diiee CCDD8800//CCDD8866--CCTTLLAA--44--BBiinndduunngg iinn ddeenn AAPPCC ((ddeennddrriittiisscchhee ZZeelllleenn)) eeiinnee H HoocchhrreegguullaattiioonnuunnddAAkkttiivviieerruunnggddeessEEnnzzyymmssIInnddoolleeaammiinn22,,33--DDiiooxxyyggeennaassee((IIDDOO)) e errffoollggtt..IIDDOOkkaattaabboolliissiieerrttTTrryyppttoopphhaann,,uunnddssoowwoohhllTTrryyppttoopphhaannmmaannggeellaallssaauucchhddiiee M Meettaabboolliitteenn ddiieesseerr eesssseennttiieelllleenn AAmmiinnoossääuurree hheemmmmeenn TT--ZZeelllleenn.. SSoommiitt wwiirrkktt C CTTLLAA--44zzuussäättzzlliicchhzzuusseeiinneennddiirreekktteennWWiirrkkuunnggeennaauuffddiieeTT--ZZeelllleennrreevveerrssüübbeerrddiiee L LiiggaattiioonnsseeiinneerrBBiinndduunnggssppaarrttnneerraauuffddeennAAPPCC((GGrroohhmmaannnneettaall..,,22000022,,FFaallllaarriinnooeett a all..,,22000033)).. V Voorr kkuurrzzeemm iisstt eeiinnee SSpplleeiißßvvaarriiaannttee vvoonn CCTTLLAA--44 eennttddeecckktt wwoorrddeenn,, wweellcchhee üübbeerr k keeiinneenneexxttrraazzeelllluulläärreennAAnntteeiillvveerrffüüggtt,,wwaassddiieeBBiinndduunnggaannddiieeLLiiggaannddeennCCDD8800uunndd C CDD8866 uunnmmöögglliicchh mmaacchhtt.. DDiieessee VVaarriiaannttee wwuurrddee eennttsspprreecchheenndd LLiiggaanndd- -u unnaabbhhäännggiiggeessCCTTLLAA--44 ggeennaannnntt((lliiggaannddiinnddeeppeennddeennttCCTTLLAA--44==lliiCCTTLLAA--44))..TTrroottzz f feehhlleennddeerr BBiinndduunnggssmmöögglliicchhkkeeiitt wwiirrkkttee ddiieessee SSpplleeiißßvvaarriiaannttee iinnhhiibbiittoorriisscchh uunndd h heemmmmtteeddiieeTT--ZZeellllpprroolliiffeerraattiioonnuunnddZZyyttookkiinnpprroodduukkttiioonn((VViijjaakkrriisshhnnaanneettaall..,,22000044;; C Chhiikkuummaa eett aall..,, 22000055)).. ÜÜbbeerr ddeenn WWiirrkkmmeecchhaanniissmmuuss hheerrrrsscchhtt nnoocchh UUnneeiinniiggkkeeiitt.. V Voorrggeesscchhllaaggeenn wwuurrddeenn eeiinnee MMooddiiffiikkaattiioonn ddeerr PPhhoopphhoorryylliieerruunngg ddeerr ζζ--KKeettttee ddeess T TCCRR uunndd//ooddeerr eeiinnee HHeemmmmuunngg ddeerr SSiiggnnaallttrraannssdduukkttiioonn dduurrcchh ddiiee eexxttrraazzeelllluulläärree K Kiinnaassee ((EERRKK)).. DDiieessee SSpplleeiißßvvaarriiaannttee ffiinnddeett ssiicchh vv..aa.. iinn TT--GGeeddääcchhttnniisszzeelllleenn uunndd T Trreegg uunndd iisstt ddaauueerrhhaafftt iinnhhiibbiittoorriisscchh wwiirrkkssaamm.. MMaann mmeeiinntt,, ddaassss ddiieessee D Daauueerriinnhhiibbiittiioonn ddeerr ggeennaannnntteenn ZZeelllleenn eeiinnee TT--ZZeellllaakkttiivviieerruunngg aauuff sscchhwwaacchhee S Siiggnnaallee hhiinn uunndd ssoommiitt aauucchh ddiiee EEnnttsstteehhuunngg vvoonn AAuuttooiimmmmuunneerrkkrraannkkuunnggeenn v veerrhhiinnddeerrnnssoollll.. N Neebbeenn ddiieesseenn mmoolleekkuullaarrbbiioollooggiisscchheenn MMooddeellllssiicchhttwweeiisseenn wwuurrddeenn iinn ddeenn lleettzztteenn J Jaahhrreenn aauucchh eehheerr aabbssttrraakktt--tthheeoorreettiisscchhee CCTTLLAA--44--FFuunnkkttiioonnssmmooddeellllee ffüürr ddiiee

Einleitung 14 i innhhiibbiittoorriisscchhee CCTTLLAA--44--WWiirrkkuunngg vvoorrggeesscchhllaaggeenn.. IImm FFoollggeennddeenn wweerrddeenn ddiiee zzwweeii M Mooddeelllleevvoorrggeesstteelllltt,,ddiieessiicchhggeeggeennsseeiittiiggnniicchhttaauusssscchhlliieeßßeenn:: D DaassSScchhwweelllleennmmooddeellll bbeessaaggtt,, ddaassss jjeeddee TT--ZZeellllee ffüürrddiiee vvoollllssttäännddiiggeeAAkkttiivviieerruunngg e eiinnee bbeessttiimmmmttee AAkkttiivviieerruunnggsssscchhwweellllee üübbeerrsscchhrreeiitteenn mmuussss.. RReeiicchhtt ddeerr GGrraadd ddeerr A Akkttiivviieerruunngg,, dd..hh.. ddiiee SSiiggnnaallssttäärrkkee nniicchhtt aauuss,, bblleeiibbtt ddiiee ZZeellllee iinnaakkttiivv.. DDaabbeeii iisstt n noocchh nniicchhtt ggeekklläärrtt,, oobb ddaass SSiiggnnaall ddeess TT--ZZeellllrreezzeeppttoorrss uunndd//ooddeerr ddiiee k koossttiimmuullaattoorriisscchheenn SSiiggnnaallee ((CCDD2288)) eeiinneenn bbeessttiimmmmtteenn SScchhwweelllleennwweerrtt üübbeerr- -s scchhrreeiitteennmmüüsssseenn..DDaassHHeemmmmmmooddeellllhhiinnggeeggeennggeehhttddaavvoonnaauuss,,ddaassssssttiimmuulliieerrtteeTT- -Z Zeelllleenn,, ddiiee iinn ddeenn ZZeellllzzyykklluuss eeiinnttrreetteenn,, dduurrcchh ddiiee WWiirrkkuunngg vvoonn CCTTLLAA--44 eeiinnee R Reessttrriikkttiioonn iihhrreerr TTeeiilluunnggsspphhaasseenn eerrffaahhrreenn,, dd..hh.. ddaassss iihhrree PPrroolliiffeerraattiioonn nnaacchh I Immmmuunnssttiimmuullaattiioonnggeehheemmmmttwwiirrdd((DDooyylleeeettaall..,,22000011)).. D DiieeFFrraaggee,, oobbCCTTLLAA--44ssttäärrkkeerrddiieeTThh11--ooddeerrddiieeTThh22--AAnnttwwoorrttiinnhhiibbiieerrtt,, kkaannnnbbiiss h heeuutteenniicchhtteeiinnddeeuuttiiggggeekklläärrttwweerrddeenn.. FFüürrbbeeiiddeeMMöögglliicchhkkeeiitteenn ggiibbtt eess HHiinnwweeiissee,, s soo ddaassss mmaann eevveennttuueellll aannnneehhmmeenn kkaannnn,, ddaassss CCTTLLAA--44 bbeeiiddee TTyyppeenn ääqquuiivvaalleenntt i innhhiibbiieerrtt((ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiittCChhaammbbeerrsseettaall..,,22000011)).. D Deerr EEiinnfflluussss vvoonn CCTTLLAA--44 aauuff ddiiee IInndduukkttiioonn eeiinneerr TT--ZZeellll--AAnneerrggiiee wwuurrddee iinn ddeenn l leettzztteenn1100JJaahhrreennvvoonnmmeehhrreerreennAArrbbeeiittssggrruuppppeetthheemmaattiissiieerrtt..DDaabbeeiikkoonnnntteeiinneerrsstteenn E Exxppeerriimmeenntteenn dduurrcchh CCTTLLAA--44--BBlloocckkaaddee eeiinnee ggeewwiissssee TT--ZZeellllssttiimmuullaattiioonn nnaacchh Z ZuuffuuhhrrvvoonneeiiggeennttlliicchhttoolleerrooggeenneennAAnnttiiggeennddoosseennbbeeoobbaacchhtteett wweerrddeenn((PPeerreezzeettaall..,, 1 1999977)).. IInn nnaacchhffoollggeennddeenn VVeerrssuucchheenn ffaannddeenn ssiicchh jjeeddoocchh wwiiddeerrsspprrüücchhlliicchhee E Errggeebbnniissssee bbzzggll.. AAnneerrggiiee--IInndduukkttiioonn dduurrcchh CCTTLLAA--44,, ssoo ddaassss ddiiee ddeeffiinniittiivvee RRoollllee f füürrCCTTLLAA--44uunnddAAnneerrggiieennoocchhuunnggeekklläärrttbblleeiibbtt.. SSoollcchheeWWiiddeerrsspprrüücchheellaasssseennssiicchh e evveennttuueellll dduurrcchh ddeenn ggeeggeennssäättzzlliicchheenn WWiirrkkmmeecchhaanniissmmuuss eeiinneerr CCTTLLAA--44--BBlloocckkaaddee m miitttteellss mmoonnookklloonnaalleerr CCTTLLAA--44--AAnnttiikköörrppeerr uunndd eeiinneerr CCTTLLAA--44--AAKK--BBiinndduunngg mmiitt g glleeiicchhzzeeiittiiggeerrKKrreeuuzzvveerrnneettzzuunngg ((LLiiggaattiioonn)) ddeerr AAnnttiikköörrppeerr eerrkklläärreenn.. DDiiee lleeddiigglliicchh m moonnookklloonnaallee EEiinnzzeellbbiinndduunngg bbeewwiirrkktt eeiinnee BBlloocckkaaddee uunndd ssoommiitt SSiiggnnaallaauuffhheebbuunngg d deessCCTTLLAA--44--MMoolleekküüllss..DDiieeLLiiggaattiioonnbbeewwiirrkktthhiinnggeeggeenneeiinneeSSttiimmuullaattiioonnuunnddssoommiitt Z Zuunnaahhmmeeddeessaannttii--eennttzzüünnddlliicchheennEEffffeekkttssvvoonnCCTTLLAA--44.. A AuucchhsscchheeiinnttCCTTLLAA--44bbeeiiddeerrIInndduukkttiioonnvvoonniinnhhiibbiittoorriisscchheennZZyyttookkiinneenneeiinneeRRoollllee z zuussppiieelleenn..ZZuummZZyyttookkiinnTTGGFFββggiibbtteesswwiiddeerrsspprrüücchhlliicchheeDDaatteenn..ZZwwaarrkkoonnnntteemmaann d duurrcchh CCTTLLAA--44--KKrreeuuzzvveerrnneettzzuunngg ((aallssoo LLiiggaattiioonn mmiitt ffuunnkkttiioonneelllleerr SSttiimmuullaattiioonn)) e eiinnee IInndduukkttiioonn ddeess aannttii--iinnffllaammmmaattoorriisscchheenn ZZyyttookkiinnss TTGGFFββ nnaacchhwweeiisseenn ((CChheenn eett

Einleitung 15 a all..,,11999988,,GGoommeesseettaall..,,22000000)),,jjeeddoocchhggaabbeesszzuulleettzzttaauucchhvveerrmmeehhrrttHHiinnwweeiissee,,ddaassss d diieeiinnhhiibbiittoorriisscchheeWWiirrkkuunnggvvoonnCCTTLLAA--44aauuffTT--ZZeelllleennTTGGFFββ--uunnaabbhhäännggiiggvveerrllääuufftt ( (SScchhwwaarrzz eett aall..,, 22000000;; SSuulllliivvaann eett aall..,, 22000011)).. VViieellmmeehhrr sscchheeiinntt ddaass aannttii- -e ennttzzüünnddlliicchheeZZyyttookkiinnIInntteerrlleeuukkiinn1100((IILL1100))dduurrcchhCCTTLLAA--44--AAkkttiivviieerruunnggiinndduuzziieerrtt z zuu wweerrddeenn ((SScchhwwaarrzz eett aall..,, 22000000;; JJoovvaasseevviicc eett aall..,, 22000044)).. DDiieess wwiieeddeerruumm ffüühhrrtt d diirreekkttzzuurrIInnhhiibbiieerruunnggddeessiimmmmuunnssttiimmuulliieerreennddeennZZyyttookkiinnssIIFFNNγγ.. I InnddeennlleettzztteennJJaahhrreennkkaammeesszzuurrRReennaaiissssaanncceeddeerrssooggeennaannnntteennrreegguullaattoorriisscchheennTT- -Z Zeelllleenn ((ffrrüühheerr TT--SSuupppprreessssoorr--ZZeelllleenn)),, wweellcchhee CCDD44-- uunndd CCDD2255--ppoossiittiivv ssiinndd.. AAuuff d diieesseenn ffiinnddeett ssiicchh eeiinnee kkoonnssttiittuuttiivvee EExxpprreessssiioonn vvoonn CCTTLLAA--44,, wweesshhaallbb ddiiee H Hyyppootthheessee aauuffkkaamm,, ddeerreenn TT--ZZeellll--iinnhhiibbiittoorriisscchhee WWiirrkkuunngg sseeii CCTTLLAA--44--ggeettrriiggggeerrtt.. A Akkttuueellllee EExxppeerriimmeennttee vveerrttrreetteenn jjeeddoocchh vviieellmmeehhrr ddiiee TThheessee,, ddaassss ddiiee rreegguullaattoo- -r riisscchheennTT--ZZeelllleennuunnddCCTTLLAA--44eehheerruunnaabbhhäännggiiggeewweennnngglleeiicchhaauucchhgglleeiicchhggeerriicchhtteettee F Fuunnkkttiioonneennaauussüübbeenn((TTaakkaahhaasshhiieettaall..,,22000000)).. B Beeii ddeerr EEnnttwwiicckklluunngg vvoonn AAuuttooiimmmmuunnkkrraannkkhheeiitteenn sscchheeiinntt CCTTLLAA--44 jjeeddoocchh eeiinnee w wiicchhttiiggee RRoollllee zzuu ssppiieelleenn.. DDeerr nnaattüürrlliicchhee ggeenneettiisscchhee PPoollyymmoorrpphhiissmmuuss,, ddeerr aauucchh d deennCCTTLLAA--44--RReezzeeppttoorrbbeettrriifffftt,,kkaannnnzzuuFFuunnkkttiioonnssvveerrlluusstteennffüühhrreennuunnddssoommiittddaass A Auuffttrreetteenn vvoonn AAuuttooiimmmmuunnkkrraannkkhheeiitteenn bbeeddiinnggeenn.. SSoo iisstt bbeeiissppiieellsswweeiissee ddeerr N Nuukklleeoottiidd--PPoollyymmoorrpphhiissmmuuss iinn ddeerr 66..11 kkbb 33`` RReeggiioonn vvoonn CCTTLLAA--44 mmiitt ddeerr M Maanniiffeessttaattiioonn vvoonn KKrraannkkhheeiitteenn wwiiee ddeemm MMoorrbbuuss BBaasseeddooww,, ddeerr A AuuttooiimmmmuunnhhyyppootthhyyrreeoosseeuunnddddeemmDDiiaabbeetteessmmeelllliittuussTTyyppIIaassssoozziiiieerrtt((UUeeddaaeettaall..,, 2 2000033::++4499GG--CCTT6600GG--HHaapplloottyyppddeerr33´´uunnttrraannssllaatteeddrreeggiioonnddeessCCTTLLAA--GGeennss))..DDuurrcchh d diiee MMuuttaattiioonn sscchheeiinntt ddiiee CCTTLLAA--44--EExxpprreessssiioonn ((aauuff RRNNAA--EEbbeennee)) eerrnniieeddrriiggtt zzuu w weerrddeenn.. WWeeiitteerree AAlllleellvvaarriiaanntteenn bbeeddiinnggeenn ddiiee EEnnttsstteehhuunngg ddeerr RRhheeuummaattooiiddeenn A Arrtthhrriittiiss ((RRooddrriigguueezz eett aall..,, 22000022:: 33´´uunnttrraannssllaatteedd rreeggiioonn ddeess CCTTLLAA--GGeennss mmiitt v veerrmmeehhrrtteemmAAnntteeiillvvoonnAATTllaarrggee--AAlllleelleenn))uunnddddeerrMMuullttiipplleennSSkklleerroossee((KKaannttaarrcciieett a all.. 22000033:: HHoommoozzyyggoottiiee ffüürr AATT88--AAlllleell vvoomm 33``((551144))--MMiikkrroossaatteelllliitteenn uunndd H Hoommyyzzyyggoottiieeffüürr55``((331188))**CC//EE11((4499))**AA//33``((551144))**AATT88--HHaapplloottyypp)).. A AllllddiieesseeEErrggeebbnniisssseezzeeiiggeenn,,ddaassssCCTTLLAA--44eeiinneewwiicchhttiiggee((iinnhhiibbiittoorriisscchhee))RRoolllleebbeeii d deerr TT--ZZeellllaakkttiivviieerruunngg ssppiieelltt uunndd eeiinn FFeehhlleenn ddiieesseess MMoolleekküüllss zzuu eeiinneemm mmiitt ddeemm L LeebbeennuunnvveerreeiinnbbaarreennKKoonnttrroollllvveerrlluussttddeessIImmmmuunnssyysstteemmssffüühhrrtt..

Einleitung 16 1 1..33..33 CCTTLLAA--44uunnddsseeiinneeBBeeddeeuuttuunnggiinnddeerrTTuummoorrtthheerraappiiee T Tuummoorreenn kköönnnneenn eeiinneenn iimmmmuunnooggeenneenn CChhaarraakktteerr hhaabbeenn.. DDiieess eerrkklläärrtt ssiicchh aauuss i ihhrreerr EEiiggeennsscchhaafftt,, ssppeezziiffiisscchhee ttuummoorreeiiggeennee AAnnttiiggeennee aauuff MMHHCCII zzuu pprräässeennttiieerreenn,, d diieevvoonn TT--ZZeelllleenn aallssffrreemmdd eerrkkaannnntt wweerrddeennkköönnnneenn.. DDiieesslleeiisstteenn CCDD88--ZZeelllleenn((iinn d diieesseemm FFaallll ttuummoorriinnffiillttrriieerreennddee LLyymmpphhoozzyytteenn [[TTIILL]] ggeennaannnntt)),, ddaa ssiiee mmiitt iihhrreemm T TCCRRaannTTuummoorr--MMHHCCIIbbiinnddeennkköönnnneenn..MMaannhhaattbbeerreeiittssffüürrvveerrsscchhiieeddeenneeTTuummoorreenn s sppeezziiffiisscchheeAAnnttiiggeenneeiiddeennttiiffiizziieerreenn kköönnnneenn.. BBeessoonnddeerrss bbeeii MMeellaannoommeenn ffaannddmmaann e eiinnee ggrrooßßee AAnnzzaahhll ssoollcchheerr TTuummoorraannttiiggeennee,, ddiiee aauucchh TTuummoorraabbssttooßßuunnggssaannttiiggeennee ( (ttuummoorr--rreejjeeccttiioonn aannttiiggeennss,, TTRRAA)) ggeennaannnntt wweerrddeenn,, wwiiee zz.. BB.. MMAAGGEE,, MMeellaann AA,, T Tyyrroossiinnaassee,, ggpp110000 uunndd ggpp7755.. DDaassss ddaass IImmmmuunnssyysstteemm ttrroottzz EExxpprreessssiioonn ddiieesseerr A Annttiiggeennee iinn vviieelleenn FFäälllleenn nniicchhtt eeiinnee RReeggrreessssiioonn ddeess TTuummoorrss bbeewwiirrkktt,, kkaannnn v veerrsscchhiieeddeennee GGrrüünnddee hhaabbeenn.. ZZuunnääcchhsstt „„pprrooffiittiieerrtt““ ddeerr TTuummoorr aallss kköörrppeerreeiiggeenneess G Geewweebbee vvoonn ddeenn pphhyyssiioollooggiisscchheenn TToolleerraannzzmmeecchhaanniissmmeenn ddeess IImmmmuunnssyysstteemmss.. A AuußßeerrddeemmggiibbtteesseeiinneeVViieellzzaahhllvvoonniimmmmuunnoollooggiisscchheennEEssccaappee--MMeecchhaanniissmmeenn,,ddiiee T TuummoorreennvvoorrddeemmAAnnggrriiffffddeessIImmmmuunnssyysstteemmsssscchhüüttzzeennkköönnnneenn:: 1 1..DDiieeTTuummoorraannttiiggeenneewweerrddeennnniicchhttiinnddeerrffüürrddiieeTT--ZZeellllaakkttiivviieerruunnggnnoottwweennddiiggeenn D DiicchhtteeaauuffddeerrOObbeerrffllääcchheeeexxpprriimmiieerrtt.. 2 2..DDiieezzuurrPPrräässeennttaattiioonnnnööttiiggeennMMHHCCII--MMoolleekküülleessiinnddzzuummTTeeiillaauuffddeennmmaalliiggnneenn Z Zeelllleennhheerruunntteerrrreegguulliieerrtt,, ssooddaassss eess zzuu eeiinneemm FFeehhlleenn kkoossttiimmuullaattoorriisscchheerr bbzzww.. zzuu z zuu ssttaarrkkeenn iinnhhiibbiittoorriisscchheenn SSiiggnnaalleenn ((IILL1100,, TTGGFFββ,, PPrroossttaaggllaannddiinnee,, rreegguullaattoorriisscchhee T T--ZZeelllleenn,,CCTTLLAA--44))kkoommmmtt.. 3 3..DDiieeAAnnzzaahhlluunndd//ooddeerrFFuunnkkttiioonnddeerrTT--HHeellffeerrzzeelllleenn((CCDD44))iissttnniicchhttssuuffffiizziieenntt.. 4 4.. DDiiee TTuummoorraannttiiggeennee ssiinndd ggaarr kkeeiinnee kköörrppeerrffrreemmddeenn AAnnttiiggeennee,, ssoonnddeerrnn sstteelllleenn v viieellmmeehhrr pphhyyssiioollooggiisscchhee GGeewweebbeeaannttiiggeennee ddaarr,, ddiiee lleeddiigglliicchh ffüürr ddaass jjeewweeiilliiggee ( (eennttaarrtteettee))GGeewweebbeettyyppiisscchhssiinndd.. Z Ziieell eeiinneerr iimmmmuunnoollooggiisscchheenn AAnnttii--TTuummoorrtthheerraappiiee mmuussss eess aallssoo sseeiinn,, ddiiee T Tuummoorrttoolleerraannzz zzuu dduurrcchhbbrreecchheenn uunndd ddiiee EEssccaappee--MMeecchhaanniissmmeenn zzuu üübbeerrwwiinnddeenn.. E Eiinnee MMöögglliicchhkkeeiitt,, ddiieess zzuu eerrrreeiicchheenn,, bbeesstteehhtt ddaarriinn,, ddiiee TTuummoorraannttiiggeennee ddeemm I Immmmuunnssyysstteemm iinn iimmmmuunnooggeenneerr FFoorrmm zzuu pprräässeennttiieerreenn.. DDiieess ggeelliinnggtt dduurrcchh V VaakkzziinniieerruunnggddeessPPaattiieenntteennmmiittaauuffggeerreeiinniiggtteemm TTuummoorraannttiiggeenn.. DDaass AAnnttiiggeennkkaannnn j jeettzztt vvoonn ddeenn AAPPCC ddeess PPaattiieenntteenn aauuffggeennoommmmeenn uunndd pprräässeennttiieerrtt wweerrddeenn.. DDiiee f foollggeennddee SSttiimmuullaattiioonn ddeess IImmmmuunnssyysstteemmss ((bbeessoonnddeerrss ddeerr CCDD88--ZZeelllleenn)) ffüühhrrtt zzuu

Einleitung 17 e eiinneerrRReeggrreessssiioonnddeessTTuummoorrss((JJääggeerreettaall..,,11999966;;RRiivvoollttiinniieettaall..,,11999955;;VViisssseerreenneett a all..,, 11999955)).. NNoocchh vveerrssttäärrkktt wweerrddeenn kkaannnn ddiieessee RReeaakkttiioonn dduurrcchh ZZuuggaabbee vvoonn GGMM- -C CSSFF((GGrraannuulloozzyytteenn--MMaakkrroopphhaaggeenn--kkoolloonniieessttiimmuulliieerreennddeerrFFaakkttoorr))aallssssyysstteemmiisscchheess A Addjjuuvvaannss((JJääggeerreett aall..,, 11999966))ooddeerraauucchhdduurrcchhiinn--vviittrroo--KKoonnjjuuggaattiioonnddeerrAAnnttiiggeennee a ann AAddjjuuvvaannttiieenn wwiiee BBCCGG ooddeerr EExxttrraakkttee aauuss CCoorryynneebbaacctteerriiuumm ppaarrvvuumm.. EErrkklläärrtt w weerrddeennkkaannnnddiieeVVeerrbbeesssseerruunnggmmiitttteellssGGMM--CCSSFFdduurrcchhddiieevveerrmmeehhrrtteeMMoobbiilliissaattiioonn d deennddrriittiisscchheerrZZeelllleennaauussddeemmKKnnoocchheennmmaarrkkzzuurrAAnnttiiggeennpprräässeennttaattiioonn.. D Duurrcchh eeiinnee zzuussäättzzlliicchhee GGaabbee vvoonn aannttii--CCTTLLAA--44--AAnnttiikköörrppeerrnn vveerrsspprriicchhtt mmaann ssiicchh t thheerraappeeuuttiisscchh eeiinn AAuusssscchhaalltteenn ddeerr nneeggaattiivv rreegguulliieerreennddeenn FFuunnkkttiioonn vvoonn CCTTLLAA--44,, w waasseeiinneezzuussäättzzlliicchheeAAkkttiivviieerruunnggddeessIImmmmuunnssyysstteemmssiimmKKaammppffggeeggeennddeennTTuummoorr b beeddeeuutteennwwüürrddee.. DDeennnn mmaann wweeiißß,, ddaassss CCTTLLAA--44 eesssseennttiieellll ffüürrddiiee IInndduukkttiioonnvvoonn p peerriipphheerreerr TToolleerraannzz iisstt ((PPeerreezz eett aall..,, 11999977)).. IInn ttiieerreexxppeerriimmeenntteelllleenn VVeerrssuucchheenn k koonnnnttee bbeerreeiittss eeiinnee ssiiggnniiffiikkaannttee SStteeiiggeerruunngg ddeerr TTuummoorraabbwweehhrr bbeeiimm CCoolloonn--,, N Niieerreennkkaarrzziinnoomm,,LLyymmpphhoommeennuunnddddeemmFFiibbrroossaarrkkoommdduurrcchhGGaabbeevvoonnaannttii--CCTTLLAA- -4 4--AAnnttiikköörrppeerrnnggeezzeeiiggttwweerrddeenn((YYaannggeettaall..,,11999977,,HHuurrwwiittzzeettaall..,,11999988,,SShhrriikkaanntteett a all..,, 11999999,,SSoottoommaayyoorreett aall..,,11999999))..SSeellbbssttwweennnnddiieeCCTTLLAA--44--AAnnttiikköörrppeerrmmeehhrraallss e eiinneeWWoocchhee nnaacchh IImmppllaannttaattiioonn eeiinneess TTuummoorrss aapppplliizziieerrtt wwuurrddeenn,, kkaammeess nnoocchh zzuu e eiinneerrddeeuuttlliicchheennTTuummoorrrreeggrreessssiioonn((LLeeaacchh eett aall..,, 11999966)).. IInn ddeennlleettzztteennJJaahhrreennggaabb e ess vveerrmmeehhrrtt SSttuuddiieenn zzuu VVaakkzziinniieerruunnggeenn bbeeiimm MMaalliiggnneenn MMeellaannoomm uunntteerr Z Zuuhhiillffeennaahhmmee vvoonn GGMM--CCSSFF ((ss..oo..,, HHuuaanngg eett aall..,, 11999944)),, wweellcchhee jjeeddoocchh nniicchhtt z zuuffrriieeddeenn sstteelllleennddee EErrggeebbnniissssee eerrbbrraacchhtteenn.. UUnntteerr ZZuuggaabbee vvoonn CCTTLLAA--44- -A AnnttiikköörrppeerrnniimmmmuurriinneennMMooddeellllkkaammeessjjeeddoocchhzzuuAAnnsspprreecchhrraatteennvvoonnbbiisszzuu6677%% ( (vvaannEEllssaasseettaall..,,11999999;;vvaannEEllssaasseettaall..,,22000011))..IInntteerreessssaanntteerrwweeiisseesstteelllltteessiicchhnnaacchh V Vaakkzziinniieerruunngg uunndd CCTTLLAA--44--AAKK--GGaabbee eeiinnee DDeeppiiggmmeennttiieerruunngg eeiinn ((sspprriicchhtt ffüürr B Beekkäämmppffuunngg mmeellaannoozzyyttäärreerr ZZeelllleenn.. DDiieess ddeeuutteett ddaarraauuffhhiinn,, ddaassss dduurrcchh CCTTLLAA--44- -B Blloocckkaaddee aauucchh ddiiee TToolleerraannzz ggeeggeennüübbeerr nnoorrmmaalleenn MMeellaannoozzyytteenn ggeebbrroocchheenn wwiirrdd.. D DiieesseessPPhhäännoommeenn wweeiisstt aauuff ddaassRRiissiikkoo ddeerr AAuuttooiimmmmuunniinndduukkttiioonneeiinneerrCCTTLLAA--44- -A AKK--TThheerraappiiee hhiinn.. EEiinnee CCTTLLAA--44--AAnnttiittuummoorrtthheerraappiiee wwiirrdd ddaahheerr vv..aa.. iinn ddeerr T Thheerraappiieevvoonnssooggeennaannnntteennnniicchhtt--eesssseennttiieelllleennTTuummoorreennaannggeewwaannddtt,, aallssooTTuummoorreenn v voonnOOrrggaanneenn,,ddiieenniicchhttuunnbbeeddiinnggttlleebbeennssnnoottwweennddiiggssiinnddwwiieeddiieeMMiillzz,,ddiieePPrroossttaattaa e ettcc..DDaadduurrcchhrreedduuzziieerrttmmaannddaassRRiissiikkooddeerrGGeeffäähhrrdduunnggddeessggeessaammtteennOOrrggaanniissmmuuss d duurrcchh IInndduukkttiioonn vvoonn AAuuttooiimmmmuunniittäätt ggeeggeenn lleebbeennsswwiicchhttiiggee OOrrggaannee.. AAbbeerr sseellbbsstt b beeii EEiinnhhaallttuunngg ddiieesseerr VVoorrggaabbee ((zz..BB.. MMeellaannoozzyytteenn--AAnnttiiggeenn--VVaakkzziinniieerruunngg pplluuss C CTTLLAA--44--BBlloocckkaaddee bbeeiimm mmeettaassttaassiieerrtteenn MMaalliiggnneenn MMeellaannoomm)) kkaamm eess bbeerreeiittss zzuurr

Einleitung 18 I Inndduukkttiioonn vvoonn AAuuttooiimmmmuunniittäätt ((AAuuttooiimmmmuunn--UUvveeiittiiss,, EExxaanntthheemmee,, eennttzzüünnddlliicchhee D Daarrmmeerrkkrraannkkuunnggeenn)) aalllleeiinn dduurrcchh ddiiee CCTTLLAA--44--BBlloocckkaaddee ((RRoobbiinnssoonn eett aall..,, 22000044,, S Saannddeerrssoonneettaall..,,22000055))..BBeessttiimmmmtteeCCTTLLAA--44--GGeennoottyyppeennsscchheeiinneennddaabbeeiibbeessoonnddeerrss p prrääddiissppoonniieerrttzzuusseeiinn((UUeeddaaeettaall..,,22000033)).. M Miittttlleerrwweeiillee iisstt eeiinn mmoonnookklloonnaalleerr CCTTLLAA--44--AAKK kkoommmmeerrzziieellll eerrhhäällttlliicchh,, ddaass I Ippiilliimmuummaabb((MMDDXX--001100vvoonnddeerrFFiirrmmaaMMeeddaarreexx,,UUSSAA)),,wweellcchheerrbbiisszzuummhheeuuttiiggeenn T Taagg iinn zzaahhllrreeiicchheenn SSttuuddiieenn ggeetteesstteett wwuurrddee.. EErrggeebbnniissssee aauuss eeiinneerr 22000033 v veerrööffffeennttlliicchhtteenn PPhhaassee II--SSttuuddiiee,, iinn ddeerr 1144 MMeellaannoommppaattiieenntteenn vvaakkzziinniieerrtt uunndd a annsscchhlliieeßßeenndd mmiitt CCTTLLAA--44--AAKK bbeehhaannddeelltt wwuurrddeenn,, eerrbbrraacchhtteenn eeiinnee kklliinniisscchhee A Annsspprreecchhrraatteevvoonn2211%%((33vvoonn1144PPaattiieenntteenn;;PPhhaanneettaall..,,22000033))..WWeeiitteerreePPhhaasseeII//IIII–– S SttuuddiieennmmiittVVaakkzziinniieerruunngguunnddCCTTLLAA--44--AAKK--GGaabbeewwuurrddeennaannggeesscchhlloosssseenn,,wweellcchhee A Annsspprreecchhrraatteennvvoonn1133%%((77vvoonn 5566 PPaattiieenntteenn;; AAttttiiaa eett aall..,, 22000055))uunnddbbeeii33vvoonn77 M Meellaannoomm--uunnddbbeeii22vvoonn22OOvvaarriiaall--CCAA--PPaattiieenntteenneerrggaabb((HHooddiieettaall..,,22000033))..OOhhnnee V Vaakkzziinniieerruunnggzzeeiiggttee ssiicchh uunntteerr TThheerraappiiee ddeess mmeettaassttaassiieerrtteenn MMaalliiggnneenn MMeellaannoommss m miitt CCTTLLAA--44--AAKK uunndd ZZuuggaabbee vvoonn IILL22 eeiinn AAnnsspprreecchheenn vvoonn 2222%% ((88 vvoonn 3366 P Paattiieenntteenn;; MMaakkeerr eett aall..,, 22000055)).. EEiinnee wweeiitteerree SSttuuddiiee mmiitt eeiinneerr CCTTLLAA--44--AAKK- -M Moonnootthheerraappiiee wwiieess lleeddiigglliicchh eeiinnee AAnnsspprreecchhrraattee vvoonn 1111%% ((55 vvoonn 4466 PPaattiieenntteenn)) b beeiimm mmeettaassttaassiieerrtteenn MMaalliiggnneenn MMeellaannoomm aauuff ((MMaakkeerr eett aall..,, 22000066)).. UUnntteerr V Veerrwweenndduunngg eeiinneess aannddeerreenn mmoonnookklloonnaalleenn hhuummaanneenn CCTTLLAA--44--AAKK ((TTiicciilliimmuummaabb v voonn ddeerr FFiirrmmaa PPffiizzeerr,, UUSSAA)) ggaabb eess eeiinn AAnnsspprreecchheenn vvoonn 1177%% ((55 vvoonn 3300 M Meellaannoommppaattiieenntteenn;; RReeuubbeenn eett aall..,, 22000066)).. EEiinnee PPiilloottssttuuddiiee bbeeii mmeettaassttaassiieerrtteemm C Coolloonn--CCAA,,PPrroossttaattaa--CCAAuunnddvviieerrPPaattiieenntteennmmiittnnoonn--HHooddggkkiinn--LLyymmpphhoommeenn((NNHHLL)) m miitt VVaakkzziinniieerruunngg uunndd aannsscchhlliieeßßeenndd CCTTLLAA--44--AAKK--TThheerraappiiee eerrggaabb eeiinnee T Tuummoorrrreeggrreessssiioonn bbeeii zzwweeii ddeerr LLyymmpphhoommppaattiieenntteenn,, wweesshhaallbb aakkttuueellll eeiinnee PPhhaassee I I//IIII--SSttuuddiiee zzuu CCTTLLAA--44--AAKK uunndd ffoolllliikkuulläärreenn LLyymmpphhoommeenn dduurrcchhggeeffüühhrrtt wwiirrdd ( (OO``MMaahhoonnyyeettaall..,,22000077)).. I InntteerreessssaanntteerrwweeiisseezzeeiiggeennssiicchhddiieebbeesstteennAAnnsspprreecchhrraatteennjjeewweeiillssbbeeiiddeennPPaattiieenntteenn,, b beeii ddeenneenn ssiicchh uunntteerr CCTTLLAA--44--TThheerraappiiee iimmmmuunnoollooggiisscchh ggeettrriiggggeerrttee N Neebbeennwwiirrkkuunnggeenn eeiinnsstteelllleenn wwiiee DDeerrmmaattiittiiddeenn,, DDiiaarrrrhhooeenn,, VViittiilliiggoo,, H Hyyppoopphhyysseennuunntteerrffuunnkkttiioonn ssoowwiiee HHyyppoo-- uunndd HHyyppeerrtthhyyrreeoossee.. DDiieess bbeeddeeuutteett,, ddaassss s siicchh hhiieerr ttaattssääcchhlliicchh eeiinn DDuurrcchhbbrreecchheenn ddeerr CCTTLLAA--44--bbeeddiinnggtteenn AAnnttiiiinnffllaammmmaattiioonn e eiinnsstteelllltt.. DDiieesseess DDuurrcchhbbrreecchheenn aakkttiivviieerrtt nneebbeenn ddeenn oo..gg.. ((uunneerrwwüünnsscchhtteenn)) S SyymmppttoommeenneerrffrreeuulliicchheerrwweeiisseeaauucchheeiinneeeeffffeekkttiivveeAAnnttiittuummoorraannttwwoorrtt((AAttttiiaaeettaall..,, 2 2000055;;MMaakkeerreettaall..,, 22000055;; RReeuubbeenn eett aall..,, 22000066)).. UUnntteerrssuucchhuunnggeennkkoonnnntteenn zzeeiiggeenn,,

Einleitung 19 d daassssssiicchhuunntteerrCCTTLLAA--44--AAKK--TThheerraappiiee eeiinneenn RReedduukkttiioonnddeerrTTrreegg--AAnnzzaahhlluunnddddeerr I ILL1100--SSeekkrreettiioonn eeiinnsstteelllltt.. PPaarraalllleell kkoommmmtt eess zzuu eeiinneemm AAnnssttiieegg ddeess SSeerruumm--IILL22 ( (RReeuubbeenneettaall.. 22000066)).. AAuucchhwweennnnddeerrTTrreegg--AAbbffaallllnnuurrtteemmppoorräärr iisstt ((MMaakkeerreettaall..,, 2 2000055)),,sscchheeiinnttssiicchhddaadduurrcchheeiinn aannhhaalltteennddeerrAAnnttiittuummoorreeffffeekktteeiinnzzuusstteelllleenn,, OObbddeerr W Wiirrkkmmeecchhaanniissmmuuss ddeerr CCTTLLAA--44--AAKK--TThheerraappiiee jjeeddoocchh eehheerr aauuff eeiinneerr aallllggeemmeeiinn v veerrbbeesssseerrtteenn IImmmmuunnaannttwwoorrtt ((MMaakkeerr eett aall..,, 22000055)) ooddeerr eeiinneemm ssppeezziiffiisscchheenn ( (FFuunnkkttiioonnss--))VVeerrlluusstt ddeerr TTrreegg bbeerruuhhtt ((OO``MMaahhoonnyy eett aall..,, 22000077)) iisstt nnoocchh nniicchhtt e ennddggüüllttiigg ggeekklläärrtt.. DDaazzuu llaauuffeenn ddeerrzzeeiitt zzaahhllrreeiicchhee kklliinniisscchhee uunndd tthheeoorreettiisscchhee S Sttuuddiieenn..OOffffeennssiicchhttlliicchhiissttnnuurr,,ddaassssbbeeiiPPaattiieenntteennmmiitteerrffoollggrreeiicchheerrCCTTLLAA--44--AAKK- -g geettrriiggggeerrtteerr TTuummoorrrreeggrreessssiioonn eeiinnee ddeeuuttlliicchhee TTuummoorriinnffiillttrraattiioonn dduurrcchh TT- -L Lyymmpphhoozzyytteennzzuubbeeoobbaacchhtteennwwaarr((OO``MMaahhoonnyyeettaall..,,22000077)).. A AllssEErrggäännzzuunnggzzuurroobbeennbbeesscchhrriieebbeenneennTThheerraappiieemmiittvvoollllssttäännddiiggeennmmoonnookklloonnaalleenn C CTTLLAA--44--AAKK wwuurrddee aauucchh eeiinnee wweeiitteerree tthheerraappeeuuttiisscchhee OOppttiioonn zzuurr i immmmuunnoollooggiisscchheenn TTuummoorrbbeekkäämmppffuunngg eennttwwiicckkeelltt.. DDiieessee bbeerruuhhtt aauuff eeiinneerr V Veerraabbrreeiicchhuunnggvvoonn ssppeezziiffiisscchheenn RRNNAA--KKuurrzzssttüücckkeenn ((ssooggeennaannnntteeOOlliiggoonnuukklleeoottiidd- -A Appttaammeerree)),, wweellcchhee ssppeezziiffiisscchh aann CCTTLLAA--44 bbiinnddeenn,, uumm ssoommiitt sseeiinnee FFuunnkkttiioonn b blloocckkiieerreenn.. DDiieessee MMeetthhooddee ssoollll äähhnnlliicchh wwiirrkkeenn wwiiee aannttii-- CCTTLLAA--44--AAKK,, wwäärree j jeeddoocchhddeeuuttlliicchhpprreeiisswweerrtteerr((SSaannttuullllii--MMaarroottttooeettaall..22000033)).. 1 1..44HHyyppeerrtthheerrmmiieeiinnddeerrTTuummoorrtthheerraappiiee D Daa iinn ddiieesseerr AArrbbeeiitt ddiiee CCTTLLAA--44--EExxpprreessssiioonn aauuff PPBBLL vvoonn HHyyppeerrtthheerrmmiiee- -b beehhaannddeelltteennuunntteerrssuucchhttwwuurrddee,,ssoollllhhiieerrkkuurrzzddaassPPrriinnzziippddeerrHHyyppeerrtthheerrmmiieeeerrkklläärrtt w weerrddeenn((ÜÜbbeerrssiicchhttssaarrbbeeiitteennvvaannddeerrZZeeeeeettaall..,,22000022;;WWuusstteettaall..,,22000033)).. D Diiee HHyyppeerrtthheerrmmiiee iisstt eeiinn tthheerraappeeuuttiisscchheess VVeerrffaahhrreenn,, bbeeii wweellcchheemm bbeeii T Tuummoorrppaattiieenntteenn ddeerr ggeessaammttee KKöörrppeerr ooddeerr nnuurr eeiinn TTeeiill ((rreeggiioonnaallee ooddeerr G Gaannzzkköörrppeerrhhyyppeerrtthheerrmmiiee))ffüürreeiinneennddeeffiinniieerrtteennZZeeiittrraauummaauuff4400--4433°°CCeerrhhiittzzttwwiirrdd.. K Koommbbiinniieerrtt wwiirrdd ddiieessee MMeetthhooddee mmiitt eeiinneerr CChheemmoo-- ooddeerr RRaaddiiootthheerraappiiee,, wwaass n naacchhggeewwiieesseenneerrmmaaßßeenneeiinnee ggeesstteeiiggeerrttee TTuummoorrrreeggrreessssiioonnbbeewwiirrkktt.. DDiieeWWiirrkkwweeiissee w wiirrddvveerrmmuuttlliicchhnneebbeennddeerrddiirreekkttzzyyttoottooxxiisscchheennWWiirrkkuunnggbbeeiiTTeemmppeerraattuurreenn>>4422°°CC ü übbeerrddiiee dduurrcchh ddiiee HHyyppeerrtthheerrmmiieebbeeddiinnggttee MMeehhrrppeerrffuussiioonn ddeess eerrhhiittzztteennGGeewweebbeess b beeddiinnggtt ((EErrhhööhhuunngg ddeerr bbaassaalleenn TTuummoorrppeerrffuussiioonn)).. MMaann wweeiißß,, ddaassss TTuummoorreenn iinn a auuffggrruunndd iihhrreess rraasscchheenn uunndd rreellaattiivv uunnkkoonnttrroolllliieerrtteenn WWaacchhssttuummss ooffttmmaallss m miinnddeerrppeerrffuunnddiieerrttssiinndd,,wwaassddiieeWWiirrkkuunnggkkllaassssiisscchheerrCChheemmoo--uunnddRRaaddiiootthheerraappiieenn

Einleitung 20 v veerrmmiinnddeerrtt.. DDeerreennWWiirrkkssaammkkeeiitt wwiirrdddduurrcchh ddiiee nnaacchhhhaallttiiggeePPeerrffuussiioonnsssstteeiiggeerruunngg d duurrcchhHHyyppeerrtthheerrmmiieevveerrbbeesssseerrtt.. E EiinnwweeiitteerreessWWiirrkkpprriinnzziippiissttddiieedduurrcchhddiieeHHyyppeerrtthheerrmmiieebbeeddiinnggtteennIInndduukkttiioonnvvoonn H Hiittzzeesscchhoocckkpprrootteeiinneenn ((hheeaatt sshhoocckk pprrootteeiinnss)).. DDiieess iisstt eeiinnee PPrrootteeiinnggrruuppppee,, wweellcchhee i inn eerrhhiittzztteenn ((ggeessttrreesssstteenn)) ZZeelllleenn pphhyyssiioollooggiisscchheerrwweeiissee ggeebbiillddeett wwiirrdd.. IIhhrree F Fuunnkkttiioonneenn rreeiicchheenn vvoonn ddeerr SSttaabbiilliissiieerruunngg ddeess ZZyyttoosskkeelleetttteess uunndd ddeess Z Zeellllmmeettaabboolliissmmuuss bbiiss zzuurr iimmmmuunnoollooggiisscchheenn OObbeerrffllääcchheennmmaarrkkiieerruunngg üübbeerrhhiittzztteerr Z Zeelllleenn,, ddiiee ddaadduurrcchh aakkttiivviieerreennddee LLiiggaannddeenn ffüürr NNKK--ZZeelllleenn eexxpprriimmiieerreenn.. DDiieess ggiilltt b beessoonnddeerrss ffüürr TTuummoorrzzeelllleenn,, ddiiee nnaacchh HHyyppeerrtthheerrmmiiee dduurrcchh ssppeezziieellllee H Hiittzzeesscchhoocckkpprrootteeiinnee mmaarrkkiieerrtt uunndd ddaadduurrcchh aallss iimmmmuunnooggeenn eerrkkaannnntt wweerrddeenn ( (MMuulltthhooffff eett aall..,, 11999955)).. DDeess WWeeiitteerreenn aakkttiivviieerreenn vvoonn nneekkrroottiisscchheenn ZZeelllleenn f frreeiiggeesseettzztteeHHiittzzeesscchhoocckkpprrootteeiinneeAAPPCCwwiieeMMaakkrroopphhaaggeennuunnddddeennddrriittiisscchheeZZeelllleenn.. E Ess kkoommmmtt ssoommiitt ssoowwoohhll zzuurr AAkkttiivviieerruunngg ddeess aannggeebboorreenneenn ((uunnssppeezziiffiisscchheenn)) I Immmmuunnssyysstteemmss aallss aauucchh ddeess eerrwwoorrbbeenneenn ((ssppeezziiffiisscchheenn)),, wwaass ddiiee TTuummoorraabbwweehhrr v veerrbbeesssseerrtt.. 1 1..55ZZiieelleeddeerrAArrbbeeiitt I InnddiieesseerrAArrbbeeiittwwuurrddeennddrreeiiZZiieelleevveerrffoollggtt:: 1 1.. ZZuunnääcchhsstt ssoollllttee ddiiee CCTTLLAA--44--EExxpprreessssiioonn aauuff ttuummoorriinnffiillttrriieerreennddeenn LLyymmpphhoo- -z zyytteenn ((TTIILL)) uunntteerrssuucchhtt wweerrddeenn.. HHiieerrzzuu ssoolllltteenn mmiitt iimmmmuunnhhiissttoocchheemmiisscchheenn D Dooppppeellffäärrbbuunnggeenn CCTTLLAA--44--ppoossiittiivvee TT--ZZeelllleenn iinn MMeellaannoommsscchhnniitttteenn n naacchhggeewwiieesseenn uunndd qquuaannttiiffiizziieerrtt wweerrddeenn.. DDaa eess mmiittttlleerrwweeiillee zzaahhllrreeiicchhee S Sttuuddiieennggiibbtt,, ddiiee ddeenn EEffffeekktt eeiinneerr aannttii--CCTTLLAA--44--TThheerraappiieebbeeii TTuummoorreerrkkrraann- -k kuunnggeenn bbeelleeggeenn ((ss.. 11..33..33)),, ssiinndd ddiiee ZZiieellzzeelllleenn ddeerr CCTTLLAA--44--BBlloocckkaaddee vvoonn g grrooßßeemm IInntteerreessssee.. KKaannddiiddaatteenn ssiinndd ddiiee TTIILL iimm TTuummoorrggeewweebbee sseellbbsstt ssoowwiiee C CDD44--ZZeelllleenniimmrreeggiioonnaalleennLLyymmpphhkknnootteenn,,ddiieennaacchhTTuummoorraannttiiggeenn--EErrkkeennnnuunngg a auuffpprrooffeessssiioonneelllleennaannttiiggeennpprräässeennttiieerreennddeennZZeelllleennHHiillffeeffüürrttuummoorrssppeezziiffiisscchhee C CDD88--KKiilllleerrzzeelllleennlleeiisstteenn.. 2 2.. AAuußßeerrddeemmssoolllltteeggeepprrüüffttwweerrddeenn,,oobbuunnddmmiittwweellcchheerrKKiinneettiikktthheerraappeeuuttiisscchhee G Gaannzzkköörrppeerrhhyyppeerrtthheerrmmiiee bbeeii TTuummoorrppaattiieenntteenn zzuu eeiinneerr AAkkttiivviieerruunngg ddeerr TT- -Z Zeelllleenn ffüühhrrtt.. AAllss MMaarrkkeerr ddeerr TT--ZZeellll--AAkkttiivviieerruunngg ddiieennttee ddiiee CCTTLLAA--44-