Oligonukleotide

Material

140

Plasmid Genotyp/Beschreibung Referenz

BHUM1656

(pLG669Z∆_FLO11-BS6)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[1800-1765]-lacZ, 2 μm, Amp^r, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS6 aus BHUM1633 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

diese Arbeit

BHUM1658

(pLG669Z∆_FLO11-BS7)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[1146-1111]-lacZ, 2 μm, Amp^r, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS7 aus BHUM1635 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

diese Arbeit

BHUM1660

(pLG669Z∆_FLO11-BS8)

PCYC1(UAS∆)-PFLO11

-[163-128]-lacZ, 2 μm, Amp^r, URA3 PFLO11-Fragment FLO11-BS8 aus BHUM1637 mit

flankierenden Bereichen über BamHI- und XhoI-Schnittstelle in pLG669Z∆ ligiert. Überprüft durch PCR mit den Primern Seq_pLG312n_fw und Seq_pLG312n_rev.

diese Arbeit

141

Bezeichnung Verwendung Sequenz 5‘→3‘

fw_FLO11 FLO11-Sonde TTG TCT CAA CCA CCG TCG TTA rev-FLO11 FLO11-Sonde AAC TGG AAG AGC GAG TAG CAA

fw_NRG1 YHUM1459,

1522 & 1566

TTC CTC TCG ACC AGC ATA TTA CTA CCC TTC GCA AAC TTT CAG GCA CAG CTG AAG CTT CGT ACG C

rev_NRG1 YHUM1459,

1522 & 1566

GGA ATA GTA GTA CTG CTA ATG AGA AAA ACA CGG GTA TAC CGT CAA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_NRG1_SP YHUM1459, 1522 & 1566

TGT GGC AGA TAA GCC TTT CTA ATC rev_NRG1_SP YHUM1459,

1522 & 1566

GTA GAA AGA TGA CAC TGC CAA GAG A

fw_NRG2 YHUM1514,

1530, 1564, 1570, 1574

&1576

ACT GTT CGA AGA ACA AAA AAT ATA AAG CTT CTA CAA AAT TTC CAG CAG CTG AAG CTT CGT ACG C

rev_NRG2 YHUM1514, 1530, 1564, 1570, 1574

&1576

TAC GTT ATT TGA ATA TTT AAA TGT TTT TGG CTG AGC TCA CTC ACA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_NRG2_SP YHUM1514, 1530, 1564, 1570, 1574

&1576

CCC GAA GCC AAG AAA AAA

rev_NRG2_SP YHUM1514, 1530, 1564, 1570, 1574

&1576

TTG GTG CCG GAA ACT CAT TT

fw_RIM101 YHUM1461 &

1528

AAA ATA CTG AAA ACG GTA AAG TAG GTT TGT TTA AAT TGA CTT AAG CAG CTG AAG CTT CGT ACG C

rev_RIM101 YHUM1461 &

1528

CAG CCG CAA AGA AAC AAC TAA GAA TAA AAT ATC CGA CAA TCC ATA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_RIM101_SP YHUM1461 &

1528

GTT TTA CCA GTC CAA GTA CCC AAA TG

rev_RIM101_SP YHUM1461 &

1528

GAG CTG CAG TCT TTA TTC GTT CA

fw_SFL1 YHUM1593 TAA GAC AGC ACA AAT CAG TTA TAT AGA AAA AAA GAA GAA AAA ATC CAG CTG AAG CTT CGT ACG C

rev_SFL1 YHUM1593 AGG TGC TTT GAA CTT TTA GAC AAC TAG AGA TTA AAA AGG CAA AGA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

Material

142

Bezeichnung Verwendung Sequenz 5‘→3‘

fw_SFL1_SP YHUM1593 CAT AAA GAT GCT CGG AAT CGG rev_SFL1_SP YHUM1593 TTC TAA TAG CAC CAG CGG ATG fw_SMP1 YHUM1463 &

1524

CTC TAG ATA AGC AAA CAC AAT TAT TTT CAA AAA AAT TTC TGC TAA CAG CTG AAG CTT CGT ACG C rev_SMP1 YHUM1463 &

1524

AAG CGA ATG CTT TCT TGT AGT AAA AAG TAG CTA GAA AGC GAT TCA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_SMP1_SP YHUM1463 &

1524

GGA TCT AAT CGG CAT AAA TAT TTT CC rev_SMP1_SP YHUM1463 &

1524

GAG TGC CAC TAG TTT TCT TTG ACA G

fw_SNF1 YHUM1814 TTT TTT TTG TAA CAA GTT TTG CTA CAC TCC CTT AAT AAA GTC AAC CAG CTG AAG CTT CGT ACG C rev_SNF1 YHUM1814 CAT AAA AAA AAG GGA ACT TCC ATA TCA TTC TTT

TAC GTT CCA CCA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_SNF1_SP YHUM1814 ATT TGC TTG ATT CCG GTA GCA G rev_SNF1_SP YHUM1814 ACA TTG CTC CGC TAC AAA CGT

fw_SRB8 YHUM1602 ATC GAA AGA TTA AAA AAA GGT CTA TAG AGG TAA GCC AAT AAC GCG CAG CTG AAG CTT CGT ACG C

rev_SRB8 YHUM1602 GTT ATT GGT AAA TTT ATA ATT TAT CCA TTT GGA TAT ATT CTG AGA GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_SRB8_SP YHUM1602 TCT GCG ATT GTT CTA CGG GTT T rev_SRB8_SP YHUM1602 CAG GAA GCA TTC ATC ACC ATT G

fw_SRB10 YHUM1654 CCC AAT TGA ATT AAG GCC GCC TAG TTT TGA CGG GAG GAG AGA GAA CAG CTG AAG CTT CGT ACG C

rev_SRB10 YHUM1654 AGT GCT GTG GAA TGA AAA ATT CCA AAT ATA TAT AAA AAT AGA AGC GCA TAG GCC ACT AGT GGA TCT G

fw_SRB10_SP YHUM1654 AAC TGC AGA TGG GCT CTG GAC rev_SRB10_SP YHUM1654 GTG CTC CCC AGA TAC TAA TGA AA S3_fw_NRG1_3HA YHUM1578 &

1584

GAT AAT TGC TTG CAA CAC TAT AGA ACA CAT TTG AAA AAG GGA CAA CGT ACG CTG CAG GTC GAC

S2_rev_NRG1_3HA YHUM1578 &

1584

GGA ATA GTA GTA CTG CTA ATG AGA AAA ACA CGG GTA TAC CGT CAA ATC GAT GAA TTC GAG CTC G

fw_NRG1_Cterm YHUM1578 &

1584

TCT AAT GAT GCA TAT AAT AAG ATG GC

143

Bezeichnung Verwendung Sequenz 5‘→3‘

rev_NRG1_Cterm YHUM1578 &

1584

CAT AAT AGC CTT GTT GCA GCA CTA C S3_fw_NRG2_3HA YHUM1580 &

1586

GCA AAC AAG AAG AAA AGA AAC TGG AAG AGG AGG GAG GCT AGC AGT CGT ACG CTG CAG GTC GAC

S2_rev_NRG2_3HA YHUM1580 &

1586

TAC GTT ATT TGA ATA TTT AAA TGT TTT TGG CTG AGC TCA CTC ACA ATC GAT GAA TTC GAG CTC G fw_NRG2_Cterm YHUM1580 &

1586

AAT AAG CAA ACC GAC AAA AAC C rev_NRG2_Cterm YHUM1580 &

1586

CCC TTC CAT CAT CAT TAC CAC TTC

S3_fw_SMP1_3HA YHUM1582 &

1588

GCT AGT TCA ACT TTG AAA TCC ACG AGT TCG ACA AAC TCT CCA GAT CGT ACG CTG CAG GTC GAC

S2_rev_SMP1_3HA YHUM1582 &

1588

AAG CGA ATG CTT TCT TGT AGT AAA AAG TAG CTA GAA AGC GAT TCA ATC GAT GAA TTC GAG CTC G

fw_SMP1_Cterm YHUM1582 &

1588

TCA CCG AAA ACG GAT GTA CAA G rev_SMP1_Cterm YHUM1582 &

1588

TGT GAT ATA TTT GCT ATC TGG CTT fw_ YEp24-lacZ Herstellung des

PFLO11-URS-Sets Kapitel 2.2.6

CGA GCG TTG GTT GGT GGA TCA AGC CCA CGC GTA GGC AAT CAG GAA AGG AAA AAA TTT TTA GG Aufbau: 40 bp homolog stromaufwärts der XhoI-Schnittstelle in pLG312n und 22 bp homolog zu –[706 bis 684] stromaufwärts des ATG-Startcodons von lacZ in pLG669ZΔ (Rupp et al., 1999) rev_ YEp24-lacZ Herstellung des

PFLO11-URS-Sets Kapitel 2.2.6

AGT GTG TGT ATT TGT GTT TG

homolog zu –[29 bis 10] stromaufwärts des ATG-Startcodons von lacZ in pLG669ZΔ (Rupp et al., 1999)

fw_seq_ YEp24lacZ Sequenzierung von pLG669Z∆

(BHUM0643) Konstrukten

AAA CTC ACA AAT TAG AGC

rev_seq_ YEp24lacZ Sequenzierung von pLG669Z∆

(BHUM0643) Konstrukten

CGG GCC TCT TCG CTA TTA

Seq_pLG312n_fw Sequenzierung von pLG312n (BHUM1243) Konstrukten

GAT GAC CGA AGA CCA AAG C

Material

144

Bezeichnung Verwendung Sequenz 5‘→3‘

Seq_pLG312n_rev Sequenzierung von pLG312n (BHUM1243) Konstrukten

TAT GTG TCA GCA CTA AAG TTG

1-1n_fw BHUM1444

(FLO11-BS1)

TCG AGC TCT TTC CGT GAG TTC CCC TCT TCC TCT CAC TGC ACA

1-1n_rev BHUM1444

(FLO11-BS1)

GTA CTG TGC AGT GAG AGG AAG AGG GGA ACT CAC GGA AAG AGC

2-1n_fw BHUM1447

(FLO11-BS2)

TCG AGA CTA GTC CTT TTT GTC CCC TAA TGT ATC CCT CAT TTC ATA CCG TCG TA

2-1n_rev BHUM1447

(FLO11-BS2)

GTA CTA CGA CGG TAT GAA ATG AGG GAT ACA TTA GGG GAC AAA AAG GAC TAG TC

3-1n_fw BHUM1448

(FLO11-BS3)

TCG AGG CTG TGC GGG AAA ACG GAC CCT AAC ACG AAT GTG AAT A

3-1n_rev BHUM1448

(FLO11-BS3)

GTA CTA TTC ACA TTC GTG TTA GGG TCC GTT TTC CCG CAC AGC C

3-2n_fw BHUM1450

(FLO11-BS3M)

TCG AGG CTG TGC GGG AAA ACG GAT TCT AAC ACG AAT GTG AAT A

3-2n_rev BHUM1450

(FLO11-BS3M)

GTA CTA TTC ACA TTC GTG TTA GAA TCC GTT TTC CCG CAC AGC C

4-1n_fw BHUM1452

(FLO11-BS4)

TCG AGT TCA TCA GTT ATT ATC CCT CGT CAT GTT GTG GTT CA

4-1n_rev BHUM1452

(FLO11-BS4)

GTA CTG AAC CAC AAC ATG ACG AGG GAT AAT AAC TGA TGA AC

5-1n_fw BHUM1454

(ENA1-BS1)

TCG AGG TTA CAT TGT GAG TAC AGG GTC TTA AAC ATC GCC GTG CA

5-1n_rev BHUM1454

(ENA1-BS1)

GTA CTG CAC GGC GAT GTT TAA GAC CCT GTA CTC ACA ATG TAA CC

bs5-1_fw BHUM1631

(FLO11-BS5)

TCG AGT ACA GTT GAG CAT CTC AGG GCC AGC GAC AAA TAT AAA

bs5-1_rev BHUM1631 (FLO11-BS5)

GTA CTT TAT ATT TGT CGC TGG CCC TGA GAT GCT CAA CTG TAC

bs6-1_fw BHUM1633

(FLO11-BS6)

TCG AGA CCA CCC CAA AAC GGT CCC TTG CAT GCA TTG AGG TCA

bs6-1_rev BHUM1633 (FLO11-BS6)

GTA CTG ACC TCA ATG CAT GCA AGG GAC CGT TTT GGG GTG GTC

bs7-1_fw BHUM1635

(FLO11-BS7)

TCG AGT ATT TCC CTA TCG AAG TGG GTC CTT TTT GTC TTT AGA

bs7-1_rev BHUM1635 (FLO11-BS7)

GTA CTC TAA AGA CAA AAA GGA CCC ACT TCG ATA GGG AAA TAC

145

Bezeichnung Verwendung Sequenz 5‘→3‘

bs8-1_fw BHUM1637

(FLO11-BS8)

TCG AGC AGT ACA AGT TGT TGA AGG GTT CCC AAT TGA TAA AAA

bs8-1_rev BHUM1637 (FLO11-BS8)

GTA CTT TTT ATC AAT TGG GAA CCC TTC AAC AAC TTG TAC TGC

fw-pPGK1-FLO11-45 BHUM1043 AGC TAT GAC CAT GAT TAC GCC AAG CTT GCA TGC CTG CAG GTC GAC ATC TTG TTT TGC AAG TAC CAC

Aufbau: 45 bp homolog stromaufwärts der SalI-Schnittstelle (inkl.) im Plasmid aus BHUM0779 und 21 bp homolog vor dem PPGK1-Bereich in pHVX2-MUC1

rev-pPGK1-FLO11-45 BHUM1043 AAA TAG AAG CGA AAG GAC CAA ATA AGC GAA TGG AAA TGG TCT TTG CAT TGT TTT ATA TTT GTT GTA AAA AGT A

Aufbau: 45 bp stromabwärts FLO11 (inkl. ATG) im Plasmid aus BHUM0779 und 25 bp homolog stromaufwärts des PPGK1 (exkl. ATG) in pHVX2-MUC1

fw_72-SalI-BHUM0778-9

Sequenzierung BHUM1574

TTG TGA GCG GAT AAC AAT TTC rev158bp_inclATG Sequenzierung

BHUM1574

ATG TGC CAA TTG AAG TCT AAG TTG G

fw_FLO11_BM3mut BHUM1628 GTG CGG GAA AAC GGA TTC TAA CAC GAA TGT G rev_FLO11_BM3mut BHUM1628 CAC ATT CGT GTT AGA ATC CGT TTT CCC GCA C seq_fw_BM3mut_101

bp

Sequenzierung BHUM1628

GTC ATG CAC CTG CAG TACT

Methoden

146

5 Methoden

5.1 Kultivierung der Mikroorganismen

Im Dokument Regulation der zellulären Adhäsion von Saccharomyces cerevisiae durch pH und den Rim101-Signalweg (Seite 158-164)