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4.2 Stämme, Plasmide und Oligonukleotide

4.2.2 Plasmide

Material

134

135

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1178 (pYM1)

3HA.kanMX6, Ampr (Knop et al., 1999) BHUM1186 ACT1, Ampr

Vektor für die Herstellung einer ACT1-Sonde mit den Primern fw_ACT1 und rev_ACT1.

Stammsammlung AG Mösch

BHUM1300 3HA-kanMX6, Ampr

Die CaURA3-Kassette wurde mit BglII und EcoRV aus dem Vektor pKT209 (BHUM1098) geschnitten und über die gleichen Restriktionsschnittstellen in den Vektor pYM1 (BHUM1078) ligiert.

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BHUM1243 (pLG312n)

PCYC1-lacZ, URA3, 2 μm, Ampr (Rothfels et al., 2005) BHUM1266

(pLG312n_2/1)

PCYC1-PFLO11

-[421-1]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3

Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-2/1-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1267 (pLG312n_3/2)

PCYC1-PFLO11

-[620-182]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-3/2-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1268 (pLG312n_4/3)

PCYC1-PFLO11

-[820-381]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-4/3-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1269 (pLG312n_5/4)

PCYC1-PFLO11-[1018-591]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-5/4-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1270 (pLG312n_5)

PCYC1-PFLO11-[1018-779]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus pFLO11-5 (Braus et al., 2003). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

Material

136

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1271 (pLG312n_6/5)

PCYC1-PFLO11

-[1220-779]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-6/5-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1272 (pLG312n_6)

PCYC1-PFLO11-[1220-981]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus pFLO11-6 (Braus et al., 2003). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1273 (pLG312n_7/6)

PCYC1-PFLO11

-[1421-981]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-7/6-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1274 (pLG312n_8/7)

PCYC1-PFLO11

-[1620-1182]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-8/7-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1275 (pLG312n_9/8)

PCYC1-PFLO11

-[1820-1381]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-9/8-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1276 (pLG312n_9)

PCYC1-PFLO11-[1820-1573]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus pFLO11-9 (Braus et al., 2003). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1277 (pLG312n_10/9)

PCYC1-PFLO11

-[2020-1573]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-10/9-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

137

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1278 (pLG312n_10)

PCYC1-PFLO11

-[2020-1781]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus pFLO11-10 (Braus et al., 2003). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_ YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1279 (pLG312n_11/10)

PCYC1-PFLO11-[2220-1781]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-11/10-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_

YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1280 (pLG312n_12/11)

PCYC1-PFLO11

-[2420-1981]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-12/11-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_

YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1281 (pLG312n_13/12)

PCYC1-PFLO11-[2620-2181]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-13/12-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_

YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1282 (pLG312n_14/13)

PCYC1-PFLO11

-[2820-2381]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-14/13-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_

YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1283 (pLG312n_15/14)

PCYC1-PFLO11

-[2984-2581]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Die Amplifikation des PFLO11-Fragments erfolgte mit Hilfe der Primer fw_ YEp24-lacZ und rev_ YEp24-lacZ aus FLO11-15/14-lacZ (Rupp et al., 1999). Das Promotorfragment wurde mittels homologer Rekombination in die XhoI geschnittene MCS des PCYC1 von pLG312n eingebracht. Überprüft durch PCR mit den Primern fw_seq_ YEp24lacZ und rev_seq_

YEp24lacZ.

Stammsammlung AG Mösch (Mark, 2008)

BHUM1444 (pLG312n_FLO11-BS1)

PCYC1-PFLO11

-[2737-2702]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS1 (aus den Oligonukleotiden 1-1n_fw und 1-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

Material

138

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1447 (pLG312n_FLO11-BS2)

PCYC1-PFLO11

-[2131-2085]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS2 (aus den Oligonukleotiden 2-1n_fw und 2-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1448 (pLG312n_FLO11-BS3)

PCYC1-PFLO11

-[1646-1610]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS3 (aus den Oligonukleotiden 3-1n_fw und 3-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1450 (pLG312n_FLO11-BS3M)

PCYC1-PFLO11-[1646-1610]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS3M (aus den Oligonukleotiden 3-2n_fw und 3-2n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1452 (pLG312n_FLO11-BS4)

PCYC1-PFLO11

-[83-49]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS4 (aus den Oligonukleotiden 4-1n_fw und 4-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1454 (pLG312n_ENA1-BS1)

PCYC1-PFLO11

-[588-551]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PENA1-Fragment ENA1-BS1 (aus den Oligonukleotiden 5-1_fw und 5-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1542 (pFI1)

3HA-RIM101, LEU2, ADE3, pUCori, f1ori, CEN6, Ampr

(Hayashi et al., 2005)

BHUM1544

(pLG669Z∆_FLO11-BS1)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[2737-2702]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS1 aus BHUM1444 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1546

(pLG669Z∆_FLO11-BS2)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[2131-2085]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS1 aus BHUM1447 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1548

(pLG669Z∆_FLO11-BS3)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11-[1646-1610]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS3 aus BHUM1448 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1550

(pLG669Z∆_FLO11-BS3M)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[1646-1610]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS3M aus BHUM1450 mit flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1552

(pLG669Z∆_FLO11-BS4)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11-[83-49]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS4 aus BHUM1452 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

139

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1554 (pLG669Z∆_ENA1-BS1)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[588-551]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment ENA1-BS1 aus BHUM1454 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert.

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1556 (pLG669Z∆_leer)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 Austausch der Region zwischen den Restriktionsschnittstellen BamHI- und XhoI durch die aus pLG669Z∆ (BHUM1243).

Stammsammlung AG Mösch (Schäfer, 2009)

BHUM1574 PPGK1-FLO11-TFLO11, , URA3, CEN

Der PPGK1 wurde mit den Primern fw-pPGK1-FLO11-45 und rev-pPGK1-FLO11-45 aus pHVX2-MUC1 (BHUM1043) amplifiziert und mittels homologer Rekombination in das XbaI/SalI geschnittene Plasmid aus BHUM0778 eingebracht.

Überprüft durch Sequenzierung mit den Primern fw_72-SalI-BHUM0778-9 und rev158bp_inclATG.

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BHUM1628 PFLO11-Nrg1-BM III mut.-FLO11, CEN, URA3 Das Nrg1-BM III im PFLO11 im Plasmid aus BHUM0778 wurde mittels „Quick-change Mutagenese“ unter Verwendung der Primer fw_FLO11_BM3mut und rev_FLO11_BM3mut mutiert.

Überprüft durch Sequenzierung mit dem Primer seq_fw_BM3mut_101bp.

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BHUM1631 (pLG312n_FLO11-BS5)

PCYC1-PFLO11

-[2330-2295]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS5 (aus den Oligonukleotiden bs5-1_fw und bs5-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

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BHUM1633 (pLG312n_FLO11-BS6)

PCYC1-PFLO11-[1800-1765]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS6 (aus den Oligonukleotiden bs6-1_fw und bs6-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

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BHUM1635 (pLG312n_FLO11-BS7)

PCYC1-PFLO11

-[1146-1111]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS7 (aus den Oligonukleotiden bs7-1_fw und bs7-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

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BHUM1637 (pLG312n_FLO11-BS8)

PCYC1-PFLO11

-[163-128]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS8 (aus den Oligonukleotiden bs8-1_fw und bs8-1n_rev generiert) über XhoI- und degenerierte Acc65I-Restriktionsschnitstelle in den Vektor pLG312n ligiert.

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BHUM1654

(pLG669Z∆_FLO11-BS5)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[2330-2295]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS5 aus BHUM1631 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

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Material

140

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1656

(pLG669Z∆_FLO11-BS6)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[1800-1765]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS6 aus BHUM1633 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

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BHUM1658

(pLG669Z∆_FLO11-BS7)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[1146-1111]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS7 aus BHUM1635 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

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BHUM1660

(pLG669Z∆_FLO11-BS8)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[163-128]-lacZ, 2 μm, Ampr, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS8 aus BHUM1637 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

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